藏药独一味对肺结核患者Th1/Th2平衡调节作用的研究

目的探讨藏药独一味对肺结核病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的影响。方法葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离20例肺结核病患者和15例健康对照者PBMC。按加入刺激物的不同,将每份标本分为:RPM I1640组、PPD组、PPD+独一味组。加入相应刺激物后培养72h,收集上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平。结果与PPD组相比,加入独一味能有效促进肺结核病患者及健康对照者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05),IL-4水平无差异(P>0.05)。结论独一味通过诱导IFN-γ分泌,调节Th1/Th2平衡,对结核分枝杆菌感染患者发挥保护性的免疫反应。

不同退化等级草地中独一味根系分泌物初步研究

为比较不同等级退化草地独一味根系分泌物差异,采用土培法收集不同退化程度草地中独一味根系分泌物,测定其总有机碳、总氮,采用GC-MS对脂溶性成分作定性分析,比较其种类和相对含量差异。结果表明,极度退化样地独一味根分泌总碳量为2.480 mg·L^(-1)·h^(-1),分泌总氮量为2.189 mg·L^(-1)·h^(-1);轻度退化样地独一味根分泌总碳量为2.829 mg·L^(-1)·h^(-1),分泌总氮量为3.429 mg·L^(-1)·h^(-1)。分别从两样地中鉴别出成分9种和18种,其中相同成分6种。由此可知,极度退化样地独一味根总碳、总氮量、分泌物成分种类和相同成分峰面积百分比均比轻度退化样地低,且差异较大。

HPLC梯度洗脱法测定山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯在独一味中含量

目的建立独一味中山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯的HPLC检测方法。方法色谱柱Dikma platisil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,以乙腈-水进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长235 nm。结果山栀苷甲酯进样量在0.023 0～ 3.450 0μg范围内呈良好线性关系,r=0.999 3,8-O-乙酰山栀苷甲酯进样量在0.041 82～ 6.273μg范围内呈良好线性关系,r=0.999 6。山栀苷甲酯平均回收率为99.79%,RSD为1.63%,8-O-乙酰山栀苷甲酯平均回收率为99.62%,RSD为1.79%。结论 HPLC测定独一味中山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯结果准确可靠,快速,灵敏,重现性好。

不同播期和激素浓度对独一味幼苗生长和药用成分的影响

为初步探究不同播期和赤霉素浓度对独一味幼苗生长和药用成分的影响。本试验以草炭土、蛭石和珍珠岩为基质,分别选取7个不同播种日期及4种赤霉素(GA_(3))浓度,测定其对出苗率、成活率、真叶比例、幼苗生长参数及地上部分次生代谢产物含量的影响,并采用主成分分析和模糊隶属函数综合评价,筛选出最适宜播种条件。6月17日播种出苗率和成活率最高,除4月播种种子发芽较慢外,种子发芽时间在10~14d;100mg/L GA_(3)溶液处理出苗率和成活率均为最高;种子浸泡GA_(3)可使长真叶时间提前,同时GA_(3)浓度越高,真叶增加越显著;4月底和6月底播种对根系生长有利;高浓度GA_(3)有利于根系生长,而适宜的GA_(3)浓度有利于地上、地下生物量积累;4月底和7月底播种山栀苷甲酯、连翘酯苷B和胡麻属苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯含量较高;GA_(3)浓度与各药用成分含量成反比,表现为低浓度促进,高浓度抑制。主成分分析和模糊隶属函数表明,4月底至6月中旬播种更有利于种子萌发、真叶生长和地上部分代谢产物等的积累;100mg/L GA_(3)浓度处理种子更有利于独一味幼苗生长,此结果可为独一味大棚育苗技术研究提供参考。

基于谱效关系的独一味抗小鼠耳肿胀作用的药效物质基础研究

目的:基于谱效关系研究并经实验验证,阐明独一味抗炎药效物质基础。方法:对12批不同来源的独一味进行HPLC分析,建立指纹图谱。基于小鼠耳肿胀模型,测定各批次独一味水提物的耳肿胀率及其抑制率、血清中TNF-α、IL-6的含量。运用灰色关联度法及文献对比,分析独一味水提物中与抗炎药效关联较强的成分,验证其在独一味水提物抗炎药效中的贡献度。结果:建立了独一味水提物HPLC指纹图谱,共标定了16个共有峰,通过对照品指认,辨识了山栀子苷甲酯、8-O-乙酰山栀子苷甲酯、连翘酯苷B和木犀草苷等7个特征峰成分,除胡麻属苷、芦丁含量较低外,其余5种成分均有较高含量。二甲苯致耳肿胀试验结果表明,12批独一味水提物均有抑制耳肿胀作用。通过灰色关联度法和文献对比研究分析,推测山栀子苷甲酯、8-O-乙酰山栀子苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷与独一味水提物抗炎作用密切相关,对此4种成分进行含量测定,含量测定结果依次为(15.319±4.228)、(26.156±7.174)、(14.376±5.817)、(12.756±2.570)mg/g。以对照品模拟活性成分配比构建药效对比验证实验确认了这一推测。结论:山栀子苷甲酯、8-O-乙酰山栀子苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷可能为独一味水提物抗炎药效的关键成分群。

HPLC法测定独一味根中环烯醚萜苷和苯乙醇苷

目的建立HPLC法,同时测定独一味根中4种环烯醚萜苷胡麻属苷、山栀苷甲酯、7,8-dehydropenstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯和2种苯乙醇苷连翘酯苷、毛蕊花糖苷。方法采用高效液相色谱法,Waters Symmetry柱(100 mm×3.5 mm,3.5μm),柱温25℃,流动相为甲醇-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min,检测波长235、332 nm。结果胡麻属苷在0.236～1.410μg、山栀苷甲酯在0.440～2.640μg、7,8-dehydropenstemoside在0.094～0.564μg、8-O-乙酰山栀苷甲酯在0.750～4.500μg、连翘酯苷在0.698～4.180μg、毛蕊花糖苷在0.455～2.730μg线性关系良好,回收率均在96.75%～103.97%,RSD均小于2%。结论此方法同时测定了独一味根中6种化学成分,方法分离度好,快速,简便,结果稳定。

外源Ca^(2+)对藏药独一味幼苗速冷冻抗性的效应

利用不同浓度CaCl2喷施独一味两对叶龄幼苗,然后分别迅速置不同低温(4℃、0℃和-4℃)处理48 h,以28℃为对照,处理结束测定幼苗叶片叶绿素含量、细胞膜稳态性、抗氧化酶活性和膜质过氧化等指标的变化,旨在揭示外源Ca2+对提高独一味幼苗速冷冻抗性的作用效应,为独一味人工驯化栽培提供理论依据。结果表明,独一味幼苗对0℃及以上低温速冷冻表现较强的适应性。喷施15 mmol.L-1的CaCl2能显著诱导增强独一味幼苗叶中SOD、POD活性,降低膜质过氧化程度,增强细胞膜系统的稳定性,有效改善独一味幼苗的速冷冻抗性,缓解速冷冻胁迫对幼苗的伤害,使叶绿素含量维持在较高水平,为适宜条件下迅速恢复生长奠定了良好基础。

基于3S技术的四川省独一味生长适宜区研究

目的利用3S技术寻找独一味Lamiophlomis rotata在四川省的生长适宜区,为独一味资源的合理开发与保护提供依据。方法通过野外实地考察和查阅相关文献的方式,确定独一味生境特征,利用3S技术中的遥感技术(RS)、地理信息系统(GIS)软件提取适宜独一味生长的气候、土壤、地形地貌、群落等环境因子,对各个环境因子进行空间叠加分析,确定独一味在四川省的生长适宜区分布,统计适宜区面积,并结合全球定位系统(GPS)实地调查进行验证。结果验证结果表明,运用3S技术提取的独一味生长适宜区与实际独一味生长分布基本吻合。四川省独一味适宜区主要分布在阿坝县、理塘县等20个县范围内,适宜区总面积约135 200 hm2,占区域国土面积的0.71%。结论在适宜区范围内进行独一味种植和保护,将有利于独一味资源的合理开发与持续利用;该研究方法具有科学性、准确性等特点,可以将其推广到其他中药材适宜区研究领域。