响应面优化超声微波辅助提取千里香总黄酮工艺及其抗氧化活性研究

为进一步研究千里香总黄酮的功能和药用价值,本研究以千里香为对象,通过对提取条件(料液比、超声功率和微波功率)的考察,探究其总黄酮的得率及其影响因素。以试验结果为参考,利用响应面试验对千里香总黄酮超声微波联合提取工艺进行筛选,获得最优提取条件,并对千里香进行体外抗氧化活性研究。结果表明最优提取条件为,料液比为1:31 g/mL,超声功率303 W,微波功率411 W,提取时间为30 min。试验中千里香总黄酮得率为9.53%,与预测值9.67%相接近。抗氧化实验中,在一定浓度范围内,千里香总黄酮对两种自由基均有较高清除率,且与其浓度成正相关,表明其具有良好的抗氧化活性。响应面法优化超声波微波辅助提取千里香总黄酮的工艺研究具有可行性,且千里香总黄酮具有良好的抗氧化活性,为千里香的综合利用及形成产业化提供一定的理论及技术支持。

布渣叶总黄酮提取物血清药物化学初步研究

目的:分析鉴定口服布渣叶总黄酮提取物后大鼠血中移行成分,揭示布渣叶总黄酮提取物的药效物质基础。方法:应用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术建立布渣叶总黄酮提取物以及大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后含药血清样品的分析方法,通过对比空白血清、含药血清、布渣叶总黄酮提取物三组样品的成分异同,确定大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后的血中移行成分。结果:大鼠口服布渣叶总黄酮提取物后(0.25g/kg)在血中分析鉴定了14个血中移行成分,其中5个为新产生的代谢产物,9个成分为布渣叶总黄酮提取物的原型成分。结论:血中移行成分及代谢产物可能为布渣叶总黄酮提取物的体内直接作用物质。

大孔吸附树脂富集纯化布渣叶总黄酮的研究

目的:对大孔树脂富集纯化布渣叶总黄酮的工艺条件及参数进行优化。方法:先以总黄酮比吸附量和解吸率为指标,通过静态和动态吸附-解吸附试验筛选出合适的树脂;再通过单因素试验考察最佳洗脱剂浓度,利用均匀设计对富集纯化工艺参数进行优化;并用液相色谱对处理前后的试样进行定性分析。结果:D101树脂具有良好的吸附分离性能;选择70%乙醇为洗脱剂,以总黄酮收率为指标,优选的工艺参数为:上样流速1.0BV/h、洗脱流速2.0BV/h、上样浓度7.88 mg/mL、洗脱剂用量2.0BV和pH值4.8,其收率达到90.18%,纯度54.37%;以总黄酮纯度为指标,优化的工艺参数为:上样流速1.0BV/h、洗脱流速2.0BV/h、上样浓度2.0 mg/mL、洗脱剂用量2.8BV和pH值7.8,其纯度为61.77%,收率80.25%。色谱分析结果表明,大孔树脂处理前后布渣叶总黄酮主成分相同。结论:D101大孔树脂吸附分离工艺能有效地对布渣叶总黄酮进行富集。

表面活性剂协同微波提取布渣叶总黄酮

采用表面活性剂协同微波法提取布渣叶中总黄酮,考察表面活性剂的种类和浓度、微波辐射时间、料液比、pH等因素对提取总黄酮的影响,结合正交实验进行优化。结果表明:最佳工艺条件为表面活性剂选择0.12%的十二烷基硫酸钠,微波辐射2.5 min,料液比1∶35 g/mL,pH 5.5。在最佳工艺条件下,黄酮得率为11.33%。与其他提取方法相比,文中方法具有节能省时、黄酮得率高等优点。

布渣叶的化学成分研究

目的研究布渣叶的化学成分。方法采用硅胶、凝胶Sephadex LH-20、反相ODS柱色谱以及制备性高效液相色谱等多种方法对布渣叶（Microcos paniculata L.）进行分离纯化,并结合光谱学方法鉴定化合物的结构。结果从布渣叶中分离得到12个化合物,分别鉴定为异鼠李素①、山萘酚②、异香草酸③、对香豆酸④、阿魏酸⑤、脱落酸⑥、牡荆苷⑦、异牡荆苷⑧、水仙苷⑨、异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷⑩、异佛莱心苷（11）、表儿茶素（12）及山萘酚3-O-β-D-（6-O-反式对羟基桂皮酰）葡萄糖苷（13）。结论其中化合物1~6以及化合物12~13为首次从该植物中分离得到。

正交试验法优化布渣叶总黄酮提取工艺的研究

目的研究布渣叶总黄酮的超声波提取和溶剂回流提取工艺。方法以总黄酮得率为指标,利用单因素试验确定提取溶剂,通过正交试验法优化提取工艺参数。结果以乙醇为溶剂,超声波提取的最佳条件为:70%(体积分数)乙醇,固液比1∶30,30℃、超声波(360W,40kHz)提取2次,每次20min,总黄酮得率为10.214%;回流提取的最佳工艺为:固液比1∶25,90℃回流提取2次,每次30min,总黄酮得率为9.735%。结论两种提取工艺效果相当。

不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由基活性研究

目的测定13个不同产地布渣叶样品中总黄酮含量及其清除自由基活性。方法采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH体系比色法测定总黄酮含量,采用1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH.)、羟自由基(.OH)和超氧自由基(O2.-)等模型测定布渣叶总黄酮清除自由基活性。结果各产地总黄酮含量差异较大,其中以广西来宾样品含量最高,达到了55.22 mg.g-1,平均为27.06 mg.g-1。各产地总黄酮样品均具有清除DPPH.活性,其自由基清除率随供试品总黄酮浓度的增大而提高,呈现一定的量效关系;但其清除.OH和O2.-活性与总黄酮浓度关系不明显。结论不同产地布渣叶总黄酮含量差异较大;各产地布渣叶总黄酮均具有较好的自由基清除活性。

大孔吸附树脂对布渣叶总黄酮的富集纯化特性研究

目的考查12种大孔吸附树脂对布渣叶总黄酮的吸附与解吸附特性。方法以总黄酮比吸附量和解吸附率为指标,通过静态和动态吸附-解吸附试验进行筛选,对性能较好的树脂进行吸附动力学研究。结果D101、NKA和HPD300树脂的静态比吸附量分别达到18.863、18.482和18.436 mg.g-1,静态解吸率分别为95.92%、89.01%和91.14%;其动态比吸附量分别为12.667、12.271和12.164 mg.g-1,动态解吸附率分别为94.51%、90.24%和91.89%。D101、NKA和HPD300的Langmu ir吸附等温线拟合方程的R2值分别为0.998、0.980和0.997;其Freund lich吸附等温线拟合方程的R2值分别为0.940、0.933和0.938。结论D101、NKA和HPD300大孔树脂对布渣叶总黄酮具有较好的吸附分离性能,其吸附过程符合Langmu ir模型。

分光光度法测定破布叶中总黄酮

利用分光光度法测定了破布叶的叶、茎、果中的总黄酮含量,结果表明,破布叶叶、茎、果中的总黄酮质量分数分别为16．94％、5．15％和1．52％。回归方程为A=11．4486C-0．00543,r=0．9996。叶、茎、果的平均加标回收率分别为102．3％、97．6％和92．6％,RSD依次为1．01％、1．94％和2．76％(n=5)。本法操作简便、可行、重现性好。

布渣叶中总黄酮与牡荆苷质量分数的季节动态变化

目的分析布渣叶中总黄酮和牡荆苷质量分数随季节的动态变化规律,探讨采收期对其质量的影响。方法以广东省阳东县大八镇太安村某布渣叶居群为研究对象,采集2010年12月至2011年11月间共12个月的样品,采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH体系比色法测定总黄酮质量分数,HPLC法测定牡荆苷质量分数,采用DPPH模型测定其提取物清除自由基活性。结果 12份样品的牡荆苷质量分数最高为0.068 4%(4月),最低为0.008 7%(10月),平均值为(0.034 9±0.013 4)%;总黄酮质量分数最高为16.9%(8月),最低为3.21%(3月),平均值为(9.975±3.425)%;9月份样品提取物清除DPPH自由基活性最强,其EC50为1.461 9×10-3mg.mL-1,4月份样品提取物清除自由基活性最弱,其EC50为22.820 1×10-3mg.mL-1。结论布渣叶中总黄酮及牡荆苷的质量分数随季节的变化较大,整体上以4至8月较高。

布渣叶总黄酮微丸的制备工艺研究

目的制备布渣叶总黄酮微丸,并进行质量评价。方法采用挤出滚圆法制备布渣叶总黄酮微丸,以微丸的物理性质及总黄酮的溶出度为考察指标,采用单因素考察、正交设计筛选最优处方及工艺条件。结果优选得到的最佳处方为:MCC与乳糖(质量比3∶1)为填充剂,质量分数5%PVP K30(体积分数30%乙醇)为黏合剂,质量分数10%CMS-Na作为崩解剂,载药量为30%;制备工艺为:挤出速度200 r·min-1、滚圆转速1 000 r·min-1、滚圆时间8 min;制得的微丸圆整度好、大小均匀、收率77.77%、90 min内溶出97.61%。结论挤出滚圆法可以用于制备中药微丸,该工艺简便可行,所得微丸质量好。

布渣叶总黄酮大孔吸附树脂纯化工艺研究

目的:确定布渣叶总黄酮(total flavonoids in Microcos paniculata L.,TFMP)的大孔吸附树脂纯化工艺参数。方法:采用单因素试验法筛选适宜的大孔树脂;并对其纯化工艺条件进行优化。结果:D101分离TFMP的工艺条件为上柱药液浓度为0.15 g/m L,上柱流速0.5 BV/h,上样体积8.5 BV,树脂柱径高比为1∶8,以5 BV水洗脱,洗脱溶剂为80%的乙醇,洗脱流速1 BV/h,洗脱体积3.75 BV,大孔树脂可重复利用5次,TFMP纯化后含量达84.09%,精制度达220.03%。结论:D101可以用于富集,纯化TFMP。

穿心莲指纹图谱的实验研究

目的:建立代表穿心莲的指纹特征指纹图谱检测方法。方法:在特定的色谱条件下,采用高效液相色谱法测定穿心莲药材的指纹图谱。结果:通过高效液相色谱法建立了稳定性好、精密度高、重复性良好的指纹图谱检测方法。结论:建立的穿心莲指纹图谱检测方法可用于的其药材鉴别及质量控制。

布渣叶总黄酮离子液体协同超声辅助提取工艺考察及其调血脂活性研究

目的探讨布渣叶总黄酮(total flavones from Microcos paniculata,MPTF)的高效绿色环保提取方法,并考察其调血脂活性。方法采用离子液体协同超声辅助提取MPTF,对提取工艺进行单因素实验及正交试验考察;采用高脂饲料造模,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组(瑞舒伐他丁钙片5.2 mg/kg)、高脂模型组和MPTF低、中、高剂量组(ig给药MPTF 300、600、900 mg/kg),每组各10只,测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平。结果离子液体超声辅助提取MPTF的最佳工艺条件:离子液体为[BMIM]Cl,浓度为0.30 mol/L,料液比为1∶40,提取溶剂为60%乙醇水溶液,提取时间为30 min,提取温度为50℃;验证实验结果表明,该提取工艺所得总黄酮提取率高,工艺稳定。调血脂实验结果表明,MPTF各剂量组均能够降低TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平(P<0.05),且随着MPTF剂量增加各指标变化趋势明显,具有一定的剂量依赖性。结论离子液体协同超声辅助提取MPTF工艺稳定可行,为离子液体协同超声辅助提取中药中难溶性有效成分提供参考;MPTF提取物具有较好的调血脂作用。

紫外分光光度法测定破布叶枝和叶总异黄酮的含量

测定破布叶枝、叶中总异黄酮的含量。以染料木素为对照品,产生反应,采用紫外-可见分光光度法在266nm波长处测定样品的吸光度。染料木素对照品在0.20～1.60g/mL范围内呈良好线性关系,回归方程为C=0.0039A,r=0.9999。破布叶枝和叶中的总异黄酮含量分别为0.07%和0.23%。本法操作简便,结果可靠,重复性好,可用作破布叶中总异黄酮的含量测定。

布渣叶黄烷酮-2-羟化酶基因cDNA克隆及其生物信息学和表达分析

目的从布渣叶中克隆黄酮碳苷合成途径关键酶黄烷酮-2-羟化酶(flavanone 2-hydroxylase,F2H)基因,构建原核表达载体,对其进行生物信息学和表达模式分析。方法根据布渣叶转录组数据中注释为F2H的Unigene设计特异性引物,利用PCR法扩增Mp F2H基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),基于在线工具对c DNA序列进行生物信息学分析。同时,依据F2H序列,设计特异引物,采用RT-q PCR方法对其在芽、叶、枝、花、果等组织中的表达进行测定。结果 Mp F2H基因ORF全长为1 557 bp(Genbank登录号KY652921),编码518个氨基酸;相对分子质量54 500,理论等电点5.49,含有信号肽,不含跨膜域,可能定位于叶绿体。同时,Mp F2H基因在不同组织中均有表达,其中在叶中表达量最高,在枝和花中表达量最低。结论 Mp F2H基因在不同组织中表达量差异较大。克隆了Mp F2H基因c DNA,构建了其原核表达载体p ET30a-Mp F2H,为Mp F2H基因的原核表达和功能验证奠定了基础。

酶解法辅助提取布渣叶总黄酮的工艺优选

目的:优选酶解法辅助提取布渣叶总黄酮的工艺条件。方法:以总黄酮提取率为指标,采用单因素试验、正交试验法,分别考察酶种类、酶用量、p H值、酶解时间及乙醇浓度对提取工艺的影响。结果:最佳工艺条件为复合酶(纤维素酶∶果胶酶=1∶1)用量1%,乙醇浓度60%,酶解1h,总黄酮提取率为20. 90%,较未经酶解法提高了4. 85%。结论:优选的工艺简单高效,为布渣叶总黄酮的开发利用提供了实验依据。

膜分离技术在布渣叶黄酮类化合物提取中的应用

目的:研究膜分离技术对布渣叶提取液中总黄酮成分的纯化效果。方法:以滤液中黄酮类成分的保留率及药液的膜通量为考察指标,考察不同孔径膜片和操作压力对膜分离指标的影响。结果:控制操作压力为3MPa,使滤液通过孔径为30k的超滤膜片,得到的透过液黄酮类化合物保留率为85.28%,膜通量较高。结论:采用膜分离技术纯化布渣叶总黄酮,具有一定的应用价值。