环介导恒温扩增技术可视化检测携带tdh基因的致病性副溶血性弧菌

建立了环介导恒温扩增技术检测携带tdh基因的致病性副溶血性弧菌。基于副溶血性弧菌高度保守的tdh基因序列,设计了6条特异性引物,两条外引物F3、B3,两条内引物FIP、BIP及两条环引物LF、LB。在Bst DNA Polymerase作用下,60℃恒温水浴进行扩增。对10种细菌共21株菌进行LAMP扩增,所试6株副溶血性弧菌均为阳性,说明引物具有高度特异性。本LAMP方法对纯培养物的灵敏度可达到9.42cfu/m L。对污染食品中副溶血性弧菌的灵敏度为25.3cfu/25g,40～60min内即可完成检测。本方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可以为临床提供简单、快速、高灵敏度和高特异性的检测应用。

副溶血性弧菌肠道细菌基因间重复序列基因分型研究

目的检测副溶血性弧菌热稳定溶血素(TDH)基因(tdh),并采用肠道细菌基因间重复序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR,ERIC-PCR)基因分型技术对tdh阳性和阴性菌株进行聚类分析。方法 PCR法扩增79株分离自患者和海产品中的副溶血性弧菌tdh基因。ERIC-PCR分型PCR产物中某一特定大小片段存在标记为1,否则标记为0,形成二进制独特矩阵,定义为一个基因型,用聚类分析软件NTsys 2.10e对所有菌株、tdh阳性组和阴性组进行聚类分析。结果患者组、海产品组中分离菌株tdh阳性率分别为87.8%(43/49)和3.3%(1/30),患者中所分离的副溶血性弧菌tdh阳性率明显高于环境中所分离的(χ2=19.11,P<0.01)。79例菌株可获得产物长度160 bp、360 bp、420 bp、500 bp、680 bp、800 bp、950 bp、1 100 bp、1 350 bp、1 550 bp、1 800 bp、2 100 bp和2 400 bp共13种大小不同的PCR产物片段,所有菌株根据扩增片段分布可分为17类,有3个明显族。结论 ERIC-PCR聚类分析结果表明,我国分离的副溶血性弧菌具有较高基因多态性,tdh阴性组离散度高于tdh阳性组。