罗非鱼头磷脂对RANKL诱导RAW264.7细胞分化的抑制作用及其对破骨细胞凋亡作用的机理

目的:探讨罗非鱼头磷脂(tilapia head phospholipid,TH-PL)对破骨细胞生物活性的影响。方法:首先采用溶剂法提取罗非鱼头总脂,通过硅胶柱层析分离得到TH-PL,采用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)、傅里叶红外变换光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)和气相色谱分析其性质与部分结构。其次利用核因子κB受体活化因子受体的配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,建立破骨细胞模型,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法评价TH-PL对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,荧光染色法、流式细胞仪测定法和蛋白免疫印迹法检测TH-PL对破骨细胞凋亡的影响。结果:制备的TH-PL占罗非鱼头干质量的1.52%,TLC和FTIR法确定所得样品为TH-PL,且含有丰富的不饱和脂肪酸,约占38%。TRAP染色实验表明,50、100μg/mL TH-PL显著抑制RAW264.7分化为破骨细胞;进一步实验证明,TH-PL能够引起破骨细胞线粒体跨膜电位下降,导致细胞内caspase-3的蛋白表达量上升,诱导破骨细胞凋亡。结论:体外细胞实验证明,TH-PL具有显著的抑制破骨前体细胞分化和促进破骨细胞凋亡的作用。