THE EVALUATION METHODS OF VELVET ANTLER AND THE DETERMINATION OF NUCLEOSIDES AND STEROID HORMONES IN DIFFERENT PARTS FROM SIKA DEER AND RED DEER

Velvet antler is an important and precious traditional Chinese animal medicine,and was used for strengthening the kidney,anti-fatigue,improving sexual function and so on.But the evaluation methods of velvet antler and the scientific evidence for the use of antler is insufficient.Materials and Vacuum freeze drier was used for dehydration of the fresh antler at-60.,6 pa for 24 h.

梅花鹿茸和马鹿茸多肽化学性质及生物活性比较

目的 :比较梅花鹿茸多肽和马鹿茸多肽化学组成及生物活性异同。方法 :用相同工艺提取梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分 ;采用电泳和质谱等分离分析手段比较多肽组分的化学性质 ;用 [3H]TdR参入细胞DNA比较两种鹿茸多肽的促细胞增殖活性。结果 :梅花鹿茸和马鹿茸多肽组分的电泳图谱和质谱有明显差异 ,而中国的东北马鹿茸和新西兰马鹿茸多肽的图谱十分相近 ;梅花鹿茸和马鹿茸多肽对软骨细胞和表皮细胞分裂都有促进作用 ,但马鹿茸多肽对表皮细胞的增殖作用比梅花鹿茸多肽强。结论

不同生长时期梅花鹿鹿茸差异蛋白质组学分析

旨在从分子水平认识鹿茸生长机制,本研究以10、40、60与130d的梅花鹿鹿茸为试验材料,运用双向凝胶电泳(2-DE)、质谱鉴定技术与生物信息学方法对梅花鹿鹿茸生长过程中差异表达蛋白质进行研究。结果显示,有46种蛋白质差异性表达,且主要参与细胞骨架、转运过程、信号转导、细胞凋亡、骨发育、蛋白质合成、核酸代谢、免疫、能量代谢、细胞增殖、抗氧化、蛋白质折叠等生物学过程。结合鹿茸的快速生长与快速骨化的独特生长过程,对差异表达蛋白质中的骨发育相关蛋白、抗氧化蛋白、细胞凋亡相关蛋白做进一步分析,发现P4HB、SPARC、过氧化物还原酶2、过氧化物还原酶4、半乳糖凝集素1、视黄酸结合蛋白1等6种蛋白质在鹿茸快速生长与快速骨化过程中起着重要的作用,为鹿茸生长与骨化机制的进一步研究奠定基础。

基于蛋白质组学技术的鹿茸不同部位差异蛋白筛选

旨在了解梅花鹿鹿茸不同部位蛋白表达差异,本研究以腊片部位、血片部位和骨片部位的梅花鹿鹿茸组织为试验材料,运用双向电泳(2-DE)和MALDI-TOF-TOF串联质谱技术对不同部位梅花鹿鹿茸差异表达蛋白质进行鉴定,并对差异蛋白进行生物信息学分析。结果表明,成功筛选出37个差异表达蛋白,主要涉及多细胞生物体发生、解毒、细胞成分组织或生物发生、细胞聚集、定位、对刺激的反应、生物黏附、发育、单一生物体发生、免疫系统等生物学过程。其中鹿茸腊片、血片、骨片组织中分别有18、5与14个蛋白质表达上调。对差异表达蛋白作进一步分析发现,转录延伸因子(EFB1)、视黄酸结合蛋白(CRABP1)在鹿茸的快速生长中起重要调控作用,而载脂蛋白A1(APOA1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、转甲状腺素蛋白(TTR)在鹿茸的快速骨化中起重要的调控作用,对鹿茸快速生长与骨化机制的进一步研究具有重要意义。

鹿茸细胞生长因子的研究进展

梅花鹿或马鹿的鹿茸不仅是哺乳动物肢体再生领域的一种理想的研究模型,也是独一无二的再生哺乳动物器官。细胞生长因子在鹿茸快速生长过程中起着重要作用。文章对胰岛素生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、转化生长因子、成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子在鹿茸再生发育过程中的作用进行了简要综述。

马鹿茸、梅花鹿茸不同部位无机元素含量测定分析

目的 测定分析中国新疆塔里木马鹿茸、东北马鹿茸和东北梅花鹿茸不同部位中无机元素含量。方法 采用原子吸收光谱法和电感耦合等离子体发射光谱法。结果 从所测鹿茸各部位均检测出26种无机元素。其中包括5种人体必需的常量元素Ca、P、Na、Mg、K和11种人体必需的微量元素Fe、Cr、Cu、Sr、Ni、Zn、Mo、Co、Mn、V、Sn。结论 各鹿茸不同部位的无机元素种类相同,同一元素在同一鹿茸不同部位的含量有一定差异;同一元素在不同鹿茸相同部位中的含量也有差异。

日粮单宁水平对育成期雄性梅花鹿生长发育、角基萌发和初角茸生长的影响

本试验旨在研究日粮单宁水平对育成期雄性梅花鹿生长发育、角基萌发和初角茸生长的影响。选用24头体况相近的育成期雄性梅花鹿,采用单因素随机分组设计,分为4组,每组6头。对照组饲喂不添加单宁的基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中分别添加1%、2%、4%单宁。预试期4d,正试期140d。结果表明,Ⅱ组梅花鹿体重、体高的平均日增长显著高于对照组(P<0.05),各组间体长、管围的平均日增长差异均不显著(P>0.05);与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组梅花鹿角基萌发时间早;Ⅰ组梅花鹿初角茸左、右支茸长均高于对照组和Ⅱ、Ⅲ组,其中Ⅰ组梅花鹿初角茸右支茸长显著高于Ⅲ组(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组梅花鹿初角茸左、右支茸重均显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,日粮中添加单宁能促进梅花鹿的生长发育,提前角基萌发时间,同时提高初角茸的产量;育成期雄性梅花鹿日粮中单宁的适宜添加量为2%。

梅花鹿鹿茸总蛋白对庆大霉素诱导肾毒性的保护作用及其机制

目的研究梅花鹿鹿茸总蛋白(SVPr)对庆大霉素(GM)诱导的肾损伤的保护作用及其机制。方法(1)体外培养HEK293细胞分为正常对照组(给予等量PBS)、GM模型组(GM 3 g·L^(-1)孵育24 h)和GM+SVPr组(给予SVPr 1,2和4 g·L^(-1)孵育24 h后,分别加入GM 3 g·L^(-1)共同孵育24 h)。以MTT法测定GM对HEK293细胞存活率的影响;以生化试剂盒方法分别测定HEK293细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞裂解液中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。(2)将42只ICR小鼠随机分为正常对照组(ig蒸馏水10 d,第3～10天ip给予生理盐水)、GM模型组(ig蒸馏水10 d,第3～10天ip给予GM 100 mg·kg^(-1))、阳性对照组(ig给予芥子酸20 mg·kg^(-1)10 d,第3～10天给药前6 h ip给予GM100 mg·kg^(-1))和SVPr组(分别ig给予SVPr 50,100和200 mg·kg^(-1)10 d,第3～10天给药前6 h ip给予GM100 mg·kg^(-1))。实验结束后记录小鼠体质量和肾质量,计算肾指数;以生化试剂盒方法分别检测小鼠血清中血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的水平,肾组织中过氧化氢酶(CAT)和SOD活性、MDA和GSH含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;HE染色观察肾组织病理变化。结果体外细胞实验结果表明,SVPr 1,2和4 g·L^(-1)预处理可缓解GM 3 g·L^(-1)诱导的HEK293细胞存活率的降低(P<0.01);缓解GM诱导的HEK293细胞GSH和SOD的降低,及MDA和LDH水平的升高(P<0.01)。小鼠实验结果表明,SVPr 50,100和200 mg·kg^(-1)和阳性药芥子酸20 mg·kg^(-1)均显著抑制GM 100 mg·kg^(-1)诱导的小鼠肾指数、BUN、Cr、MDA、TNF-α和IL-6水平的升高(P<0.05,P<0.01),以及SOD,CAT和GSH水平的降低(P<0.05,P<0.01),并改善肾组织病理变化。结论 SVPr可有效减轻GM诱导的小鼠肾损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。

不同产地梅花鹿鹿茸矿物质元素含量测定与道地性分析

目的:通过对不同产地梅花鹿鹿茸中矿物质元素含量分析,研究鹿茸的道地性及安全性。方法:从吉林省和山东省7个梅花鹿养殖区收集了42份鹿茸样品,冻干处理保存,采用微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定样品中18种矿物质元素含量,统计分析不同产地样品中矿物质元素含量的差异。同时,采用主成分分析对所有样品进行聚类以及皮尔逊相关性系数分析,阐明18种矿物质元素之间的相关性。结果:不同产地鹿茸中所测多数矿物质元素含量存在差异性,其中Zn含量吉林省鹿茸极显著低于山东省鹿茸;重金属元素Pb、Cd、Cu、As在鹿茸中含量很低,均在食品重金属含量允许范围内。结论:ICP-MS方法可准确测定冻干鹿茸中矿物质元素含量,不同产地间存在差异,不同产地样品中矿物质元素含量存在相关性;Zn含量可以作为单一相关的候选因素,研究鹿茸的道地性;以重金属元素为指标,鹿茸作为食品和药材的原材料是安全的。

梅花鹿鹿茸总蛋白对糖尿病肾病大鼠肾损伤的治疗作用及分子机制

目的探讨梅花鹿鹿茸总蛋白提取物(SVPr)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的治疗作用及分子机制。方法将120只Sprague Dawley大鼠按照简单随机数字表法分为对照组、模型组、二甲双胍组、低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组,每组20只。模型组、二甲双胍组、低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组大鼠造模前禁食12 h,单次腹腔注射链脲佐菌素50 mg•kg^(-1)制备DN大鼠模型;造模成功后,二甲双胍组大鼠给予二甲双胍500 mg•kg^(-1)•d^(-1)灌胃,低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组大鼠分别经尾静脉注射质量浓度为1.47、2.94、4.41 g•L^(-1)的SVPr溶液0.1 mL,对照组及模型组大鼠注射等量生理盐水,每日1次,持续给药4周。采用生物化学法检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、血糖、24 h尿蛋白水平,酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠肾组织中活性氧(ROS)、核因子-κB(NF-κB)水平,Western blot法检测各组大鼠肾组织中沉默调节蛋白1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白相对表达量。结果模型组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白、血糖水平均显著高于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白、血糖水平显著低于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠SCr、24 h尿蛋白水平显著低于二甲双胍组(P<0.05),高剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠BUN、血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量SVPr组大鼠SCr水平显著低于二甲双胍组,BUN、血糖水平显著高于二甲双胍组(P<0.05);中剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量SVPr组大鼠BUN、24 h尿蛋白、血糖水平显著高于二甲双胍组(P<0.05),低剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠SCr水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量SVPr组大鼠BUN、血糖、24 h尿蛋白、SCr水平显著低于中剂量SVPr和低剂量SVPr组,中剂量SVPr组BUN、血糖、24 h尿蛋白、SCr水平显著低于低剂量SVPr组(P<0.05)。模型组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著高于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于二甲双胍组(P<0.05);中剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS水平显著高于二甲双胍组(P<0.05),中剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中NF-κB水平差异无统计学意义(P>0.05);低剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著高于二甲双胍组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS、NF-κB水平显著低于中剂量SVPr组和低剂量SVPr组;中剂量SVPr组大鼠肾组织中ROS水平显著低于低剂量SVPr组(P<0.05),中剂量SVPr组与低剂量SVPr组大鼠肾组织中NF-κB水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量均显著低于对照组(P<0.05);低剂量SVPr组、中剂量SVPr组、高剂量SVPr组和二甲双胍组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于模型组(P<0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2相对表达量显著高于二甲双胍组(P<0.05),高剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中HO-1相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);中剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2相对表达量显著高于二甲双胍组,HO-1相对表达量显著低于二甲双胍组(P<0.05);低剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1相对表达量显著高于二甲双胍组(P<0.05),低剂量SVPr组与二甲双胍组大鼠肾组织中Nrf-2、HO-1相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于中剂量SVPr组和低剂量SVPr组,中剂量SVPr组大鼠肾组织中SIRT1、Nrf-2、HO-1相对表达量显著高于低剂量SVPr组(P<0.05)。结论SVPr可通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB转录活性、激活HO-1/Nrf-2抗氧化应激信号,减轻DN大鼠肾损伤。

异硫氰酸胍法提取梅花鹿鹿茸组织总RNA

采集6只2岁梅花鹿鹿茸样品，应用异硫氰酸胍法提取其总RNA，建立了鹿茸总RNA适宜提取条件。实验最终提取RNA的紫外吸收值为：A260／A280=1．73～1.86，A260／A230=2．16～2．53，经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、18s、5s 3条带，其亮度满足未降解RNA的特征，且无明显DNA污染。

超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法测定梅花鹿茸中总游离氨基酸与游离氨基酸含量

目的建立市售梅花鹿茸中总游离氨基酸及16种游离氨基酸的含量测定方法,为该药材的质量评价提供检测手段。方法采用紫外分光光度法,以色氨酸为对照品,建立市售梅花鹿茸中总游离氨基酸的含量测定方法,检测波长570 nm。采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法(UPLC-QqQ-MS/MS),建立市售梅花鹿茸样品中16种游离氨基酸含量测定方法,采用ACQUITY BEH Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);以20 mmol·L-1乙酸铵溶液-含0.5%甲酸的乙腈溶液(15:85)为流动相A,含0.5%甲酸的20 mmol·L-1乙酸铵溶液为流动相B,梯度洗脱;流量0.6 mL·min-1;柱温35℃。质谱部分采用电喷雾电离源(ESI),以多反应离子监测(MRM)模式检测。结果总游离氨基酸成分浓度与吸光度呈良好线性关系(r=0.9996);方法精密度、重复性和稳定性RSD均<3.3%;平均加样回收率98.9%;RSD为2.1%。16种游离氨基酸成分浓度与峰面积呈良好线性关系(r>0.9995);方法精密度、重复性和稳定性RSD均<4.9%;平均加样回收率97.7%~99.8%;RSD为1.2%~2.6%。结论该方法简便、准确、可靠,可用于梅花鹿茸的品质评价。

鹿茸组织microRNA的研究进展

梅花鹿鹿茸每年的周期性再生是一个多种组织细胞快速增殖分化的过程,其中大量细胞生长因子参与了对鹿茸生长的调控。microRNA是一类物种间广泛存在的高度保守的非编码单链RNA,通过调控靶基因的翻译发挥其功能作用。本文介绍了microRNA的合成过程及结构,综述了近年来鹿茸组织microRNA的研究进展。microRNA通过调控鹿茸组织生长因子基因的表达,参与鹿茸再生发育的过程。梅花鹿microRNA的研究将有助于从分子水平上揭示鹿茸再生调控的分子机理。

柱前衍生HPLC法测定梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中氨基酸的含量

目的:建立测定梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材中17种氨基酸含量的方法。方法:采用柱前衍生-高效液相色谱法,色谱柱为Aglient ZORABX SB-Aq C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为40℃,检测波长为254 nm,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(pH6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(8∶2),流速为1 mL/min。结果:该方法线性关系良好(R2=0.9997),平均加样回收率为100.32%,RSD%为1.17%～4.01%。结论:鹿茸药材的质量受鹿的品种、自然环境、养殖技术等因素的影响。该方法适用于梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中氨基酸的含量测定,可为质量控制提供保证。

光照强度对梅花鹿茸生长影响的研究

文本采用露天电光源控制光周期的方法，探讨了不同光照强度对圈养梅花鹿鹿茸生长的影响。将１６５头雄性梅花鹿分组置于４种光照强度（Ｉ＝１５０、３００、４５０、６００ｌｕｘ）下，每日人工增加光照时数为２.００～６.７５ｈ，观测鹿茸生长发育的情形。在Ｉ≥３００ｌｕｘ时，控光鹿群较对照鹿群平均提前２７.１ｄ脱角生茸和２０.３ｄ换毛；头茬茸平均增产率为２１.４７％，再生茸平均增产率为１７９.１８％。故认为，采用电光源均匀布设时，Ｉ≥３００ｌｕｘ是控光增茸技术中最适光照强度，并可获得较显著的经济效益。

基于组织结构特征和蛋白质与钙含量比值的鹿茸分区研究

目的建立客观鹿茸分区方法。方法采集3种规格的鹿茸,分别为马鹿三杈茸、梅花鹿三杈茸和二杠茸。通过纵向剖面、横断面和组织学切片对鹿茸内部组织结构、形态特征和组织类型进行分析,确定鹿茸的感官分区指标。通过测定鹿茸不同区段成分上的差异,设立数据化的分区指标。结果建立血管形态和骨密质环2个感官分区指标,蜡片:无肉眼可见血管;粉片:血管细密,粗细均匀;蜂片:开始出现密质骨时,周围血管细密,中间粗,呈蜂窝状;骨片:密质骨连成骨密质环。利用蛋白质含量和钙含量的比值设定了不同区段鹿茸分区值(PV值):蜡片≥65.00,粉片6.30~64.99,蜂片4.70~6.29,骨片≤4.69。结论通过感官指标和PV值建立了鹿茸的客观分区方法,能够精确客观地对鹿茸进行分区,不仅适用于不同种鹿茸,如马鹿茸和梅花鹿茸;而且也适用于不同规格的鹿茸,如二杠茸和三杈茸;还能够适用于不同加工方式处理的鹿茸,如传统煮炸法和冷冻真空干燥法。该方法为增强鹿茸治疗的针对性和促进鹿茸深加工奠定了基础。

煮炸和冷冻干燥对鹿茸中脂溶性成分及色差的影响

本文比较了不同加工方法(煮炸干燥法和真空冷冻干燥法)对鹿茸理化性质的影响。一副新鲜梅花鹿鹿茸,一支冷冻干燥法加工,另一支传统煮炸法加工;然后对鹿茸中脂肪酸、胆固醇及色差进行分析。在冻干鹿茸中确定了16种脂肪酸,煮炸鹿茸为13种,且冻干鹿茸中脂肪酸总量显著(p<0.05)高于煮炸鹿茸;煮炸和冻干鹿茸中脂肪酸致动脉硬化指数(AI)分别为1.95和1.77,凝血指数(TI)分别为2.44和2.32;冻干鹿茸中胆固醇含量明显高于煮炸鹿茸;鹿茸色泽差异显著,冻干鹿茸a*值极显著(p<0.01)高于煮炸鹿茸,b*和h值(p<0.01)极显著低于煮炸鹿茸,这表明冻干样品色泽更加亮、红、蓝。真空冷冻干燥是一种有效的干燥方法,能有效保持鹿茸中脂溶性成分及色泽。