茶黄素-3,3’-双没食子酸酯对α-葡萄糖苷酶的抑制机制

利用酶抑制动力学、多光谱、分子对接分析了茶黄素-3,3’-双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate,TFDG)对α-葡萄糖苷酶的抑制机制,结果表明抑制是可逆的,并呈现竞争型和非竞争型混合抑制;TFDG与α-葡萄糖苷酶形成复合物猝灭其固有荧光;热力学参数表明结合是自发吸热、熵增的,且疏水相互作用是主要驱动力;结合增强了酪氨酸残基附近的疏水性和色氨酸残基周围的极性,降低了α-螺旋、β-折叠和β-转折的含量。分子对接显示TFDG结合在酶活性位点附近,并与附近氨基酸残基Phe450、Trp406之间存在两种疏水相互作用,且与Asp203、Phe450、Gln603形成3个氢键。本研究揭示了TFDG抑制α-葡萄糖苷酶的分子机理,为治疗糖尿病提供一种可行的候选功能因子。

红茶的体外模拟消化及TFDG对胰脂肪酶活性的抑制作用

肥胖已成为影响人们生活方式的现代流行病,抑制胰脂肪酶的活性是治疗肥胖的关键。该研究考察红茶经体外模拟消化后酚类物质的生物可及性和抗肥胖特性,并通过荧光光谱探究茶黄素-3,3′-双没食子酸酯(theaflavin-3,3′-digallate,TFDG)对胰脂肪酶活性的抑制机制。体外模拟消化试验结果表明,红茶在消化过程中酚类物质含量降低,最终生物可及性维持在32.04%,但经体外消化后其对胰脂肪酶活性的抑制率增加26.97%,并且有效地抑制了膳食脂肪的分解。荧光光谱分析结果表明TFDG能够静态猝灭胰脂肪酶的内源荧光,氢键和疏水作用是二者结合过程中的主要驱动力,并且在结合过程中胰脂肪酶的构象发生改变。

咖啡碱和蛋白质对酯型儿茶素氧化形成TFDG的影响

对咖啡碱(CAF)和牛血清白蛋白(BSA)在双酯型茶黄素形成中的影响进行了研究分析。结果表明,咖啡碱和牛血清白蛋白对TFDG的形成均有明显的抑制作用,而且相同条件下,牛血清白蛋白和咖啡碱表现出相似的抑制作用。当牛血清蛋白与咖啡碱同在一个化学氧化反应体系中时,表现出随浓度不同而呈现复杂的竞争或协同作用。

茶黄素双没食子酸酯的生物活性及其作用机制

文章综述了近年来国内外有关茶黄素双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate,TFDG)在抗氧化、抗癌、抗炎、抗病毒以及治疗代谢综合征等方面生物活性及其作用机制研究进展,同时展望了中国红茶资源的深层次研究和健康功能性产品开发这一研究领域的发展前景和方向。

茶黄素-3,3′-双没食子酸酯对人骨肉瘤细胞的抑制作用及转录组学分析

目的采用转录组学等技术探讨茶黄素-3,3′-双没食子酸酯(theaflavin-3,3′-digallate,TF3)对人骨肉瘤(HOS)细胞的抑制作用及其潜在机制。方法分别使用不同浓度的TF3和体积分数0.05%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理HOS细胞后,采用CCK-8(cell counting kit-8)法、结晶紫染色、集落形成实验和流式细胞术来检测TF3对HOS细胞增殖的影响;Hoechst33258染色实验及流式细胞术检测TF3对HOS细胞凋亡的影响;Western blot检测HOS细胞增殖和凋亡相关蛋白的水平;采用转录组测序检测TF3处理组和对照组HOS细胞的差异基因表达情况,并使用生物信息学分析潜在分子机制。根据转录组测序结果,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2),蛋白酪氨酸激酶受体B1(EPHB1)和紧密连接蛋白7(CLDN7)mRNA的表达。结果与对照组相比,TF3处理组中HOS细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),同时细胞凋亡率显著增高(P<0.05),呈浓度依赖性;增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞增殖抗原(Ki67)及抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达量降低,凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的水平下降,凋亡标志蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)和细胞色素C的表达量升高(P<0.01);HOS细胞转录组测序结果显示,TF3处理组与对照组相比有809个差异表达基因(P-adjust<0.05),其中596个上调,213个下调;基因本体论(gene ontology,GO)主要富集于DNA复制的正调控、膜及蛋白结合等功能方面,京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)主要富集于缺氧诱导因子1信号通路、癌症通路及肿瘤坏死因子信号通路等包括凋亡在内与肿瘤相关的信号通路。与对照组相比,TF3处理组的SCG2,EPHB1,和CLDN7 mRNA表达水平下调(P<0.05)。结论TF3可能通过多靶点调控多种信号通路的活性,从而抑制HOS细胞增殖并促进其凋亡。

茶黄素双没食子酸酯对炎性气道黏液高分泌的影响

目的:观察茶黄素对人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophilelastase,HNE)诱导气道黏液高分泌的作用。方法:采用HNE刺激人肺腺癌细胞A549,导致黏液高分泌,以茶黄素双没食子酸酯(theaflavin-3,3'-digallate,TF3)单体进行干预。首先用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)测定细胞活性,确定作用剂量,其后细胞分为4组进行实验,分别为A组:对照组;B组:HNE(50nmol/L)刺激24h;C组:用TF3(浓度分别为50、100、200μg/ml)作用24h后,再予HNE刺激24h;D组:先用EGFR阻断剂AG1478(5μmol/L)处理30min后,也予HNE刺激24h。并测定不同剂量和TF3(200μg/ml)不同作用时间(12h、24h、36h)的黏蛋白变化。RT-PCR检测各组黏蛋白(MUC)5ACmRNA的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察MUC5AC蛋白表达的变化。结果:HNE能导致A549的MUC5ACmRNA和MUC5AC蛋白显著增高,而给予TF3预处理后,与HNE刺激组比,两指标均明显下调,且呈浓度剂量和作用时间正相关,其差异有统计学意义;茶黄素组与AG1478组比较,后者抑制作用更为明显;与对照组比,仍有增高。结论:茶黄素双没食子酸酯(TF3)单体可显著下调炎性气道的黏液高分泌,但并不能完全抑制炎性黏液的分泌。