异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。

胃黏膜上皮紧密连接与实验性胃癌前病变的关系

目的 :探讨胃黏膜上皮紧密连接与实验性胃癌前病变的关系。方法 :大鼠分别饮用浓度为 4 0μg mL及 6 0 μg mL的甲基硝基亚硝基胍 (MNNG) ,以造成不同程度的胃癌前病变。在造模第 9周及 31周时观察胃黏膜病变情况及胃黏膜上皮紧密连接的改变。结果 :随造模时间及浓度的增加 ,模型鼠胃黏膜深度损伤指数、萎缩、肠化及异增等均加重 ,胃黏膜上皮紧密连接减少、细胞间隙增宽 (P <0 0 5 )。紧密连接受损程度与胃癌前病变程度呈正相关 (P <0 0 5 )。结论 :胃黏膜上皮紧密连接的损伤是胃黏膜萎缩发生、进展至癌变的重要环节 ;缩小上皮细胞间隙 ,保护胃黏膜屏障对于逆转胃癌前病变 。

1,25(OH)_2D_3通过调控连接蛋白的表达缓解DSS诱导的小鼠结肠炎

目的:利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性结肠炎小鼠模型探讨活性维生素D[1,25(OH)_2D_3]缓解结肠炎的作用及机制。方法:利用DSS诱导小鼠急性结肠炎,分析炎症表型,检测杯状细胞变化情况及肠道通透性的改变,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)、免疫蛋白印迹试验(Western blot,WB)及免疫荧光分析各组小鼠结肠组织连接蛋白的表达差异。利用Ca CO-2单层细胞模型,检测1,25(OH)_2D_3对连接蛋白的保护作用。通过染色质免疫共沉淀、荧光素酶报告基因实验探讨1,25(OH)_2D_3调控Claudin 4表达的机制。结果:1,25(OH)_2D_3可明显缓解DSS诱导的结肠炎症,其可能通过增加连接蛋白表达,维持杯状细胞结构,提高肠道上皮屏障作用,减轻肠道通透性,进而减少炎症反应发挥保护作用。结论:1,25(OH)_2D_3可在小鼠急性结肠炎中发挥抗炎作用,维持肠道通透性稳定,增强细胞连接蛋白的表达水平,并且通过维生素D受体转录调控Claudin 4的表达。