石菖蒲生长过程中β-细辛醚积累特征及其饮片品质研究

[目的]基于气相色谱法建立石菖蒲及其挥发油中β-细辛醚的含量测定方法,比较不同产地石菖蒲饮片品质,并研究石菖蒲生长过程中不同药用部位β-细辛醚的积累规律,为合理开发和利用石菖蒲药材资源提供理论依据。[方法]采用水蒸气蒸馏法提取不同产地饮片挥发油,计算挥发油得率;采用气相色谱法测定饮片及其挥发油中β-细辛醚含量;采集不同月份石菖蒲新鲜全草,利用气相色谱法测定不同药用部位中β-细辛醚含量。[结果]不同产地饮片中β-细辛醚含量、挥发油含量以及挥发油中β-细辛醚含量差异较大,四川产地饮片指标含量差异较小;在研究期限内石菖蒲中β-细辛醚含量(以干质量计)2月最高,7月次之;石菖蒲叶基中β-细辛醚含量高于根茎,叶中几乎不含β-细辛醚。[结论]建立的检测方法简便快速、定量准确、重复性好,可用于石菖蒲的质量评价。以挥发油含量和β-细辛醚计,四川产地饮片品质较佳;以β-细辛醚计,石菖蒲在2月、7月采收较佳,根茎和叶基质量较好。

石菖蒲挥发油成分改善阿尔茨海默病症状的作用及机制研究

目的探讨石菖蒲挥发油成分(β-细辛醚、α-细辛醚和丁香酚)改善阿尔茨海默病(AD)症状的作用及机制。方法30只SD大鼠按随机数字表法分为对照组(等体积橄榄油)、模型组(等体积橄榄油)、β-细辛醚组(50 mg/kg溶于橄榄油)、α-细辛醚组(50 mg/kg溶于橄榄油)和丁香酚组(50 mg/kg溶于橄榄油),每组6只;除对照组予0.9%氯化钠注射液外,其余4组均注射β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42构建AD模型。5组大鼠分别给予上述油剂灌胃1次/d,连续21 d。采用旷场实验、Y迷宫实验和Morris水迷宫实验检测大鼠行为学变化,HE染色观察脑组织病理学变化,免疫组化检测脑组织中Aβ、微管相关蛋白(TAU)表达水平,免疫荧光法检测脑组织中离子钙结合衔接分子1(Iba1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平,ELISA法测定脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量,qRT-PCR和Western blot法分别检测脑组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组AD大鼠空间学习和认知记忆能力减弱,脑组织神经细胞损伤严重;脑组织中Aβ、TAU表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α含量,以及Iba1、GFAP表达水平均明显升高,而PPARγ、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,β-细辛醚组、α-细辛醚组和丁香酚组AD大鼠空间学习和认知记忆能力增强,脑组织神经细胞损伤减轻;脑组织中Aβ、TAU表达水平,IL-1β、IL-6、TNF-α含量,以及Iba1、GFAP表达水平均明显降低,而PPARγ、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论石菖蒲挥发油成分可有效改善AD大鼠症状,可能是通过激活PPARγ和Nrf2表达进而抑制炎症反应实现的。

石菖蒲挥发油质量研究

【目的】分析石菖蒲挥发油化学成分,探讨石菖蒲质量。【方法】采用水蒸汽蒸馏法提取35份石菖蒲挥发油,并采用气相色谱—质谱(GC-MS)联用技术对挥发油化学成分进行分离鉴定,用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。以共有成分相对含量为指标进行聚类。【结果】共鉴定出石菖蒲挥发油中的38个化学成分,共有成分为龙脑、α-萜品醇、β-石竹烯、顺式甲基异丁香酚、反式甲基异丁香酚、β-细辛醚、α-细辛醚;35份石菖蒲挥发油可分为6类。【结论】石菖蒲挥发油质量差异较大,有必要对质量标准作进一步的研究。

石菖蒲挥发油对心肌细胞形态学及细胞活力的影响

目的：观察石菖蒲挥发油对正常心肌细胞形态学及细胞活力的影响。方法：采用胰酶冷消化法消化培养心肌细胞，用免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞纯度；将不同浓度石菖蒲挥发油与心肌细胞作用24h，用倒置显微镜观察细胞形态的变化，并用MTT比色法检测细胞活力。结果：原代培养的乳鼠心肌细胞纯度达95％以上；不同浓度的石菖蒲挥发油能降低正常心肌细胞的搏动频率；终浓度为100—160mg／L的石菖蒲挥发油能提高心肌细胞活力D（λ）值，与基质组比较有统计学差异，其量效关系是以140mg／L剂量组D（λ）值为顶点的抛物线。结论：一定浓度的石菖蒲挥发油有降低心肌细胞搏动频率、提高心肌细胞活力的作用。

石菖蒲挥发油包合工艺及包合物稳定性研究

目的探讨石菖蒲挥发油包合工艺,并对其包合物稳定性进行研究。方法应用U7(76)均匀试验设计对影响包合的因素进行考察,筛选出最佳包合工艺;采用HPLC法,以β-细辛醚含量为指标研究包合前后石菖蒲挥发油稳定性。结果石菖蒲挥发油的最佳包合工艺为:β-CD:挥发油=3:1,β-CD:水=1:15,包合温度为30℃,搅拌时间为3h;包合后,在考察时间范围内石菖蒲挥发油中β-细辛醚含量变化较小,RSD<5%。结论筛选出的包合工艺稳定可行,采用β-CD包合可有效提高石菖蒲挥发油的稳定性。

石菖蒲等3种挥发油对雪上一枝蒿甲素经皮渗透的影响

目的:考察石菖蒲、肉豆蔻、桔皮所含挥发油对雪上一枝蒿甲素经皮渗透的影响。方法:采用改良Franz扩散池法,以裸鼠皮肤为透皮屏障,以HPLC测定模型药物雪上一枝蒿甲素的累积渗透量,并以3%氮酮为对照,考察石菖蒲、肉豆蔻、桔皮3种挥发油对雪上一枝蒿甲素的促渗效果。结果:7%石菖蒲、7%肉豆蔻、5%桔皮挥发油与3%氮酮对雪上一枝蒿甲素均具有一定的促渗作用,促渗倍数分别为6.52,6.74,2.18,6.03倍。结论:7%石菖蒲、7%肉豆蔻、5%桔皮挥发油均能促进雪上一枝蒿甲素的经皮渗透。

荜澄茄等3种挥发油对乌头碱经皮渗透的影响

目的:研究荜澄茄、干姜、石菖蒲挥发油对乌头碱经皮渗透的影响。方法:采用改良Franz扩散池法,以HPLC法测定模型药物乌头碱的累积渗透量,考察不同浓度的荜澄茄、干姜、石菖蒲挥发油对乌头碱的促渗效果。结果:7%浓度的荜澄茄、干姜、石菖蒲挥发油与3%氮酮的渗透系数(×10-3cm/h)分别为:10.79、5.82、5.40、3.91,与无促渗剂的对照组比较,差异均具有显著性意义,促渗倍数分别为3.87、2.09、1.94、1.40倍,可见7%的3种挥发油促渗倍数均大于3%氮酮。结论:7%的荜澄茄、干姜、石菖蒲挥发油均能明显促进乌头碱的经皮渗透。

超临界CO_2萃取石菖蒲有效成分的GC-MS分析

采用超临界ＣＯ２流体萃取技术从石菖蒲中萃取分离挥发油，用气相色谱－质谱联用技术测定其化学成分，从中鉴定出２６种成分，并测定了其相对含量，主要成分为：顺－细辛脑、反－细辛脑、绿叶烯、石竹烯、蛇麻烯、甲基丁子香酚、榄香素、顺－罗勒烯等。

石芎挥发油亚微乳的制备工艺和稳定性研究

目的制备石芎挥发油亚微乳,并对其稳定性进行考察。方法对石芎挥发油亚微乳的处方和制备工艺进行研究,分别采用正交试验、单因素试验对处方和制备工艺进行优化。结果优化处方和制备工艺条件为:石芎挥发油10 g、大豆油5 g、油酸0.7 mL、磷脂1.2 g、甘油2.2 g、泊洛沙姆188(F-68)1.2 g,加水至100 mL,以80 MPa的压力高压乳匀6次。结论所制亚微乳处方合理,样品符合《中国药典》中有关亚微乳的质量标准,样品稳定。

补气开窍法对APP/PS1双转基因小鼠认知能力和β-淀粉样肽42的影响

【目的】探讨补气开窍法对APP/PS1双转基因小鼠认知能力和β-淀粉样肽42(Aβ42)的影响及其自噬机制。【方法】将56只APP/PS1双转基因小鼠随机分为4组,雌雄各半,每组14只,即模型组、人参总皂苷组(剂量为75 mg/kg)、石菖蒲挥发油组(剂量为15 mg/kg)、补气开窍方组(剂量为石菖蒲挥发油15 mg/kg+人参总皂苷75 mg/kg)。另设正常组,C57BL/6品系的正常小鼠14只,雌雄各半。各组灌胃给药,模型组和正常组用等体积的蒸馏水代替,给药30 d。末次给药结束1 h后,先将各组小鼠进行行为学检测(水迷宫实验,避暗实验和跳台实验),再麻醉各组小鼠,其中4只灌注固定后的全脑用于免疫组织化学法检测Aβ42,其余小鼠在冰上迅速取出海马用于检测Aβ42,流式细胞术检测磷酸化的哺乳动物雷帕霉素蛋白(p-m TOR)和自噬相关基因(Beclin-1)。【结果】与正常组比较,模型组水迷宫实验的潜伏期显著延长(P<0.01),避暗实验和跳台实验的潜伏期显著缩短(P<0.01),Aβ42含量和Beclin-1表达显著增加(P<0.01),p-m TOR表达显著减少(P<0.01);与模型组、人参总皂苷组、石菖蒲挥发油组比较,补气开窍方组的水迷宫实验的潜伏期显著缩短(P<0.05),避暗实验和跳台实验的潜伏期显著延长(P<0.05),水迷宫实验、避暗实验和跳台实验的错误次数显著减少(P<0.05),Aβ42含量显著减少(P<0.05),此外,与模型组比较,补气开窍方组的p-m TOR表达显著增加(P<0.05),Beclin-1表达显著减少(P<0.05)。【结论】人参总皂苷联合石菖蒲挥发油具有改善APP/PS1双转基因模型小鼠的认知能力,减少Aβ42表达和调节自噬作用,且优于单独使用人参总皂苷组或石菖蒲挥发油组。

远志、石菖蒲有效部位配伍对阿尔茨海默病模型大鼠的治疗作用研究

目的:探讨远志皂苷、石菖蒲挥发油配伍对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能的影响,并探讨其作用机制。方法:将SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、远志皂苷和石菖蒲挥发油配伍组,脑复康组(即阳性药对照组),每组10只。采用D-半乳糖诱导建立阿尔茨海默病(AD)动物模型,观察远志、石菖蒲有效部位配伍对AD模型大鼠学习记忆能力、脑组织中SOD、AchE活性和MDA含量的影响。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习记忆能力明显减退,脑组织中SOD活性明显降低,AchE活性和MDA含量显著升高,远志石菖蒲有效部位配伍组学习记忆能力得到明显改善,脑组织中SOD活性得到明显提高,AchE活性和MDA含量均得到明显降低。结论:远志、石菖蒲有效部位配伍能明显改善阿尔茨海默病的学习记忆能力下降状况,其机制可能是通过抗自由基,恢复胆碱能系统,抑制其对脑组织的损伤。

石菖蒲挥发油β-环糊精、羟丙基-β-环糊精包合物在大鼠体内药代动力学研究

目的研究石菖蒲挥发油的β-环糊精β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合物在大鼠体内的药代动力学及生物利用度,从而确定最佳的包合材料。方法SD大鼠分别灌胃给予石菖蒲挥发油药、β-CD包合物及HP-β-CD包合物,采用HPLC法测定给药后不同时间的血药浓度,并采用DAS2.0.1软件计算主要药动学参数。结果灌胃给药石菖蒲挥发油、β-CD包合物、HP-β-CD包合物后,血浆中α-细辛醚血药浓度-时间曲线依次符合权重系数为1,1,1/C^2的二室模型,主要药动学参数:C_(max)分别为(2.580±0.247)、(3.598±0.756)、(5.645±0.363)μg·mL^(-1);T_(max)分别为(10.120±0.760)、(8.082±0.483)、(5.073±0.610)min;AUC_(0-t)分别为(125.121±4.161)、(263.335±16.377)、(432.138±11.208μg·min·mL^(-1);AUC_(0-∞)。分别为(135.309±9.278)、(295.713±29.775)、(456.652±3.904)μg·min·mL^(-1)。3组间C_(max)、AUC_(0-t)。两两比较,差异有统计学意义(P<0.05),β-CD包合物的相对生物利用度为210.46%,HP-β-CD包合物的相对生物利用度为345.38%。结论石菖蒲挥发油与β-CD、HP-β-CD包合后,在大鼠体内的吸收速度明显加快,生物利用度显著提高,且HP-β-CD包合后效果优于β-CD包合。

高效液相色谱法测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚的含量

目的建立用高效液相色谱测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚含量的方法。方法色谱柱为Venusil XBP-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇-水（60：40）,每1 000 mL加入磷酸二氢钾1.4 g,十二烷基磺酸钠1.2 g;柱温30℃;流速1.0 mL？min-1;检测波长257 nm。结果β-细辛醚在8.48~67.84μg？mL-1浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=0.999 9）;β-细辛醚平均回收率为100.76%;RSD 1.41%。结论该方法灵敏简便,结果准确可靠,可用于β-细辛醚的含量测定。

石菖蒲挥发油的药效指纹图谱研究

目的建立石菖蒲挥发油的药效指纹图谱,为石菖蒲的质量评价提供依据。方法采用GC法建立石菖蒲挥发油的色谱指纹图谱,将在5个药效实验中均有显效的4类样品共38批挥发油指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)中生成对照指纹图谱,初步建立石菖蒲挥发油的药效指纹图谱,并初步探讨石菖蒲的质量标准。结果在本实验条件下,获得了较理想的包含特征信息的石菖蒲挥发油GC指纹图谱;初步拟定石菖蒲的质量标准为:含挥发油不得少于1.0 m L·g^(-1),挥发油中β-细辛醚相对含量不少于60%。结论基于谱效学建立的药效指纹图谱科学、合理,为石菖蒲的质量评价提供依据。

抗病毒口服液挥发油提取工艺的研究

目的优选抗病毒口服液中广藿香、连翘、郁金、石菖蒲等4味药材挥发油最佳提取工艺。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以收油率为指标,采用正交试验设计考察药材粒径、加水倍数、浸泡时间、提取时间等因素。结果最佳提取条件为:药材粉细段(<10 mm),加入8倍量水,浸泡3 h,提取6 h。结论优选得到的工艺稳定可行。

抗抑郁症胶囊中挥发油的提取工艺研究

目的:对中药方剂抗抑郁症胶囊中五味根茎类中药进行挥发油提取工艺的研究。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,以挥发油的收率作为评价指标,以加水量、浸泡时间和提取时间为考察因素,用正交设计法来确定挥发油最佳提取工艺。结果:对五味中药进行提取试验,结果表明除石菖蒲以外共他四味申药材虽然禽挥发油但挥发油含量太低,不适合工业化生产。最后只对含挥发油量最高的石菖蒲进行挥发油提取并开展单因素试验和正交试验确定最佳提取方工艺。结论:得到最佳提取工艺为选用石菖蒲饮片,浸泡2 h,加7倍水量,提取7 h,所得挥发油收率最高。

石菖蒲挥发油配伍冰片缓释片的制备及其体外释放度的研究

目的制备石菖蒲挥发油配伍冰片缓释片并考察其体外释放度。方法以溶胀性材料羟丙基甲基纤维素(HPMC)为骨架材料,乙基纤维素(EC)为阻滞剂,粉末反压法制备石菖蒲挥发油配伍冰片缓释片。根据单因素试验结果,进行正交设计,优化处方和工艺,以β-细辛醚累积释放量评价释放的差异。结果由极差知各因素对释放度的影响为B(EC用量)>A(HPMC用量)>C(硬脂酸镁用量),EC用量对本缓释片的缓释结果影响有统计学意义。石菖蒲挥发油配伍冰片缓释片的体外释放曲线符合Higuchi方程。结论以羟丙甲基纤维素为骨架材料,EC作为阻滞剂,制得持续释药12 h的石菖蒲挥发油配伍冰片缓释片。

GC-FID同时测定石菖蒲油中七种成分的含量

目的:气相色谱法测定石菖蒲油中莰烯、桉油精、芳樟醇、樟脑、龙脑、丁香酚和甲基丁香酚七种成分的含量,建立其含量测定的方法,为石菖蒲的质量控制提供依据。方法:采用气相色谱法,Agilent HP-5(0.25μm×0.32 mm×30 m),程序升温:初始温度60℃,以2℃/min升至85℃,再以8℃/min升至100℃,保持2 min,再以0.2℃/min升至105℃,最后以10℃/min升至260℃,载气为高纯氮气(≥99.999%),载气流量6.5 mL/min,分流比为10︰1;FID检测器温度260℃,进样口温度260℃。结果:七种物质的方法学考察均符合要求,准确测定了石菖蒲挥发油样品中莰烯、桉油精、芳樟醇、樟脑、龙脑、丁香酚和甲基丁香酚的含量。结论:气相色谱法测定石菖蒲挥发油中莰烯、桉油精、芳樟醇、樟脑、龙脑、丁香酚和甲基丁香酚的含量简便、快捷,可为控制石菖蒲的质量提供依据。

石菖蒲挥发油提取方法的比较研究

采用超临界CO2萃取、水蒸气蒸馏及微波辅助法提取石菖蒲挥发油。以挥发油得率、β-细辛醚含量、挥发油提取物主要成分及黄樟醚含量为考察指标,采用气相色谱法对三种提取方法进行比较。超临界CO2萃取的挥发油得率为3.32%,挥发油中β-细辛醚的含量为71.12%,均高于其它两种提取方法,适用于石菖蒲挥发油的提取。此外,三种提取方法所得挥发油的主要化学成分含量不完全相同,且均未检出黄樟醚。

回药石菖蒲挥发油神经保护活性初步研究

目的对回药石菖蒲挥发油进行成分分析,并初步筛选其神经保护活性。方法 2016年10月课题组在宁夏医科大学回药现代化工程技术研究中心回药提取分离室采用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,并通过GC-MS检测主要化学成分,采用峰面积归一化法得出各组分的相对百分含量。以大鼠皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤模型初步考察石菖蒲挥发油神经保护活性。结果通过GC-MS分析,从石菖蒲挥发油中分离出17种化合物,通过计算机自动检索与标准图谱对照鉴定出16种化学成分,占挥发油总相对含量的96.86%,在已鉴定的组分中相对含量较高的成分为:α-细辛醚(37.73%)、β-细辛醚(31.12%)。石菖蒲挥发油在1~20μg/m L的剂量下均有显著的神经细胞保护活性,且在2~20μg/m L剂量下细胞生存率均值可达80%以上。结论石菖蒲挥发油在大鼠皮层神经细胞氧糖剥夺模型中具有显著的神经细胞保护活性。