T2DM患者外周血氧化应激变化及其与合并NAFLD的关系研究

目的检测2型糖尿病(T2DM)患者外周血氧化应激变化,并分析其与合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法选取本单位2016年1月至2017年12月收治的133例T2DM患者,随访5年,统计NAFLD发生率。根据是否发生NAFLD记为发生组(n=98)和未发生组(n=35),比较2组患者一般资料和外周血超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平;采用Logistic回归分析探讨T2DM患者并发NAFLD的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平单独与联合对T2DM患者并发NAFLD的预测价值。结果T2DM患者中NAFLD发生率为73.68%(98/133);NAFLD发生患者外周血MDA、TXNIP水平均高于NAFLD未发生患者(P<0.05),SOD、GSH-PX水平低于NAFLD未发生患者(P<0.05);病程>5年,未进行胰岛素降糖,空腹血糖,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平均是T2DM并发NAFLD的影响因素(OR=3.062、3.725、4.350、0.649、4.328、0.551、4.697,P<0.05);外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测T2DM并发NAFLD的灵敏度均高于单独预测(P<0.01),AUC均高于单独预测(P<0.05),特异度均与单独预测差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血氧化应激水平升高可增加T2DM并发NAFLD的风险,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测并发NAFLD的效能高。

血清Trx2、P-tau与脑小血管病患者核磁总负荷评分和认知功能的相关性

目的 探讨脑小血管病患者血清硫氧还蛋白2(Trx2)、磷酸化tau蛋白(P-tau)与核磁总负荷评分和认知功能的相关性。方法 选取2019年7月—2020年7月沧州市中心医院脑小血管病患者94例,根据是否存在认知功能障碍分为认知障碍组(38例)和无认知障碍组(56例);根据核磁总负荷评分分为轻度负荷组(67例)和中重度负荷组(27例)。收集所有患者的一般资料和实验室检测结果,并检测血清Trx2、P-tau水平。采用多因素Logistic回归分析评估脑小血管病患者核磁总负荷和认知功能的影响因素。采用Pearson相关分析评估各项指标与核磁总负荷和认知功能的相关性。结果 认知障碍组和无认知障碍组性别、年龄、饮酒史、吸烟史和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、尿酸(UA)、核磁总负荷评分、Trx2、P-tau水平差异均有统计学意义(P<0.05),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。轻度负荷组与中重度负荷组之间性别、年龄、高血压史和HDL-C、UA、Trx2、P-tau水平差异均有统计学意义(P<0.05),其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清Trx2[比值比(OR)值=2.751,95%可信区间(CI)为1.123~6.738]、血清P-tau(OR=2.651,95%CI为1.180~5.956)是脑小血管病患者认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,脑小血管病患者血清Trx2、P-tau与核磁总负荷评分和CMMSE评分均呈正相关(P<0.05)。结论 血清Trx2、P-tau与脑小血管病患者核磁总负荷和认知功能密切相关,检测血清Trx2、P-tau水平有助于评估脑小血管病的严重程度和患者认知功能。

基于TXNIP/NLRP3炎性小体通路研究芪归通络颗粒对2型糖尿病大鼠坐骨神经的保护作用

目的:基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3炎性小体通路研究芪归通络颗粒对2型糖尿病大鼠坐骨神经的保护作用及潜在机制。方法:90只雄性SD大鼠随机选取10只为空白组,其余大鼠采取高脂饲料喂养联合STZ腹腔注射方法构建2型糖尿病周围神经病变大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、硫辛酸组(60 mg/kg)、芪归通络颗粒高、中、低剂量组,剂量分别为9、4.5、2.25 g/(kg·d)。各给药组给予相应剂量药物灌胃,持续12周。实验过程中观察大鼠一般状态及血糖水平;处死前检测大鼠机械痛阈值(PWMT)和坐骨神经运动传导速度(MNCV);通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察坐骨神经形态,Western blot检测坐骨神经组织TXNIP/NLRP3通路相关蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠血糖、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、COX-2、iNOS明显升高(P<0.05),PWMT和MNCV明显下降(P<0.05),坐骨神经TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达显著上调(P<0.05)。与模型组比较,用药治疗组的PWMT和MNCV明显增加(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达显著下调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、COX-2、iNOS水平下降(P<0.05),坐骨神经病理形态明显改善。结论:芪归通络颗粒可增强2型糖尿病大鼠的坐骨神经功能,改善糖尿病周围神经病变,其潜在作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性小体通路的激活有关。

血清白脂素、CTRP9、TXNIP与2型糖尿病视网膜病变的相关性分析

目的探讨血清白脂素、Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)与2型糖尿病视网膜病变的相关性分析。方法选取2020年7月至2022年8月诊治的150例2型糖尿病视网膜病变作为研究对象,并设立为观察组,同期选取150例单纯2型糖尿病患者设立为对照组,并根据严重程度将观察组分为增生性糖尿病视网膜病变(PDR)组(n=62)和非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)组(n=88),对比血清白脂素、CTRP9、TXNIP水平。结果观察组的白脂素、CTRP9均低于对照组,而TXNIP高于对照组(t=7.431、5.963、10.425,P<0.05)。PDR组的白脂素、CTRP9低于NPDR组,而TXNIP高于NPDR组(t=4.564、8.808、5.549,P<0.05)。Kendall's tau-b相关性分析显示,血清白脂素、CTRP9与视网膜病变严重程度呈正相关,TXNIP与视网膜病变严重程度呈负相关(r=0.289、0.510、0.344,P<0.05)。ROC曲线分析显示,白脂素、CTRP9、TXNIP预测2型糖尿病患者并发视网膜病变的AUC值分别为(0.707、0.711、0.782,P<0.05);敏感度分别为94.00%、62.00%、58.00%;特异度分别为49.30%、871.30%、92.00%。结论血清白脂素、CTRP9、TXNIP在2型糖尿病视网膜病变患者呈异常表达趋势,检测其水平变化对及时发现2型糖尿病患者并发视网膜病变具有重要意义。

硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2(TXNRD2)在肿瘤组织中的表达及其对生存预后的影响

目的:以硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2基因(TXNRD2)为研究靶点,探讨TXNRD2与肿瘤微环境中的免疫细胞及免疫浸润的相关性,旨在揭示TXNRD2对人类恶性肿瘤发生和发展的影响,为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库,基因型-组织表达(GTEx)数据库,癌症细胞系百科全书(CCLE)和人类蛋白质图集等采集数据,描述33种肿瘤中TXNRD2的表达、预后、免疫微环境、免疫新抗原、肿瘤突变负担(TMB)和微卫星不稳定性(MSI)。采用Kaplan-Meier Plotter分析TXNRD2在肿瘤中的差异生存曲线。采用单因素和多因素COX回归分析皮肤黑色素瘤(SKCM)和脑下级脑胶质瘤(LGG)的总体生存率(OS)的影响因素,采用多因素回归和Nomogram列线图建立SKCM、LGG预测评分模型。结果:TXNRD2在多种肿瘤中普遍高表达,且其可以预测多种肿瘤患者的生存率。同时,TXNRD2表达水平与肿瘤免疫浸润、肿瘤微环境和免疫肿瘤抗原明显相关。单因素COX回归分析显示,TXNRD2、年龄、种族和pTNM-stage是SKCM患者的总生存期的危险因素,TXNRD2、年龄、分级、放射治疗是LGG患者的总生存期的危险因素。除此之外,TXNRD2的会表达影响DNA修饰基因(MMRs)和甲基转移酶的表达。结论:TXNRD2对人类恶性肿瘤的发生和发展有重要影响,可为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点,从而为癌症的预防诊断和治疗提供参考。

芍药苷预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤氧化应激的保护作用及对Nrf-2/TXNIP/NLRP-3信号通路的影响

目的探讨芍药苷(PF)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠氧化应激的影响及其可能作用机制。方法选取65只SD大鼠采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支建立MIRI模型,造模成功后随机分为模型组、PF低、高剂量(60 mg/kg、120 mg/kg)组和西药(1 mg/kg盐酸地尔硫卓)组各15只,另设对照组。检测大鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察心肌组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体蛋白3(NLRP-3)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,各实验组AST、CK、CK-MB、LDH、MDA水平、TXNIP、NLRP-3 mRNA和蛋白水平降低,GSH-Px、SOD、CAT水平、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与PF低剂量组比较,PF高剂量组以上指标效果更佳(P<0.05)。结论PF可减轻MIRI大鼠氧化应激,改善心肌损伤,可能与Nrf2/TXNIP/NLRP-3信号通路有关。

血清Pref-1、Trx1与2型糖尿病患者认知功能障碍的关系

目的 探讨血清前脂肪细胞因子1(preadipocyte 1,Pref-1)、硫氧还蛋白1(thioredoxin 1,Trx1)与2型糖尿病患者认知功能障碍的关系。方法 选取2019-08/2022-08月作者医院收治的116例2型糖尿病患者作为研究组,另外选取同时期来作者医院体检的150例健康人作为健康组。根据2型糖尿病患者是否合并认知功能障碍分为非认知障碍组(n=84)和认知障碍组(n=32)。采用酶联免疫吸附法检测血清Pref-1、Trx1水平;采用Pearson相关分析探讨Pref-1、Trx1与认知功能的相关性;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估血清Pref-1、Trx1对2型糖尿病患者认知功能障碍的预测价值;采用多因素Logistic回归分析探讨2型糖尿病患者认知功能障碍的影响因素。结果 健康组血清Pref-1水平高于研究组,Trx1水平低于研究组(P均<0.01)。单因素分析显示,非认知障碍组病程、空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)、糖化血红蛋白、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)与认知障碍组比较差异有统计学意义(P均<0.05)。非认知障碍组血清Pref-1水平高于认知障碍组,Trx1水平低于认知障碍组(P均<0.01)。相关分析显示,血清Pref-1与蒙特利尔认知评估量表(Montreal cognitive assessment, MoCA)评分呈正相关(r=0.416,P<0.001),血清Trx1与MoCA评分呈负相关(r=-0.325,P<0.001)。多因素回归分析显示,病程≥7年(OR=2.261,95%CI:1.552~3.295)、糖化血红蛋白≥7.32%(OR=2.092,95%CI:1.467~2.982)、Pref-1<1.43μg/L(OR=3.031,95%CI:1.943~4.730)、Trx1≥5.62 ng/ml(OR=2.568,95%CI:1.681~3.921)是2型糖尿病患者认知功能障碍的影响因素。血清Pref-1、Trx1预测2型糖尿病患者认知功能障碍的AUC为0.834(95%CI:0.783~0.885)、0.775(95%CI:0.724~0.826),二者联合检测的AUC最高为0.916(95%CI:0.855~0.957)。结论 血清Pref-1降低、Trx1升高与2型糖尿病患者认知功能障碍有关,二者可作为评估2型糖尿病患者认知功能障碍的生物学指标,有临床推广应用的价值。

高氧对人肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2表达的影响

目的研究高浓度氧暴露对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)表达的影响,探讨Trx-2对高氧肺损伤线粒体的保护作用。方法体外传代培养A549细胞系,待其在37℃、5%CO2培养箱中生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧浓度>90%,CO2浓度为5%;空气组仍置于含5%CO2培养箱中。两组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx-2 mRNA的表达;采用Western blot检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果①与空气组相比,A549细胞高氧暴露24 h Trx-2 mRNA表达显著增强(P<0.05);48 h后Trx-2mRNA呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者差异无显著性意义(P>0.05)。②与空气组相比,A549细胞高氧暴露后12 h Trx-2蛋白表达水平显著增强(P<0.05),随后逐渐减弱,至48 h显著减弱(P<0.05)。结论高浓度氧暴露诱导A549细胞中Trx-2动态表达的变化,这种变化表明Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用。

硫氧还蛋白-2在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的:探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法:选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照组、20μmol/L H_2O_2组、50μmol/L H_2O_2组、100μmol/L H_2O_2组、阴性对照组(转染对照空p CMV6质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)和过表达Trx-2组(转染p CMV6-Trx-2过表达质粒并用100μmol/L H_2O_2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果:与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20,50,100μmol/L H_2O_2组Trx-2蛋白表达量均明显降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,100μmol/L H_2O_2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋亡,过表达Trx-2能够减少H_2O_2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H_2O_2诱导的氧化损伤有关。

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧(高氧)暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2(Trx-2)和细胞色素C(Cytc)的动态表达,探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后,加入100 g/L胎牛血清的MEM培养基,置于37℃50 mL/L二氧化碳(CO2)饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧组和空气组,每组18瓶A549细胞(50 mL培养瓶)。高氧组持续暴露于常压高氧中,氧体积分数为900 mL/L,CO2体积分数为50 mL/L;空气组仍置于50 mL/LCO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h后提取A549细胞总RNA,半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平;蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较,高氧组24 h Trx-2 mRNA的表达显著增强(P<0.05);48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05)。2.与空气组比较,高氧组12 h Cytc mRNA的表达显著增强(P<0.05);24 h Cytc mRNA的表达减弱,二组比较无显著性差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。3.与空气组比较,高氧组12 h Trx-2蛋白的表达显著增强(P<0.05);24 h仍增强,二组比较无显著差异(P>0.05);48 h显著减弱(P<0.05)。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达,提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用,Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。

低硒大鼠心肌线粒体硫氧还蛋白2的动态表达和心肌的损伤情况

目的:检测低硒大鼠心肌线粒体中硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx2)的蛋白表达水平,观察在体心功能及心肌细胞凋亡情况,分析Trx2与心功能及心肌细胞凋亡指数之间的相关性,探讨Trx2在心肌损伤中的作用。方法:构建低硒大鼠模型,以常硒组为对照,分别于喂养20周、30周和40周时颈动脉插管测其心功能;提取心肌线粒体,Western blotting法检测线粒体中Trx2的表达水平;免疫组织化学技术(SP法)对Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)进行原位染色,衡量心肌细胞凋亡情况。结果:(1)各时点对照组大鼠心肌线粒体Trx2的表达无明显差异,低硒组与相应时点的对照组相比Trx2表达均降低,且随低硒喂养时间延长降低更为明显,差异显著(P<0.05);(2)与对照组相比,低硒组大鼠心脏收缩及舒张功能均降低,以收缩功能指标——左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)和左心室内压最大上升速率(maximum rate of left ventricular pressure rise,+dp/dtmax)降低更为明显(P<0.05);免疫组化染色显示,随着喂养时间的延长,低硒组大鼠心肌细胞凋亡加重;(3)相关性分析显示,Trx2与LVSP和+dp/dtmax呈正相关,与心肌细胞凋亡指数呈负相关(P<0.01)。结论:低硒可通过影响大鼠心肌线粒体中Trx2蛋白的表达,参与心脏功能减退和心肌细胞凋亡;线粒体Trx2对心肌细胞具有保护作用。

SiRNA抑制高氧暴露下A549细胞硫氧还蛋白-2表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系

目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。

硫氧还蛋白2对低硒大鼠心肌线粒体结构与功能的影响

目的研究硫氧还蛋白2(thioredoxin,Trx2)在低硒大鼠心肌线粒体中的表达及其对心肌线粒体结构与功能的影响。方法 36只大鼠随机分为正常对照组(n=18)和低硒模型组(n=18)。分别于喂养20、30、40周时颈动脉插管测其心功能;透射电镜观察心肌线粒体的结构并用体视学方法对线粒体进行定量分析;提取心肌线粒体,以比色法测定琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素C氧化酶(COX)的活性,Western blot检测Trx2的表达水平。结果①低硒组大鼠心脏功能衰竭,电镜观察可见低硒大鼠心肌线粒体肿胀伴嵴溶解或断裂。与对照组相比,低硒组大鼠心肌线粒体体密度增大,而面密度、比表面积、SDH和COX均降低(P<0.05);且随着低硒喂养时间的延长体密度增大,而面密度、比表面积、SDH和COX继续降低(P<0.05)。②与对照组相比,低硒组大鼠线粒体中Trx2的表达显著降低,且随着低硒喂养时间的延长Trx2的表达呈下降趋势(P<0.05)。③Pearson直线相关性分析显示,心肌线粒体中Trx2的表达与线粒体面密度、比表面积、SDH和COX呈正相关,与线粒体体密度呈负相关(P<0.01)。结论低硒可下调大鼠心肌线粒体中Trx2的表达,继而损伤线粒体的结构与功能,导致心脏功能衰竭。

TRX-2基因表达在急性白血病微小残留病灶监测中的作用

目的:探讨硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达在急性白血病(AL)微小残留病灶(MRD)监测中的价值。方法:采用实时荧光定量聚合酶反应(RQ-PCR)检测AL初发组(68例)、血液学完全缓解(CHR)组(57例)和复发组(25例)TRX-2基因表达的变化,25名骨髓捐献者作为正常对照组,TRX-2基因表达量的上限(91)为参考值上限,回顾分析复发组在CHR期(骨髓原始细胞计数<5%)TRX-2基因表达的水平,比较其与流式细胞术(FCM)检测的MRD的相关性。结果:TRX-2基因表达在完全缓解组与初治组和复发组之间差异有统计学意义(P<0.01);复发患者CHR期(骨髓原始细胞<5%),21例(21/25)TRX-2基因呈高表达(>91),与流式细胞术检测的MRD具有相关性(r=0.874,P=0.0005)。结论:TRX-2基因为急性白血病新的广谱标志,适用于MRD的监测。

硫氧还蛋白-2在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的探讨TRX-2基因表达水平与急性白血病及临床特征的关系。方法应用适时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和间接免疫荧光试验检测试验组120例急性白血病和对照组120例非血液病的其他疾病患者骨髓TRX-2基因表达情况,并结合临床资料进行分析。结果经RT-PCR检测,试验组TRX-2 mRNA骨髓表达量明显高于对照组,两组差异具有统计学意义[(5.08±0.52)×102 vs.(0.91±0.15)×102,P<0.05]。其中试验组中原始细胞≥90%的样本TRX-2表达量比原始细胞<90%患者明显增多,其差异具有统计学意义[(6.79±0.51)×102 vs.(3.26±0.58)×102,P<0.05]。而骨髓中TRX-2的表达量与年龄、性别和急性白血病的类型无相关性;间接免疫荧光试验检测试验组骨髓原始细胞不同程度表达TRX-2,阳性表达率78.2%,而对照组无阳性表达;TRX-2的RT-PCR检测与间接免疫荧光法检测两种方法之间具有显著相关性(P<0.05),但一致性较差(κ=0.26)。结论 TRX-2在急性白血病骨髓中呈现高表达,其与急性白血病原始细胞的负荷量存在相关性,而与临床特征无明显相关;RT-PCR与间接免疫荧光法两种方法检测TRX-2之间具有显著相关性,但一致性较差。

铁皮石斛硫氧还蛋白基因(DoTrxL2)的克隆及表达分析

运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC功能结构域,通过两个半胱氨酸的双硫键得失电子,起到氧化还原作用。分子进化分析显示,DoTrxL2同小兰屿蝴蝶兰、石刁柏亲缘关系较近。qRT-PCR分析显示,DoTrxL2在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有表达差异,其中在原球茎形成早期表达量较高,表明该基因对原球茎形成有着促进作用;而在种子和花中表达量高,表明该基因对植物组织的生殖发育具有重要调控作用。

外阴硬化性苔藓病变中的抗氧化酶变化

目的:外阴硬化性苔藓(vulvar lichen sclerosus,VLS)是一种外阴皮肤瘙痒、变白的自身免疫性慢性炎症性疾病。目前VLS的发病机制尚不清楚,有研究表明其可能与氧化应激有关。本研究旨在通过探讨锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)、细胞质内过氧化物酶2(peroxidase 2,PRDX2)、硫氧还蛋白1(thioredoxin 1,TRX1)3种抗氧化酶在VLS中的表达情况及其与VLS发生和发展的关系。方法:选取中国医科大学附属第一医院妇科门诊手术切除的VLS组织标本40例(其中早期20例,进展期20例),外阴整形术切除的正常外阴皮肤组织标本20例。采用免疫组织化学SP方法检测MnSOD、PRDX2和TRX1蛋白在外阴皮肤组织中的表达情况,并在高倍显微镜下测定平均光密度值。采用Pearson相关分析计算VLS组织中MnSOD、PRDX2、TRX1三者之间的相关性。结果:VLS组织中MnSOD的平均光密度值低于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中MnSOD平均光密度值高于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中PRDX2的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中PRDX2的平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中TRX1的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中TRX1平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示:MnSOD和PRDX2(r=-0.615)、MnSOD和TRX1(r=-0.881)的表达均呈负相关(均P<0.05);PRDX2和TRX1表达呈正相关(r=0.670,P<0.05)。结论:在VLS病变进展中,抗氧化酶MnSOD表达减少,PRDX2和TRX1表达增加。

硫氧还蛋白2在老年白内障患者晶状体前囊膜中的表达及其与细胞凋亡、氧化应激的关系

目的探讨硫氧还蛋白2(thioredoin-2,Trx-2)在老年白内障患者晶状体前囊膜中的表达及其与细胞凋亡、氧化应激的关系。方法选择年龄相关性白内障并行超声乳化术吸出白内障的老年患者40例40眼作为研究组,因外伤行透明晶状体取出术(非白内障)的老年患者20例20眼作为对照组。采用免疫组织化学法测定晶状体前囊膜组织中Trx-2的阳性表达情况。比较2组标本组织和研究组不同Trx-2(+)、Trx-2(-)标本组织中凋亡相关分子(P53、Bcl-2、ASK1)蛋白表达量、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平。结果研究组标本中Trx-2表达阳性率显著低于对照组标本(P<0.05)。研究组晶状体前囊膜标本中P53、ASK1的蛋白表达量高于对照组,Bcl-2的蛋白表达量低于对照组;标本上清液中SOD、CAT、GSH的水平低于对照组,MDA的水平高于对照组(P<0.01)。研究组中,Trx-2(+)的晶状体前囊膜标本中P53、ASK1的蛋白表达量低于Trx-2(-)者,Bcl-2的蛋白表达量高于Trx-2(-)者;标本上清液中SOD、CAT、GSH的水平高于Trx-2(-)者,MDA的水平低于Trx-2(-)者(P<0.05或P<0.01)。结论老年白内障患者晶状体前囊膜中Trx-2表达减弱,其抗凋亡及抗氧化应激作用减弱,可能是导致疾病发生发展的重要分子机制之一。

硫氧还蛋白还原酶-2在非小细胞肺癌中的表达及预后

目的:探讨硫氧还蛋白还原酶-2(thioredoxin reductase-2,TrxR2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法:免疫组化法检测90例手术后NSCLC癌组织及癌旁正常肺组织中TrxR2的表达,分析TrxR2表达与患者临床病理特征及生存预后的关系。结果:TrxR2在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05),TrxR2的表达与患者性别、是否吸烟、肿瘤组织分级、TNM分期无相关性(P>0.05),而与年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。随访90例患者发现TrxR2高表达组的患者预后更差(P<0.05)。结论:TrxR2在NSCLC中高表达,有望成为NSCLC转移及预后判断的重要指标。

硫氧还蛋白结合蛋白-2／维生素D3上调蛋白1在哮喘病人外周血嗜酸性粒细胞的表达(英文)

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白／维生素D3上调蛋白1(VDUP1)在不同时期哮喘病人嗜酸细胞中的表达及其与哮喘临床症状的关系。方法抽取正常自愿受试者14例,急性发病未经任何治疗的16例轻到中度哮喘病人和通过吸入糖皮质激素而处于哮喘缓解期的35例病人的外周静脉血15 ml进行外周血嗜酸细胞计数和诱导痰嗜酸细胞计数,随后行肺功能检查测定FEV1．0％和PEF％。分离纯化静脉血嗜酸细胞,提取总RNA。RT-PCR同时扩增特异性片段 VDUP1和内参β-Actin。取10μl反应物进行1％琼脂糖凝胶电泳,用Gel-Pro软件分析凝胶成像,测定VDUP1和β-Actin灰度值,求VDUP1／β-Actin比值,并比较不同组别之间VDUP1表达的变化,分析VDUP1／β-Actin比值与诱导痰嗜酸细胞、FEV1．0％、PEF％的相关性。结果急性期未经治疗的哮喘病人嗜酸细胞(0．314±0．242)与正常人比较(0．532± 0．279)显著降低,而经吸入糖皮质激素处于缓解期哮喘病人嗜酸细胞VDUP1／β-Actin比值(0．612±0．381)与正常对照组无显著差异。在急性发作未经治疗哮喘组嗜酸细胞VDUP1表达与FEV1．0％(r=0．587,P=0．046)和PEF％(r=0．563． P=0．033)呈正相关,而与诱导痰嗜酸细胞计数呈负相关关系(r=0．436,P=0．049)。结论嗜酸细胞VDUP1的表达与哮喘嗜酸细胞活化相关,并影响哮喘病人的临床症状。