苏氨酸操纵子的克隆表达及天冬氨酸激酶的测活

依据途径工程的基本原理 ,为构建大肠杆菌苏氨酸高产菌林 ,需强化表达苏氨酸生物合成途径中的关键基因。以EcoliMC4 10 0染色体DNA为模板 ,用PCR扩增了天冬氨酸激酶基因thrA部分片段 ,以之为探针从基因文库中克隆得到thr操纵子 ,包括启动子、结构基因 (thrA、thrB、thrC)、终止子。将结构基因装载于pET lla质粒上的T7启动子下游 ,得到了表达质粒pTHlla 0 8。转化E .coliBL2 1(DE3) ,经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,获得了高效的表达。含表达质粒的菌体胞内粗提液经酶活分析表明 ,天冬氨酸激酶的活性为含载体质粒pET lla的对照菌的 10