丙型肝炎抗体S／CO值与RNA定量检测结果相关关系的初步探讨

目的探讨免疫发光法检测丙肝抗体S／CO（signaltocutoff）值与HCVRNA检测阳性率之间的关系。方法对1111例丙肝患者行HCV抗体和HCVRNA的实验室检测，以抗体水平进行分段统计，并以HCVRNA检测结果为参考采用ROC曲线评价S／CO值对丙肝患者的诊断效能。结果HCVRNA阳性率随s／co值的增大而升高，S／CO值在0～1时．HCVRNA阳性率为1．09％；在1～5时，阳性率为5．06％；在5～8时，阳性率为24．5％；8～10时，为50％；〉10，阳性率为100％。同时发现，S／CO值较低时HCVRNA阳性病例多为HIV／HCV共感染患者。根据ROC曲线可知，S／CO最佳诊断界值为6．94．此时诊断灵敏度和特异度均为93％。结论丙肝抗体S／CO值与HCVRNA检测结果较一致，临床实践中可参考S／CO值，并充分考虑患者实际情况，以合理选择检验项目，提高诊断效能。

丙型肝炎抗体S／CO值与RNA定量检测结果相关关系的初步探讨

目的探讨免疫发光法检测丙肝抗体S／CO（signaltocutoff）值与HCVRNA检测阳性率之间的关系。方法对l111例丙肝患者行HCV抗体和HCVRNA的实验室检测，以抗体水平进行分段统计，并以HCVRNA检测结果为参考采用ROC曲线评价S／C0值对丙肝患者的诊断效能。结果HCVRNA阳性率随S／C0值的增大而升高，s／co值在O～1时，HCVRNA阳性率为1．09％；在1～5时，阳性率为5．06％；在5～8时，阳性率为24．5％；8～10时，为50％；〉10，阳性率为100％。同时发现，S／CO值较低时HCVRNA阳性病例多为HIV／HCV共感染患者。根据ROC曲线可知，s／co最佳诊断界值为6．94，此时诊断灵敏度和特异度均为93％。结论丙肝抗体s／co值与HCVRNA检测结果较一致，临床实践中可参考S／C0值，并充分孝虑患者实际情况。以合理选择检验项目，提高诊断效能。

以主要流行EV71 VP1基因高度保守区为靶点的TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

在我国,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)C4型是引起手足口病的主要流行基因型。为建立EV71C4型TaqMan荧光定量PCR检测方法,在C4型EV71VP1基因的高保守区,设计合成引物和TaqMan探针,将包含此目的区段的基因片段克隆到pcDNA3.1载体中,通过体外转录获得标准品,并以梯度稀释的标准品为模板建立工作曲线,进而在优化反应条件的基础上建立TaqMan荧光实时定量PCR检测方法。实验中,所设计引物、探针的高度保守性保证了C4型EV71的高效扩增。经反应条件优化,引物和探针的最佳工作浓度分别为300 nmol/L和200 nmol/L,在1×10~301×10~3拷贝数检测范围内具有良好的线性关系(R^2=1),灵敏度可达到10~2 copies/μL。通过对该方法进行检验发现,批间和组间重复实验的变异系数均小于0.5%,且该方法对柯萨奇A16(coxsackievirus A16,CA16)柯萨奇B1(coxsackievirus B1,CB1)人轮状病毒(human rotavirus,HRV)单纯疱疹病毒2型(herpes Simplex virus type 2,HSV-2)均无交叉反应,对6份EV71阳性样本检出率为100%。以上数据表明,文中建立的TaqMan荧光定量PCR方法可为我国主要流行C4型EV71感染的快速诊断及疾病监控提供有效途径。

3种RNA提取方法在血清丙型肝炎病毒RNA定量检测中的性能评价

目的比较3种方法对血清HCV RNA的提取性能,并对其作方法学评价,揭示RNA提取技术对HCVRNA定量的影响。方法使用QIAamp Viral RNA Mini Kit(Q法),NucliSens miniMag系统(M法)和匹基(PG)丙型肝炎病毒定量试剂盒自带RNA提取方法(P法)进行血清HCV RNA提取,实时荧光RT PCR定量检测,对77例临床血清标本进行了提取检测,同时设计了方法学评价实验,从准确度,重复性,线性和灵敏度方面评价3种方法。结果77例临床标本的M、Q和P法阳性率分别是85.7%、84.4%和36.3%;25例共同阳性标本中,M和Q法的CT值分别比P法平均低7.5和9.35,表现出高于P法的提取效率和RNA质量;M和Q法的标准变异指数(S.D.I.)绝对值均<2,P法S.D.I.绝对值>2;M法平均CV为40.0%,Q法为71.0%,P法>100.0%;M法表现最佳的线性(R>0.99),M、Q和P法的最低检测限分别为39.4、394和3943 IU/ml。结论从提取效率和收获RNA质量上M和Q法远远优于P法,进一步方法性能表明,M法为HCV RNA定量最佳提取方法,而P法因其提取效率低、收获RNA质量差以及重复性不好,不适合临床HCV RNA定量试验。

皖南地区丙型肝炎病毒基因型研究

目的探讨安徽南方地区慢性丙型肝炎患者血清ALT水平、HCV RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法用速率法和荧光定量PCR法,检测141例安徽南方地区慢性丙型肝炎患者血清ALT水平和HCV RNA定量结果,应用RT-PCR和型特异性引物法对其中50例标本进行基因分型。结果141例患者的血清ALT与HCV RNA两指标间的相关性采用Spearman等级相关分析显示,rs=0.213,P=0.011<0.05,差异有统计学意义,存在正相关;在50例标本中,HCV基因分型Ⅰ型有45例(95.7%),Ⅱ型2例(4.3%),未分型3例。结论安徽南方地区丙型肝炎病毒感染以Ⅰ型为主;ALT、HCV RNA和基因型是可靠且重要的治疗反应指标。