雷氏大疣蛛蛛毒对人肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及其机制的研究

背景与目的蜘蛛毒素抗肿瘤的研究迄今还是未知领域。本研究探讨雷氏大疣蛛(Macrotheleraveni)蛛毒对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定了雷氏大疣蛛蛛毒(10、20、40、80滋g/ml)对BEL-7402细胞增殖作用的影响;采用[3H]-TdR掺入法检测蛛毒加入前后BEL-7402细胞DNA的变化;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞凋亡率和细胞周期的影响;利用Westernblot方法进一步检测雷氏大疣蛛蛛毒对细胞周期相关基因c-myc的变化。结果雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),IC50为20滋g/ml,时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制BEL-7402细胞DNA的合成。流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒作用下的BEL-7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期。Westernblot方法进一步检测表明雷氏大疣蛛蛛毒作用于BEL-7402细胞72h后,c-myc基因表达减弱。结论雷氏大疣蛛蛛毒就可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成。其药理作用机制可能是除了诱导凋亡外,主要是使细胞周期相关基因c-myc表达减弱,导致细胞周期的变化。

雷氏大疣蛛毒液对人肝癌HepG2细胞p21基因表达的影响(英文)

本文研究了雷氏大疣蛛毒液对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制作用及其分子机制。采用XTT法观察到雷氏大疣蛛毒液剂量依赖抑制HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测发现,经过雷氏大疣蛛毒液作用的HepG2细胞周期发生明显的选择性改变;RT-PCR方法检测到p21基因表达增强;Western blot检测发现,p21蛋白表达增加。结果提示,雷氏大疣蛛毒液抑制人肝癌细胞HepG2增殖的可能机制之一是使p21基因和蛋白表达增加,G2／M细胞周期被阻滞,从而诱导细胞凋亡。

雷氏大疣蛛毒素溶栓活性测定及纤溶蛋白的分离

[目的]检测雷氏大疣蛛毒素的体外溶栓活性及分离雷氏大疣蛛毒素中的纤溶酶组分。[方法]应用人血检测雷氏大疣蛛毒素的体外溶栓活性;用反相层析法和阳离子交换法分离雷氏大疣蛛毒素,应用纤维蛋白平板检测毒素及分离组分的纤溶酶活性。[结果]体外溶栓实验显示,不同浓度的雷氏大疣蛛毒素水溶液均可溶解人血凝块,浓度越高溶解作用越强。经纤维蛋白平板法检测,雷氏大疣蛛毒素具有良好的纤溶作用。反相层析法分离雷氏大疣蛛毒素收集得14种组分,其中4种具有纤溶活性。取其中分离效果较好的组分2和10利用阳离子交换法再分离,各收集了2种组分,其中2-2和10-2具纤溶活性且SDS-PAGE显示一条带,达到了电泳纯。[结论]雷氏大疣蛛毒素存在具纤溶酶活性的蛋白(多肽)组分,应用反相层析和阳离子交换的反法能较好的分离雷氏大疣蛛毒素组分。

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷氏大疣蛛M acrothele raven i毒素对人肝癌细胞SMM C-7721增殖及细胞周期的抑制作用,进一步探讨其作用的分子机制。方法采用M TT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖作用的影响;采用[3H]-T dR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMM C-7721细胞DNA合成的变化;采用流式细胞术(FCM)探讨雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响;采用W estern B lot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-m yc蛋白表达的影响。结果M TT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMM C-7721细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMM C-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMM C-7721细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G2/M期。W estern B lot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMM C-7721细胞72 h后,c-m yc蛋白表达减弱。结论雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMM C-7721的增殖和DNA的合成,其机制可能是诱导细胞凋亡,使细胞周期相关c-m yc蛋白表达减弱,导致细胞周期的变化。

雷氏大疣蛛蛛毒对人肿瘤细胞增殖的抑制作用(英文)

目的 我们首次对雷氏大疣蛛 (Macrotheleraveni)蛛毒对人肝癌SMMC-7721细胞和人胃癌BGC-823增殖的抑制作用进行研究,体外实验进一步探讨其作用机理。方法 采用MTT法测定雷氏大疣蛛蛛毒对SMM-C7721和BGC- 823细胞增殖作用的影响;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对细胞凋亡率的影响。结果MTT方法表明雷氏大疣蛛蛛毒对两种细胞增殖有较强的抑制作用(P<0. 05),时效和量效关系良好。流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒 (10, 20, 40μg/mL)作用下 24小时后两种细胞凋亡率增加。结论 雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制两种细胞的增殖,其可能的作用机理是在一定的浓度下诱导肿瘤细胞凋亡。

PI3K/Akt/mTOR信号通路相关细胞因子在小鼠H22肝癌增殖及运动与药物干预中的差异表达

目的:观察有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素对小鼠皮下移植H22肝肿瘤中PI3K/Akt/mTOR信号通路及相关细胞因子差异表达的影响及其分子机制。方法:40只雄性KM小鼠随机均分为模型组(M组)、有氧运动组(E组)、负重有氧运动组(OE组)和有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组(E+MR组)。采用小鼠颈部皮下移植成瘤模型,各干预组于建模成功后第3天进行雷氏大疣蛛毒素和运动干预。尾静脉注射0.3 ml雷氏大疣蛛毒素(药剂浓度为2μg/g体重)连续20天;运动干预采用有氧游泳训练,每周6次,共5周。4组动物每4天测量1次肿瘤体积,并绘制肿瘤生长曲线。实验结束后小鼠禁食过夜,随后分离出肿瘤组织。采用HE染色对其进行显微结构形态学观察;免疫组化法检测肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1因子蛋白表达;实时荧光定量(Realtime-PCR)技术检测肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1mRNA表达。结果:①肿瘤体积测量结果显示:模型组肿瘤体积生长速度最快,有氧运动组肿瘤体积生长速度次之,负重有氧运动组肿瘤生长速度较有氧运动组生长速度慢,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢;②HE染色结果显示:模型对照组肿瘤细胞排列紧密、规整,有氧运动组细胞排列疏松欠规则,负重有氧运动组细胞出现坏死区,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素干预组细胞可见较大坏死区域。③免疫组织化学染色结果显示:三个干预组小鼠肿瘤组织PTEN阳性表达均高于模型非干预组,而PI3K、Akt、mTOR、IGF-1阳性表达较模型组低(P<0.01)。④Real-time PCR检测结果显示:三个干预组小鼠肿瘤中PTEN mRNA表达明显高于模型非干预组(P<0.01),其中有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组PTEN mRNA表达水平最高。结论:有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素与有氧运动、负重有氧运动,能提高PTEN的含量,降低促肝癌细胞增殖的有关因子以及上调肿瘤细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞,从而发挥抗H22小鼠肝脏肿瘤增殖的作用。

颜氏大疣蛛蛛毒中多肽和蛋白质的多样性分析

对颜氏大疣蛛Macrothele yani蛛毒所富含的多肽与蛋白质多样性进行探索,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和超高效液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间质谱技术分离和鉴定颜氏大疣蛛蛛毒中的蛋白质和多肽,并对其相对分子质量分布多样性进行分析。结果显示:粗毒中所含蛋白质的相对分子质量主要分布在35kDa以上。在17~135kDa分离度较佳的共有11条电泳条带,主要集中于40~120kDa附近;在75kDa附近弥散着高丰度的蛋白条带,75kDa以上的蛋白质最丰富。粗毒经色谱分离后得到超过50个色谱峰,经质谱鉴定得到121个物质成分,其中,多肽类物质的相对分子质量呈双峰式分布,21%分布在500~2000 Da,76%分布在3000~5000Da,为粗毒中多肽含量最丰富的部分,且集中于35~60min的保留时间内被洗脱。研究结果表明,颜氏大疣蛛蛛毒中含有较为丰富的多肽和蛋白类物质,这些物质的相对分子质量分布特征与已报道的其他蜘蛛既有相似性又存在具体差异。本文展示了颜氏大疣蛛蛛毒的分子多样性,为后续该毒素的物质基础研究及药用价值开发提供参考。