重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核细胞增殖的影响

目的探讨TPO模拟肽(thrombopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(growth hormone,GH)的重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核系细胞增殖的影响,以及对血小板生成有显著调控作用的球蛋白转录调节因子(globin transcription factor-1,GATA-1)表达的调控作用。方法体外培养Dami细胞,100ng/ml的重组融合蛋白rTMP-GH作用7d后,观察巨核细胞集落形成能力,分析rTMP-GH对Dami细胞增殖的影响。同时,采用Western blot和RT-PCR方法分别检测Dami细胞中GATA-1的蛋白水平和mRNA表达变化,探讨rTMP-GH对巨核细胞生成血小板的调节作用。结果rTMP-GH处理后Dami细胞的集落形成能力显著增强,转录因子GATA-1的mRNA和蛋白表达水平显著上调,其调节作用明显强于空白对照组和GH组。结论rTMP-GH能够刺激巨核细胞增殖分化和上调GATA-1的表达,具有促进血小板生成的作用。

重组融合蛋白rTMP-GH在巴斯德毕赤酵母中表达的研究

目的实现TPO模拟肽(throm bopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(human growth hormone,hGH)的重组融合蛋白rTMP-GH在巴氏毕赤酵母中的高效表达。方法以含有rTMP-GH核苷酸序列的原核质粒为模板,PCR方法获得rTMP-GH的编码序列,并亚克隆至载体pPIC9K中,将所构建pPIC9K-rTMP-GH表达质粒转化酵母宿主细胞GS115,MD/MM平板及G418抗性筛选高表达株,然后进行试管补料分批表达,Western blot对表达产物进行鉴定,通过巨核细胞集落形成能力对其生物学活性进行初步检测。结果成功构建pPIC9K-rTMP-GH表达质粒,筛选到高表达rTMP-GH重组融合蛋白的巴氏毕赤酵母细胞株,初步证实所表达产物具有刺激巨核细胞集落形成的能力。结论成功实现了rTMP-GH融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的高效表达。

重组融合蛋白rTMP—GH促进放射损伤小鼠血小板生成的实验研究

目的研究TPO模拟肽（TMP）与人生长激素（GH）的重组融合蛋白rTMP-GH对放射损伤小鼠血小板生成的促进作用。方法^60Coγ射线全身一次性均匀照射5Gy，照后皮下注射200μg／kg的rTMP—GH或rhGH，每日1次，连续用药7d，对照组给予同等体积生理盐水。尾静脉取血检测血小板数量变化；照后16d取小鼠股骨，组织切片观察骨髓病理变化。结果照后10d起，rTMP-GH处理组各时相的外周血血小板数明显高于rhGH处理组和生理盐水对照组，尤其是血小板的最低值显著升高（P〈0．01），照后22d已升至正常水平的80％，对照组仅为30％。骨髓病理观察显示，rTMP—GH处理组骨髓造血重建明显，并见大量不同时期巨核细胞；rTMP-GH处理组骨髓组织切片每个视野下的巨核细胞平均数（3．07±0．32）明显高于rhGH处理组（2．20±0．22，P〈0．05）和生理盐水对照组（0．87±0．19，P〈0．01）。结论rTMP-GH能快速、有效地促进放射损伤小鼠骨髓巨核细胞增年和向小析年矗．