红芪超滤物对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的观察红芪超滤物(UEMHP)对人肝癌HepG2细胞辐射增敏的作用,并探讨其可能机制。方法用CCK-8法检测UEMHP对HepG2细胞生长抑制的影响;克隆形成实验检测UEMHP对HepG2的辐射增敏作用;通过流式细胞仪检测HepG2细胞周期分布的变化和凋亡率;采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达。结果在5～50mg/L浓度范围内,UEMHP对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);加药辐射组与单纯辐射组比较,克隆存活曲线显示加药辐射组各剂量点的存活分数均低于单纯辐射组(P<0.05),UEMHP能抑制HepG2细胞克隆形成,对HepG2有辐射增敏作用;流式细胞仪检测显示UEMHP具有去G2/M周期阻滞效应,加药辐射组细胞凋亡率(21.42%±3.74%)高于对照组(5.35%±0.41%)、单纯药物组(10.36%±1.75%)和单纯辐射组(10.58%±2.01%,P<0.01);RT-PCR显示加药辐射组Survivin mRNA(0.31±0.02)表达低于对照组(0.82±0.06)和单纯辐射组(0.58±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 UEMHP对人肝癌HepG2细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能通过下调SurvivinmRNA的表达与促进细胞凋亡有关。

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bc l-2、bax蛋白表达的影响。方法用高浓度的过氧化氢(400μmol/L)在W istar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗。光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bc l-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bc l-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bc l-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义。与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bc l-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bc l-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义。低浓度药物治疗组则对bc l-2、bax表达无显著改变。结论当归红芪超滤膜提取物可通过上调bc l-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用。

当归红芪超滤物对心肌细胞Hsp70表达的影响

目的:探讨当归红芪超滤物对凋亡心肌细胞热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,阐明当归红芪超滤物对心肌细胞的抗氧化作用。方法:原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞用高浓度的H2O2(400μmol.L-1)建立细胞凋亡模型,用不同浓度(3.75、7.50和15.00g.L-1)的当归红芪超滤物进行干预,倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞搏动频率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,分别用RT-PCR技术和Western blotting技术检测心肌细胞中Hsp70基因及蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,H2O2损伤组心肌细胞搏动频率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01);与H2O2损伤组比较,当归红芪超滤物高、中、低剂量组心肌细胞搏动频率显著增加,但低于对照组(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:当归红芪超滤物具有抗氧化损伤心肌细胞凋亡的作用,且可上调心肌细胞Hsp70的表达。

当归红芪超滤物抗辐射致心肌细胞损伤的作用及机制

目的探讨当归红芪超滤物抗辐射致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制。方法用X线照射Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立辐射损伤模型,用不同浓度的当归红芪超滤物进行干预,实验分正常对照组、辐射损伤模型组、当归红芪超滤物不同浓度(3、6、9 mg·mL-1)干预组(UFE-AH)。MTT法检测各组心肌细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性,免疫组化法观测各组细胞Bax的表达,蛋白印迹半定量测定各组细胞Bax蛋白的表达。结果与辐射损伤模型组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),Bax表达显著降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物具有拮抗辐射致心肌细胞损伤的作用,其机制与清除自由基有关。

当归红芪超滤膜提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的观察并评价当归红芪超滤膜提取物(简称中药合剂)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived stroma cells,BMSCs)分化为神经样细胞的效果。方法体外培养小鼠BMSCs后加入药物并分为5组:空白组、6g/L中药合剂组(简称低剂量组)、12g/L中药合剂组(简称高剂量组)及3g/L中药合剂联合0.5mmol/Lβ-巯基乙醇用药组(简称联合组)、β-巯基乙醇阳性对照组(简称对照组)。通过甲苯胺蓝染色观察各组诱导分化为神经样细胞的效果,应用免疫组织化学及免疫荧光技术检测分化后细胞所表达的神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)、微管结合蛋白2(microtubule-associated protein-2,MAP2)及神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)5种神经特异性蛋白的差异,并应用流式细胞分析技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞生长周期的变化。结果诱导后细胞形态发生神经样细胞改变,两个中药合剂组的形态特征性均弱于联合组和对照组;除空白组外,上述5种蛋白在各组的表达为阳性,表达程度均为对照组最高(P<0.05),联合组次之(P<0.05);经流式细胞术检测细胞增殖率比较:对照组最低(P<0.05),高、低剂量组较高(P<0.05),联合组次之(P<0.05)。结论中药合剂可较为有效地诱导小鼠BMSCs分化为神经样细胞,诱导能力虽弱于对照组,但对于分化后细胞的增殖作用明显。联合组可有效诱导BMSCs分化为神经样细胞并使细胞有较高的增殖能力,可能是用于临床研究目前较为理想的用药途径。

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的探讨当归红芪超滤物对H2O2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法用高浓度的H2O2(400μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15mg/mL)进行干预。在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用MTT法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的量。RT-PCR技术检测caspase-3、hsp70基因在心肌细胞中的表达情况。结果当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞LDH、CK、MPO、MDA量显著降低(P<0.01),SOD活性显著提高(P<0.01),caspase-3基因表达显著降低(P<0.05),hsp70基因表达显著提高(P<0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性。结论当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调hsp70表达、抑制caspase-3活性有关。