尿素改善SDS-PAGE分离小分子肽的效果

目的 :探讨尿素对Tricine-SDS -PAGE系统分离小分子蛋白的影响。方法 :利用常规SDS -PAGE和Tricine -SDS - PAGE分离小分子肽 ,比较不同组成的分离胶的分离效果。结果 :调整聚丙烯酰胺凝胶的分子组成 ,使丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度为 5 .0 5 % ,能够改善小分子肽的分离效果。加入 36 %的尿素比加入甘油可以更有效分离 1kD的小肽。但尿素胶聚合太快影响分离效果。结论 :尿素改善SDS -PAGE分离小分子肽的效果 ,制作尿素胶时 ,宜采用低浓度的AP和TEMED使凝胶慢速聚合。

改良的Tricine—SDS—PAGE电泳检测胸腺肽分子量

目的建立一种分析胸腺肽制剂中多肽分子量分布的简便可行的方法。方法采用改良的Tricine-SD-PAGE电泳方法分析胸腺肽制剂中多肽的分子量分布，并分析其中胸腺素α1的含量。结果采用该法可检出1μg的胸腺肽α1，分析国内市场上的胸腺肽制剂多肽分子量分布范围在3．5～8．5kD。结论该法适用于分析胸腺肽制剂中多肽组分的分子量分布和胸腺肽α1的存在，可用于胸腺肽制剂的质量控制。

尿素-SDS-PAGE测定小分子多肽相对分子质量方法的建立

试验旨在建立一种简易快速测定小分子多肽相对分子质量的SDS-PAGE电泳方法。通过改进分离胶交联度为6%,丙烯酰胺总浓度为15%,并加入6%的尿素,对所测得的多肽相对分子质量进行线性回归分析。结果表明,得到的标准曲线线性相关系数R2达到0.993 8,测得条带的相对分子质量分别为9.212 9 kD,建立的方法操作简单、耗时短,且小分子多肽成像清晰,是一种具有很高实用价值的测定方法。

不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对双向电泳中蛋白分离的影响

目的:探讨双向电泳中不同浓度和梯度的SDS-PAGE胶对肠道菌蛋白分离效果的影响。方法:制备弗氏2a志贺菌2457T野生株37℃晚期全菌蛋白质样品,进行不同浓度及梯度的SDS-PAGE,研究分离肠道菌蛋白最适宜的SDS-PAGE胶浓度。结果:获得了3个不同浓度(10%、12.5%和15%)的均一胶电泳图谱和3个不同梯度(4%～15%、10%～20%和12%～14%)的电泳图谱,并比较了这些图谱的分离效果;同时,为了分析肠道菌天然表达蛋白的相对分子质量范围,鉴定了8个极端相对分子质量蛋白。结论:对于肠道菌蛋白质的分离来说,12.5%的均一胶或12%～14%的梯度胶较为适宜。

花背蟾蜍角膜和皮肤蛋白质的SDS-PAGE分析

本文用梯度SDS-PAGE方法,分析和比较了花背蟾蜍蝌蚪和成体皮肤及成体角膜中蛋白质组分的异同,结果表明成体角膜约有33种蛋白质组分;成体皮肤约有27种;蝌蚪皮肤约24种.蝌蚪皮肤与成体皮肤蛋白质组分数量和分布趋势相似,但成体皮肤的组分比蝌蚪的多,一些蛋白质组分的相对含量与蝌蚪的有差别.角膜与前两者相比差别明显,一是蛋白质组分数较多,其次分布趋势差异较大.

普通小麦线粒体的制备及其蛋白质SDS—PAGE分析

用差速离心和密度梯度离心技术,分离、纯化了普通小麦黄化苗线粒体;以SDS—PAGE分析了多肽构成.实验结果表明:普通小麦线粒体密度梯度离心行为与其它植物相同;在电泳图谱中其多肽呈现40—50条带纹。

V型细胞质雄性不育小麦线粒体蛋白质的研究

本实验以 V型细胞质雄性不育小麦幼穗为材料 ,用蔗糖衬垫法和两相法成功地分离纯化了小麦幼穗线粒体 ,并用 SDS- PAGE电泳方法结合高灵敏度的银染技术对其线粒体蛋白质进行了比较分析 ,发现雄性不育系与相应保持系之间有明显差异 ,不育系 (V1A和 V2 A)均缺少一个分子量为 14k D的蛋白质。线粒体与 V型细胞质雄性不育的产生可能存在着某种特定的关系。

牛和羊胎盘肽的制备及其生物活性的研究

目的探索一种新型的免疫调节剂,充分利用动物胎盘。方法利用超滤法从牛和羊胎盘中提取胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE法测定其相对分子质量;利用紫外光扫描其最大吸收峰;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用。结果从牛和羊胎盘中成功提取出了胎盘肽,其相对分子质量分别为4 785和4 386;其最大吸收峰分别为210.5和225.4 nm;牛和羊胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中牛胎盘肽以1∶1×103、1∶1×1042组吸收度明显高于抑制组(P<0.05);羊胎盘肽以1∶1×102、1∶1×103和1∶1×1043组效果最为明显(P<0.01)。结论牛和羊胎盘中含有的胎盘肽可成功提取出来,其可明显提高淋巴细胞的转化率,是一种较为理想的免疫调节剂。

用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较

对于小分子多肽的分析目前多采用甘油—SDS—PAGE系统 ,但经实践后发现 ,此系统电泳时间太长 ,导致小分子扩散丢失较多 ,小分子成像不清。后经用尿素代替甘油 ,同时降低三层胶的浓度 ,制成 15.5%T(C =6 % )的分离胶、10 %T(C =3% )的间隙胶与 4 %T(C =3% )的浓缩胶 ,结果不但节省了电泳时间 ,且小分子多肽成像清楚。

羊和猪胎盘肽的提取

利用超滤法从羊和猪的胎盘中提取胎盘肽,用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法对其进行初步定性鉴定。成功分离显示出了羊的胎盘肽,其分子质量小于5 ku,与人胎盘肽的分子质量范围完全符合。猪的6 ku的蛋白带很明显,但低于5 ku的蛋白带不是很明显。

小麦低分子量麦谷蛋白亚基组成研究

利用改良的两步一向SDS-PAGE two-step one-dimensional SDS-PAGE 分析了几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基 L MW-GS 组成. 70 %热乙醇提取总谷蛋白,1 1 %分离胶进行第一步SDS-PAGE分离,电泳1 h后切取顶端1 cm胶条并置于巯基乙醇溶液进行还原,还原后的胶条于1 1 %～1 6.5%的梯度胶进行第二步SDS-PAGE分离.结果显示,两步一向SDS-PAGE可以彻底除去清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白对L MW-GS分离的背景干扰,提高L MW-GS的分辨率.对几种小麦低分子量麦谷蛋白亚基分析表明:L MW-GS组合比HMW-GS更为丰富,每种小麦含有2～5种B亚基,2～4种C亚基,B。

有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法

目的:建立一种有效分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。方法:针对1kDa分子量环脂肽的特点,对凝胶的组分和比例、凝胶的聚合速度等电泳条件进行了优化。结果:改进凝胶组分和比例,使得浓缩胶为7%T、3%C,夹层胶为12%T、3%C,致密胶为16.5%T、6%C;并在胶中加入尿素和甘油;同时加大APS的量使聚合速度加快。由此得到的环脂肽电泳条带清晰、平稳、紧凑,显示分子量为1.05kDa,与质谱结果吻合。结论:新建立的Tricine-SDS-PAGE是一种有效的分离1kDa分子量环脂肽的电泳方法。

羊和猪胎盘肽的制备及其生物活性的初步研究

利用超滤法从羊和猪胎盘中提取出了胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法测定羊胎盘肽的分子量为4,386Da;利用紫外光扫描得其最大吸收峰分别为225.4 nm和209.6 nm;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用MTT比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用,结果显示:羊和猪胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中羊胎盘肽以1:102、1:103和1:104三组效果最为明显(P<0.01);而猪胎盘肽以1:102、1:103两组效果最为明显(P<0.01)。

重组人胸腺素α_1融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化(英文)

为提高人胸腺素α1(Tα1)融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了本实验室构建的pET39-Tα1重组质粒在E.coli BL21(DE3)宿主菌中的表达条件。经SDS-PAGE和凝胶成像系统GDS-8 000分析结果表明,重组菌以LB为培养基,卡那霉素浓度为50 mg/L,开始诱导时的菌体密度为OD600=0.5,所加IPTG的浓度为0.5 mmol/L,27.5℃摇床200 r/min振荡诱导培养10 h时,可在周至空间中获得高效表达的可溶的Tα1融合蛋白,占周质蛋白总量的64.7%,为下一步纯化工作提供了方便。

一种鉴定胸腺素高活性小分子组分的灵敏简便方法

用笔者稍加改进的梯度ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ尿素系统，分别测定自制的胸腺素Ｔ１溶液，观察到一条５．３ｋｕ的电泳谱带．Ｔ１溶液用Ｅ－玫瑰花结法测定时，生物活力较高。

浓度梯度胶制作方法改良研究

通过对小麦高分子量麦谷蛋白亚基 (HMW GS)、低分子量麦谷蛋白亚基(LMW GS)的SDS PAGE的电泳分离过程研究 ,找出了一种适合于在板状电泳中进行的梯度胶制备方法 .实验结果表明 ,采用酸式滴定管依次混合 1 1 %和 1 6%两种分离胶制备成 1 1 %～ 1 6%的浓度梯度胶 ,可以很好地分离HMW GS 2亚基和 2 亚基 .该方法所用设备简单 ,制备操作方便 。

嗜碱菌Alkalimonas amylolytica N10在不同pH条件下的膜蛋白差异表达研究

为了探讨嗜碱菌的嗜碱机制，对一株新型专性嗜碱菌（Alkalimonas amylolytico N10）在不同pH条件下的差异膜蛋白质组进行了初步的研究。在3种pH条件下（pH值分别为8．4、9．4和10．4）培养的该菌的膜蛋白，通过8％-20％的梯度SDS—PAGE进行分离。经胶图图像和统计计算，7条电泳条带的相对染色强度随培养液的pH值变化而改变，其中仅有一条条带强度随pH值增高而增加。这些条带经胰蛋白酶胶内消化和高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱（LC—Ms／Ms）分析，共鉴定出了12种蛋白质。其中4种膜蛋白已有报道直接或间接参与细胞pH稳态的保持，其他几种蛋白则是首次发现其表达水平与生活环境的pH变化可能相关。

小麦T型细胞质雄性不育系和保持系蛋白质的比较研究

以小麦T型雄性不育系及其保持系种子为材料,用双向电泳结合高灵敏度银染技术对其胚乳醇溶蛋白进行分析,发现两系之间有明显差异.不育系14A有两个特异蛋白,分子量分别为36kD和46kD,而缺少45kD的多肽;不育系11A有24kD的特异蛋白,且30kD及28kD的两种多肽,其浓度较保持系明显增加.又用梯度SDS-PAGE方法比较了不同发育时期(苗期、开花期、种子)可溶性蛋白的组分,发现两系之间在种子和花药中有明显差异,而在苗期叶片未发现显著差异,表明T型细胞质雄性不育基因的表达具有时空性.本文还对非平衡pH电泳的应用进行了讨论.

小麦高分子量麦谷蛋白亚基分离方法研究(英文)

小麦高分子量麦谷蛋白亚基 (HMW- GS)与小麦的面包烘烤质量和面粉的加工特性密切相关 ,SDS- PAGE是其常用的分离方法之一。SDS- PAGE方法一般分为 2类 :第一类采用 1 1 %和 5%浓度的胶 ,后者用于分离 2亚基和 2 * 亚基 ,该种方法常使用碱性提取液 ,需要 2次电泳过程 ,且在 5%浓度的胶中 HMW- GS易于和麦醇蛋白混淆 ;另外一类 SDS- PAGE采用梯度胶 ,配合使用银染方法 ,制梯度胶则使用梯度仪及磁力搅拌器。介绍了一种不连续的、单向、7%～ 1 1 %浓度梯度电泳方法 ,使用中性提取缓冲液和考马斯亮蓝染色法 ,一次清晰地区分出了 5个 HMW- GS,电泳结果证明这是一种很好的分离小麦 HMW- GS尤其是区分 2亚基和 2 * 亚基的方法。梯度胶的制备则采用了一种简单经济的办法 ,不需使用昂贵的梯度仪和磁力搅拌器 ,电泳结果证明 ,这种梯度胶的制备方法是可行的。

耶尔森氏菌外膜蛋1（Yop1）的提取纯化与鉴定

耶尔森氏菌外膜蛋白（Ｙｏｐｓ）在菌体中所占比例甚小，因而提取与纯化均有一定难度，国内尚无成功的先例。我们使用了一种盐析加电泳的方法提取了Ｙｏｐ１蛋白。实验结果表明，该法简便、易行且重复性好、回收率高。使用本法提取假结核耶氏菌外膜蛋白１（Ｙｏｐ１），自每升培基增殖的菌体中（约４．５ｇ湿重），可获得纯品６．３ｍｇ，回收率高于国外同类研究的６倍以上［１］。一次性提取的Ｙｏｐ１蛋白在十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）中共显示出三条可辩认的蛋白带，其分子量依次为１５０ＫＤ，９０～１００ＫＤ及４５～５０ＫＤ。进一步的尿素－十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，样品中的约１００ＫＤ和５０ＫＤ两种蛋白实际为１５０ＫＤ蛋白解聚后的二聚体和单体，根据这一结果，推测该种蛋白系三聚体，其单体分子量为４５～５０ＫＤ。