低压低氧对肠黏膜屏障及LINE-1核酸内切酶变异体GCRG213表达的影响

背景长散在核元件-1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1或L1)是目前基因组中唯一活跃的自主反转录转座元件,低压低氧环境可以改变L1的甲基化程度。目的探究低压低氧环境对肠黏膜中L1核酸内切酶(L1 endonuclease,L1-EN)变异体GCRG213表达水平及以闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白-1(Claudin-1)表达水平为指标的肠黏膜机械屏障功能的影响。方法利用免疫组织化学染色(immunohistochemical staining,IHC)检测人正常小肠、结肠组织及小鼠正常结肠组织的GCRG213表达,观察GCRG213蛋白在正常肠道中的分布规律。将雄性C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组。实验组模拟海拔6000 m环境,饲养7 d构建低压低氧小鼠模型,对照组常压常氧饲养。将人正常结肠上皮细胞NCM-460随机分为常氧组以及低氧24 h、48 h组,常氧组于常氧环境正常培养,低氧组分别于0.3%O2浓度下培养24 h、48 h构建低氧细胞模型。使用qPCR、Western blot技术检测GCRG213、Occludin和Claudin-1在小鼠结肠组织及人NCM-460细胞中表达水平的变化。结果人正常小肠、结肠及小鼠结肠组织IHC结果一致显示,GCRG213表达于肠黏膜柱状上皮细胞胞质中,而在杯状细胞中未见表达。在动物实验中,与常氧组相比,低压低氧组小鼠结肠组织GCRG213在mRNA水平(P<0.05)和蛋白水平(P<0.01)均表达上调;同时,Occludin在蛋白水平表达下调(P<0.05)。在细胞实验中,低氧暴露后NCM-460细胞中GCRG213在mRNA(P<0.001)和蛋白水平(P<0.01)均表达上调,其中低氧24 h组GCRG213表达水平低于低氧48 h组,Occludin、Claudin-1在mRNA水平(P<0.01;P<0.001)表达下调,其中低氧24 h组表达水平均低于低氧48 h组,Occludin蛋白水平表达在低氧48 h组出现下调(P<0.05)。结论L1-EN变异体GCRG213在人和小鼠正常结肠组织黏膜柱状上皮细胞胞质内存在表达;在体内外模型中,低压低氧暴露下结肠黏膜上皮细胞GCRG213表达升高,同时观察到低压低氧对结肠黏膜紧密连接完整性产生影响,表现为Occludin、Claudin-1蛋白表达水平的降低。

大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少(P<0.05),2 d达到最低;CBD干预1 d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调(P<0.05);免疫荧光染色实验与Western blot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少(P<0.05),CBD干预2 d后Occludin和ZO-1表达水平上调(P<0.05);荧光素钠实验结果表明,TBI后脑组织BBB完整性遭到破坏,通透性升高(P<0.01),CBD干预后BBB通透性下降(P<0.05)。结论TBI后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达下降,BBB通透性升高,CBD干预可逆转TBI对BBB的破坏。

miR-191-5p通过靶向TJP1调控Cal-27细胞增殖、侵袭和迁移的体外研究

目的探讨miR-191-5p调控OSCC细胞的生物学功能及作用机制。方法利用生物信息学方法分析miR-191-5p在口腔鳞癌患者样本中的表达情况并通过相关数据库筛选出可能的靶基因TJP1,通过双荧光素酶实验验证二者的靶向关系。体外转染分为空白组、inhibitor NC(阴性对照组)和miR-191-5p inhibitor(敲低miR-191-5p组)。敲低miR-191-5p后通过qRT-PCR验证转染效率,CCK-8增殖实验、细胞克隆实验、Transwell、划痕实验分别检测miR-191-5p对Cal-27细胞的增殖能力、侵袭和迁移能力的影响;Western blotting检测TJP1蛋白及上皮间质转化相关蛋白的表达。将siRNA-TJP1转染到miR-191-5p低表达的细胞中,观察同时下调TJP1后对Cal-27细胞的增殖和迁移能力的影响。结果miR-191-5p在OSCC组织和细胞中表达上调,而下调miR-191-5p可抑制Cal-27细胞的增殖、侵袭和迁移能力以及上皮间质转化趋势;miR-191-5p可靶向抑制TJP1的表达,同时TJP1的下调逆转了敲低miR-191-5p对Cal-27细胞增殖和迁移的抑制。结论miR-191-5p通过靶向TJP1抑制OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,并可能通过调控EMT途径增加肿瘤的转移。

吲哚胺2,3-双加氧酶1对急性放射性肠道损伤的保护作用

目的:探讨吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)对急性放射性肠道损伤的作用。方法:使用TCGA和GTEX数据集中结肠癌、直肠癌组织和正常对照组织的测序结果,分析IDO1基因在肠癌组织及正常肠道组织中的表达情况。使用CRISPR/Cas9技术敲除鼠正常肠上皮IEC-6细胞中IDO1基因的部分第2、3外显子序列,建立鼠IEC-6的IDO1 KO(IDO1^(-/-))细胞系,并给予两个细胞系(野生型和IDO1^(-/-))放射处理。C57BL/6野生型小鼠和IDO1基因敲除(IDO1^(-/-))小鼠也给予腹部X射线照射以建立细胞和动物急性放射性肠道损伤模型。使用蛋白质印记法(Western blot)检测野生型和IDO1^(-/-)的IEC-6细胞及小鼠肠道组织中上皮紧密连接蛋白在放射前、后的蛋白表达水平。结果:Western blot证实IDO1在鼠IEC-6细胞、肠道组织中均有表达。对TCGA和GTEX数据集分析后也同样看到IDO1基因在结肠癌、直肠癌、正常肠道组织中均有表达,但癌组织中IDO1水平较正常肠道组织高(P<0.05)。体内外的放射照射后,IDO1、Claudin 1、Occludin、ZO-1等出现明显变化:与放射前比,放射后的细胞和小鼠组织中的IDO1的表达水平升高(P<0.05),而紧密连接蛋白Claudin 1、Occludin、ZO-1则下降(P<0.05);与野生型IEC-6细胞和小鼠相比,在IDO1^(-/-)IEC-6细胞和小鼠肠组织中,Claudin 1、Occludin、ZO-1下降更显著(P<0.05)。结论:IDO1在急性放射性肠道损伤中起保护作用,其保护作用可能是通过保护肠上皮细胞间紧密连接功能而实现的。

CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨细胞紧密连接蛋白1(CLDN1)与Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在肝癌中的表达及临床意义。方法 选取79例肝癌患者作为研究对象。采集所有患者肝癌病理标本及癌旁正常肝组织标本,均行免疫组化法检测,比较肝癌组织及癌旁组织中CLDN1与TMPRSS4表达情况,并分析CLDN1、TMPRSS4表达水平与临床病理特征间的关系。结果 肝癌组织内CLDN1阳性表达率、TMPRSS4阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同CLDN1表达及不同TMPRSS4表达肝癌患者肿瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、甲胎蛋白(AFP)水平相比,差异有统计学意义(P<0.05)。CLDN1阳性表达患者3年存活率低于CLDN1阴性表达患者,TMPRSS4阳性表达患者3年存活率低于TMPRSS4阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织内呈高表达,其阳性表达率与肿瘤大小、肿瘤分期、分化程度及AFP水平存在密切关系,且CLDN1与TMPRSS4阳性表达患者预后较差。

二肽AQ、SQ和IQ增强GES-1细胞对酒精损伤的抵抗能力

部分食源性二肽具有良好的吸收特性以及生理活性,在功能食品的开发上具有强大的应用前景。该研究旨在阐明二肽AQ、SQ和IQ具有增强GES-1细胞对酒精损伤抵抗能力的作用。首先,该研究对GES-1细胞进行二肽预处理,之后,利用酒精建立细胞损伤模型;通过检测细胞存活率和细胞的乳酸脱氢酶释放量判断模型是否成立,通过检测细胞内ROS含量、抗氧化酶活力和氧化损伤标志物含量,评价二肽对细胞氧化应激的改善作用;通过检测细胞内紧密连接蛋白以及相关损伤标志物的蛋白表达水平,评价二肽对细胞屏障功能的增强作用。结果表明,上述3种二肽可以减轻细胞氧化应激,减少损伤标志物的表达水平并增加紧密连接蛋白的表达水平。该研究证明了上述3种二肽可以增强GES-1细胞抵抗酒精损伤的能力,在修复酒精性胃黏膜损伤,保护胃黏膜屏障功能方面具有一定的应用价值和潜力。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1的影响

目的观察清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),紧密连接跨膜蛋白claudin-1表达水平的影响,以探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能机制。方法使用TNBS/无水乙醇造模成功后,分为空白组、模型组、清肠化湿方组12.8g/(kg·d)、美沙拉嗪组(0.67g/(kg·d)。一次性ig给药,连续10d后,处死大鼠,留取结肠组织;ELISA法检测结肠组织TNF-a水平,免疫组化法观察结肠上皮claudin-1蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测claudin-1 mRNA相对表达水平。结果清肠化湿方可以降低大鼠结肠炎模型结肠组织TNF-α水平[模型组,清肠化湿组分别为(99.40±32.37),(55.07±12.80)pg/mL],(P<0.01),提高claudin-1mRNA相对表达水平[模型组,清肠化湿组分别为(2.18±0.78),(3.94±0.91)](P<0.01),减轻对claudin-1蛋白的损伤(P<0.05),清肠化湿方组与美沙拉嗪组疗效无明显差异。结论清肠化湿方降低结肠组织TNF-α水平,保护紧密连接蛋白claudin-1,是其治疗UC的机制之一。

紧密连接蛋白claudin-1在肠易激综合征患者肠黏膜中的表达及意义

目的探讨肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1表达在排便性状和习惯改变中的意义。方法用免疫组化方法检测对照组(痔疮10例、结肠息肉10例)和观察组(43例IBS患者,腹泻型23例、便秘型20例)小肠和结肠黏膜claudin-1表达。结果免疫组化定位显示两组肠黏膜claudin-1均分布于肠上皮紧密连接的细胞膜,胞核及核膜无表达;与对照组比较,观察组腹泻型患者小肠和结肠黏膜claudin-1表达明显下降(P<0.05),便秘型患者claudin-1表达明显上升高(P<0.05),腹泻型与便秘型比较有显著差异(P<0.05)。结论claudin-1表达异常在IBS患者排便性状和习惯改变形成中可能有重要作用。

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接的保护作用及ZO-1蛋白表达的影响

目的观察缺血后处理对脑缺血再灌注后紧密连接的保护作用及相关蛋白ZO-1表达的影响。方法 45只Wistar雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、缺血后处理(IP)组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2 h后,I/R组予再灌注,IP组给予缺血后处理之后予再灌注。于脑缺血再灌注后24 h行TTC染色观察脑梗死体积,应用电镜观察紧密连接蛋白结构改变,Western blot观察ZO-1蛋白表达的变化。结果 IP组脑梗死体积明显小于I/R组,与Sham组相比,I/R组血脑屏障紧密连接开放,ZO-1蛋白表达明显减少;与I/R组比较,IP组紧密连接开放程度减轻及ZO-1表达增加。结论缺血后处理减小脑梗死体积;缺血后处理能够减轻紧密连接破坏,其保护机制可能与ZO-1蛋白表达增加有关。

续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4 (AQP4) mRNA表达的影响

目的:观察续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达的影响。方法:将清洁级SD大鼠分为分假手术组、模型组、尼莫地平组、续命汤低剂量组、中剂量组、高剂量组6组,通过栓线法制备局灶性脑缺血中风大鼠模型,观察并记录SD大鼠造模后神经功能评分、免疫组化法检测脑缺血大鼠脑组织紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达。结果:造模后大鼠神经行为学评分显著升高,Zo-1蛋白阳性表达降低,AQP4 mRNA的表达增加,续命汤各治疗组能拮抗以上作用,以续命汤中、高剂量组为显著,其疗效优于或与尼莫地平组相当。结论:续命汤能减少Zo-1蛋白的损失,维持紧密连接复合体结构的完整性,抑制AQP4 mRNA的过度释放与表达,减轻脑缺血和水肿,进而实现保护血脑屏障的作用。

紧密连接蛋白claudin-1及Z0-1在胰腺癌中的表达

目的:探讨紧密连接蛋白claudin-1及ZO-1在胰腺癌中的表达及在胰腺癌侵袭转移中的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测claudin-1和ZO-1在胰腺癌不同侵袭位点(与非肿瘤胰腺组织相交界的胰腺癌侵袭前沿区、肿瘤中央区、与周围间质相交界的胰腺癌侵袭前沿区)及淋巴结转移灶和正常胰腺组织中的表达、结果:claudin-1与ZO-1蛋白正常定位于胰腺腺泡细胞和导管上皮细胞胞膜上,而在胰腺癌组织中,claudin-1与ZO-1蛋白定位从细胞膜异位至细胞浆或表达缺失,重度异位表达率分别为66.7%和69.2%。在与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌组织中,低-未分化胰腺癌的claudin-1重度异位表达率(91.7%)明显高于高-中分化胰腺癌(55.6%,P<0.05);与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区claudin-1重度异位表达率(89.7%)高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(66.7%,P<0.05);淋巴结转移灶重度异位表达率最高(92.3%,P<0.05)。同样与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区ZO-1重度异位表达率(94.9%)也高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(64.2%,P<0.05),淋巴结转移灶最高(100%,P<0.05);原发胰腺癌组织各个位点中claudin-1与ZO-1表达呈正相关关系。结论:claudin-1和ZO-1异位表达对胰腺癌的发生起促进作用;clauclin-1异位表达与胰腺癌的分化有关;claudin-1和ZO-1异位表达率增加促进胰腺癌的侵袭与转移。

巨噬细胞炎症蛋白1α促进6T-CEM细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层

有研究表明,T细胞可能参与阿尔茨海默氏病(AD)免疫过程,但T细胞如何穿过血脑屏障内皮细胞紧密连接,到达脑内还不清楚。我们研究曾发现,AD病人外周血T淋巴细胞穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层能力高于同龄正常人,其T淋巴细胞巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)表达明显增高。为进一步在体外研究促使T淋巴细胞穿过HBMEC单层的机制,选取重组人MIP-1α(rhMIP-1α)作用于HBMEC,同时选用高表达MIP-1α的人急性白血病T淋巴细胞(6T-CEM)作为模式细胞,与HBMEC共同温育。发现rhMIP-1α可促进6T-CEM细胞穿过HBMEC单层,并使HBMEC单层紧密连接结构发生改变。在6T-CEM细胞或rhMIP-1α与HBMEC单层单独温育过程中,均引起HBMEC单层CCR5表达变化。提示MIP-1α可能通过与HBMEC单层上CCR5相互作用介导T淋巴细胞穿过HBMEC单层。

猪胰高血糖素样肽-2通过细胞外信号调节激酶1/2调节仔猪空肠上皮细胞紧密连接蛋白表达

本试验以体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,研究了猪胰高血糖素样肽-2(p GLP-2)对紧密连接蛋白表达的调节及其信号传导机制。培养液中分别添加10-9mol/L p GLP-2(p GLP-2组)和10-9mol/L p GLP-2、10μmol/L U0126(p GLP-2+U0126组),对照组不添加以上试剂,每组3个重复,每个重复1个培养孔。测定IPEC-J2胞质紧密黏连蛋白-1(ZO-1)、occludin、claudin-1以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达量。结果表明:与对照组相比,IPEC-J2细胞培养液中添加p GLP-2显著增加了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P<0.05);与p GLP-2组相比,在IPEC-J2细胞培养液中加入ERK1/2的抑制剂U0126,显著降低了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P<0.05)。综合得出,ERK1/2通路是p GLP-2调控肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的一条重要信号通路。

单核细胞趋化蛋白-1与急性胰腺炎肠屏障功能呈负相关

背景：急性胰腺炎（AP）时可发生全身性炎症反应综合征，肠屏障功能障碍是导致重症急性胰腺炎（SAP）并发多器官功能衰竭的重要因素之一。目的：检测大鼠AP模型单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达和肠屏障功能指标的变化，探讨MCP-1在AP肠屏障功能障碍中的作用。方法：分别以0．5％和5％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制备大鼠急性水肿性胰腺炎（AEP）和急性坏死性胰腺炎（ANP）模型，行胰腺组织病理学评分，电子显微镜观察回肠组织超微结构，免疫组化染色、RT—PCR和蛋白质印迹法检测回肠组织中紧密连接蛋白occludin和MCP-1的表达。结果：与假手术（SO）组相比，AP模型大鼠尤其是ANP组大鼠胰腺组织病理学评分显著升高，回肠绒毛高度和柱状细胞指数降低，occludin表达下调（P〈0．05）。SO组和AEP组回肠组织中无MCP-1表达，ANP组MCP-1表达随时间延长而上调（P〈0．05）。回肠组织MCP-1表达与胰腺组织病理学评分呈正相关，与肠屏障功能指标（绒毛高度、柱状细胞指数和occludin表达）呈负相关。结论：ANP大鼠回肠组织中MCP-1表达上调，MCP-1在AP肠屏障功能障碍中发挥重要作用。

HIV-1Tat蛋白改变血脑屏障结构和功能的研究进展

HIV-Tat蛋白是人类免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)基因编码的一种被称为反式转录激活因子,是HIV转录和复制所必须的一个很重要的调控蛋白.艾滋病痴呆以及艾滋病相关性脑炎的患者其血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)都受到不同程度的损伤,其中HIV-1 Tat蛋白起到了非常重要的作用.然而HIV-Tat蛋白改变血脑屏障结构和功能并不清楚,本综述主要讨论HIV-1 Tat蛋白对血脑屏障结构和功能的影响.

Caveolin-1和紧密连接蛋白在小鼠血吸虫性结肠炎中的表达及其意义

背景:血吸虫肠病是一种血管内寄生虫病,结肠慢性炎症是其基本的病理改变之一。目前有关caveolin-1和紧密连接蛋白参与血吸虫肠病发病的机制仍不明确。目的:初步探讨caveolin-1和紧密连接蛋白occludin、claudin-1在小鼠血吸虫性结肠炎中的表达及其意义。方法:将40只BALB/c雄性小鼠随机分成正常对照组和感染组。小鼠腹部贴片感染约40条日本血吸虫尾蚴建立血吸虫性结肠炎模型。8周后处死小鼠,行HE染色,伊文思蓝法检测肠道血管内皮细胞通透性,计数腹腔灌洗液中的白细胞,qPCR法检测结肠组织中caveolin-1、occludin、claudin-1、eNOS mRNA表达,蛋白质印迹法和免疫组化检测caveolin-1和occludin蛋白表达。结果:感染组结肠黏膜下层可见大量虫卵肉芽肿,并伴有肠壁广泛的炎症细胞浸润。与正常对照组相比,感染组腹腔灌洗液中伊文思蓝含量和白细胞计数均显著升高(P<0.05),caveolin-1、occludin、claudin-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),caveolin-1、occludin蛋白表达和阳性率均显著降低(P<0.05)。结论:Caveolin-1、occludin和claudin-1表达下调可能通过影响肠道血管内皮细胞的通透性,诱发白细胞聚集,从而参与血吸虫性结肠炎的发病。

RAC1通过调节紧密连接蛋白1分布影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨小GTP酶Rac1(Rac family small GTPase 1,RAC1)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:构建pLKO.1-puro RAC 1 shRNA载体,包装慢病毒,感染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV3,并采用嘌呤霉素筛选;通过蛋白质印迹、细胞划痕和基质胶侵袭实验分别检测细胞中RAC 1敲减效率,细胞迁移和侵袭能力的改变;采用蛋白质印迹和免疫荧光染色观察细胞中紧密连接蛋白1(tight junction protein 1,TJP1)的表达和分布变化。结果:酶切电泳和测序结果均显示pLKO.1-puro RAC 1 shRNA慢病毒载体构建成功,蛋白质印迹结果证实感染RAC 1 shRNA慢病毒的OVCAR3和SKOV3细胞中RAC1蛋白水平较对照组明显下降(P<0.05)。细胞划痕和基质胶侵袭实验证实,RAC 1敲减后卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著下降(P均<0.01);蛋白质印迹结果显示RAC 1敲减后卵巢癌细胞中TJP1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但免疫荧光染色表明TJP1由胞质内散在分布转变为细胞间连接处聚集分布,细胞间连接更加紧密。结论:RAC 1基因可能通过改变TJP1蛋白分布从而影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

饲料营养素对鱼类肠道紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1影响的研究进展

鱼类肠道紧密连接结构是肠道黏膜屏障的重要组成。紧密连接在相邻的上皮细胞之间形成了由跨膜蛋白[如闭合蛋白(Claudin)和闭锁蛋白(Occludin)]和胞质蛋白[如闭锁小带蛋白-1(ZO-1)]所维持的复杂蛋白质结构,其中胞质紧密连接蛋白ZO-1属于膜相关鸟苷酸激酶(MAGUK)家族,是紧密连接的重要组成蛋白质之一。ZO-1在维持细胞极性和紧密连接屏障功能上发挥着重要作用,也与肠道疾病的发生有着密切联系。众所周知,ZO-1的表达在相当程度上受饲料营养素的影响和调节。因此,本文综述了饲料中蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质五大营养素对鱼类肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响及作用机制的研究进展,这对于保持鱼类肠道屏障的功能稳定和提高饲料的利用效率有重要意义。

上皮膜蛋白1在鼻咽癌组织中的表达特征

目的探讨上皮膜蛋白1(EMP1)在鼻咽癌组织与正常鼻黏膜组织中的表达差异及其与疾病发展的关系.方法收集40例鼻咽癌患者的癌组织(实验组)与正常鼻黏膜组织(对照组)各40份标本,RT-qPCR、免疫荧光染色和免疫印记技术检测EMP1在两种组织中的表达情况;40例鼻咽癌标本免疫印迹测定EMP1灰度值与其对应的肿瘤分化程度、临床分期进行二元线性回归分析.结果与正常鼻黏膜上皮对比,鼻咽癌上皮细胞的EMP1表达明显降低(P<0.05),肿瘤细胞EMP1的表达与肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05),与临床分期不存在线性关系(P>0.05).结论EMP1在鼻咽癌细胞和正常鼻黏膜细胞表达有差异,其值可能预示肿瘤分化程度.