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实时无标记细胞分析系统与传统MTT法在测定乳腺癌细胞增殖中的比较 被引量:7
1
作者 周慧 周伟强 《沈阳医学院学报》 2017年第3期198-200,共3页
目的:通过实时无标记细胞分析法与传统MTT法对乳腺癌细胞增殖进行监测以对比确定研究细胞增殖的最佳实验方法手段。方法:采用MTT法、实时无标记细胞分析法测定瘦素刺激乳腺癌MCF-7细胞增殖的效果。结果:MTT法和实时无标记细胞分析法结... 目的:通过实时无标记细胞分析法与传统MTT法对乳腺癌细胞增殖进行监测以对比确定研究细胞增殖的最佳实验方法手段。方法:采用MTT法、实时无标记细胞分析法测定瘦素刺激乳腺癌MCF-7细胞增殖的效果。结果:MTT法和实时无标记细胞分析法结果均表明瘦素作用浓度为0.625 nmol/L、作用时间为24 h的条件下对乳腺癌MCF-7细胞有诱导生长的效果。但实时无标记细胞分析法能够实时监测细胞生长和增殖的动态生物学反应过程,观察效果更加直观、准确。结论:实时无标记细胞分析法可较好地弥补MTT法的缺点,成为一种新的研究细胞增殖的实验方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7 mtt 实时无标记细胞分析法
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Assessing the effects of alternative fuel treatments to reduce wildfire exposure
2
作者 Roghayeh Jahdi Liliana Del Giudice +4 位作者 Massimo Melis Raff aella Lovreglio Michele Salis Bachisio Arca Pierpaolo Duce 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期373-386,共14页
Effective landscape-scale fuel management strategies are essential for reducing wildfire risk in Mediterranean fire-prone areas.In this study,the minimum travel time(MTT)fire-spread algorithm as implemented in FlamMap... Effective landscape-scale fuel management strategies are essential for reducing wildfire risk in Mediterranean fire-prone areas.In this study,the minimum travel time(MTT)fire-spread algorithm as implemented in FlamMap was applied to assess the potential of alternative fuel treatments for lowering wildfire losses in a 5,740-ha study area in eastern Sardinia,Italy.Twenty-seven wildfires at 10-m resolution were simulated considering three wind speeds(15,18,and 21 km h-1)to compare fuel treatments:no treatment(NT),irrigated agroforestry areas with shrub clearing(T1),prescribed fire in eucalyptus stands(T2),and irrigated grasslands(T3).The simulations replicated a recent large wildfire that occurred in the study area(Orrìwildfire,2019)and considered the weather and fuel moisture conditions associated with this event.The average wildfire exposure outputs(burned area,probability of burning,conditional flame length,potential crown fire occurrence,and surfaces withflame lengths above 2.5 m)decreased after fuel treatments,compared to no treatment.T1 was the most effective strategy in mitigating wildfire hazards and provided the most significant performance for several wildfire exposure indicators.Treating only 0.5%of the study area(~30 ha)resulted in a decrease in all wildfire exposure metrics to~10%within the study area.In addition,the total surface characterized by high flame length(average>2.5 m)was the lowest in the T1 treatment.This study can help land and fire managers optimize fuel treatment opportunities and wildfire risk mitigation strategies in Mediterranean areas. 展开更多
关键词 Fuel treatment strategies Fire prevention Mediterranean areas Minimum travel time(mtt) Wildfi re exposure
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猪白细胞介素-2在BHK-21细胞中表达及其活性分析 被引量:1
3
作者 王大伟 乔军 +3 位作者 张辉 胡圣伟 丁波 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期378-382,共5页
为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用... 为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性。试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍。MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性。本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础。 展开更多
关键词 猪白细胞介素2 真核表达 实时定量PCR 淋巴细胞增殖试验
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低剂量还原型谷胱甘肽可促进人脐血干细胞增殖 被引量:2
4
作者 曲鑫 邸旭 +1 位作者 韩璐 张海超 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期63-68,共6页
背景:获得足够数量的细胞是细胞移植治疗中面临的一个关键问题,有研究表明可以通过合理的刺激促进干细胞增殖。目的:观察还原型谷胱甘肽对人脐血间充质干细胞的生物学特性的影响。方法:实验分为两组,对照组为正常人脐血间充质干细胞,实... 背景:获得足够数量的细胞是细胞移植治疗中面临的一个关键问题,有研究表明可以通过合理的刺激促进干细胞增殖。目的:观察还原型谷胱甘肽对人脐血间充质干细胞的生物学特性的影响。方法:实验分为两组,对照组为正常人脐血间充质干细胞,实验组为使用0.15 g/L质量浓度的还原型谷胱甘肽处理的人脐血间充质干细胞。结果与结论:MTT实验结果显示,干预后第5,7,9天,实验组细胞的吸光度值明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞术显示,实验组还原型谷胱甘肽对人脐血间充质干细胞的表面标志分子CD29\CD44\CD45\CD105的表达无影响。实时PCR结果显示,还原型谷胱甘肽可以促进人脐血间充质干细胞中细胞外信号调节激酶mRNA的表达(P<0.05)。结果证实,质量浓度0.15 g/L的还原型谷胱甘肽可促进人脐血干细胞增殖。 展开更多
关键词 干细胞 脐血干细胞 还原型谷胱甘肽 脐血间充质干细胞 增殖 流式细胞术 细胞外信号调节激酶 表面标志物
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槲芪散及其君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响 被引量:7
5
作者 刘树红 吕喆 +4 位作者 李霞 丰平 孔庆利 孙海梅 王学江 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期62-65,共4页
目的:研究槲芪散及其君药槲寄生对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的槲芪散及其君药槲寄生提取物作用于人肝癌细胞(SMMC-7721)后,用四甲基偶氮唑比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞增殖。用实时荧光定量PCR法检测SMMC-772... 目的:研究槲芪散及其君药槲寄生对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的槲芪散及其君药槲寄生提取物作用于人肝癌细胞(SMMC-7721)后,用四甲基偶氮唑比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞增殖。用实时荧光定量PCR法检测SMMC-7721的端粒酶活性。结果:(1)MTT结果显示槲芪散、槲寄生多糖和总碱能抑制SMMC-7721细胞,随药物作用时间的延长作用增强。(2)槲芪散、槲寄生多糖和槲寄生总碱能明显降低SMMC-7721端粒酶的活性。结论:槲芪散及槲寄生多糖和总碱均能抑制SMMC-7721增殖,降低SMMC-7721端粒酶的活性。 展开更多
关键词 槲芪散 槲寄生 端粒酶 mtt 实时PCR SMMC-7721
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Stathmin基因表达与肿瘤化疗药物敏感性的关系 被引量:8
6
作者 井晓荣 刘丽 +1 位作者 赵辉 张惠中 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第9期784-788,共5页
目的:探讨8种肿瘤细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和泰索帝(docetaxel,DOC)两种化疗药物的敏感性以及该敏感性与肿瘤细胞内Stathmin基因表达之间的关系.方法:采用MTT法和形态学观察,根据两种药物对细胞的相对抑制率,分析8种肿瘤细胞对... 目的:探讨8种肿瘤细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和泰索帝(docetaxel,DOC)两种化疗药物的敏感性以及该敏感性与肿瘤细胞内Stathmin基因表达之间的关系.方法:采用MTT法和形态学观察,根据两种药物对细胞的相对抑制率,分析8种肿瘤细胞对两种药物的敏感情况;应用实时荧光定量PCR技术分析比较上述细胞Stathmin基因表达情况.结果:8种肿瘤细胞对VCR的敏感程度(相对抑制率)依次为:骨肉瘤细胞9607,58%,9901,56%;宫颈癌细胞Hela,37%;肝癌细胞HHCC,34%;肺癌细胞A549,31%;喉癌细胞Hep2,17%;胃癌细胞MKN45,16%;肝癌细胞7721,15%.对DOC敏感程度依次为:9607,48%;Hela,46%;9901,44%;Hep2,34%;A549,31%;MKN45,15%;HHCC,12%;7721,3%;Stathmin基因在各肿瘤细胞中具有不同程度的表达,其表达强度与各肿瘤细胞对两种药物的敏感性有关.结论:肿瘤细胞中Statnmin基因表达水平与其化疗药物敏感程度有关,检测Statnmin基因表达水平对临床化疗药物的选择有一定的指导意义. 展开更多
关键词 肿瘤细胞 长春新碱 泰索帝 mtt试验 抑制率 实时定量PCR
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隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子mRNA表达的影响 被引量:13
7
作者 邓凤春 于占江 +3 位作者 杨钰 赵红晔 王滨 周丽 《中国医药导报》 CAS 2015年第6期7-10,共4页
目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对... 目的通过测定隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测隐丹参酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,采用Real Time RT-PCR检测隐丹参酮对VEGF m RNA表达的影响。结果 20、40、60、80、100μmol/L的隐丹参酮作用于人胃癌SGC-7901细胞6-48 h,其生长和增殖均受到一定程度的抑制;24 h为隐丹参酮对SGC-7901细胞抑制作用的最佳时间,IC50为59.11μmol/L;选取40、60和80μmol/L 3个剂量作用于人胃癌细胞SGC7901 24 h后,60和80μmol/L的隐丹参酮均可下调VEGF m RNA的表达(均P〈0.01)。结论隐丹参酮可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF mRNA的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。 展开更多
关键词 隐丹参酮 人胃癌SGC-7901细胞 四甲基偶氮唑蓝 血管内皮生长因子 实时荧光定量PCR
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CT灌注成像系统
8
作者 张惠 汪蕙 +3 位作者 陈峰 罗立民 舒华忠 蒋春涛 《中国医疗器械杂志》 CAS 2004年第1期4-6,15,共4页
根据CT灌注的原理,提出通过计算MTT,rCBV,rCBF等特征参数方法来描述血流的变化,并应用在自己开发的CT血流灌注软件中。实验表明,该系统能准确的检测出血流变化情况。
关键词 CT灌注成像系统 血流 计算mtt.rCBV.rCBF 急性脑缺血
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欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立 被引量:8
9
作者 郭松林 关瑞章 冯建军 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期403-411,共9页
通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、2... 通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPMI1640细胞培养液中培养66 h后可获得最好的淋巴细胞转化效果。方差分析结果显示,4个因素中仅鳗鲡血清水平对淋巴细胞转化试验OD值具有极显著影响(P<0.01),而温度、时间和ConA对其影响均不显著(P>0.05)。本研究建立的鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验条件为鳗鲡的细胞免疫建立了研究方法。 展开更多
关键词 欧洲鳗鲡 淋巴细胞转化试验 mtt CONA 培养温度 培养时间 鳗鲡血清
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维生素C在拮抗Cr(Ⅵ)诱导L-02肝细胞毒性中的时序效应
10
作者 徐娟 钟才高 +2 位作者 刘新民 武红叶 陈东方 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期199-204,共6页
目的探讨在体外实验系统中维生素C在拮抗六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导L-02肝细胞毒性的时序效应。方法实验设对照组、Cr(Ⅵ)组、维生素C组及二者不同时序联合作用组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,通过回归方程求出各组细胞生... 目的探讨在体外实验系统中维生素C在拮抗六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导L-02肝细胞毒性的时序效应。方法实验设对照组、Cr(Ⅵ)组、维生素C组及二者不同时序联合作用组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,通过回归方程求出各组细胞生长半数抑制浓度(IC50)。结果维生素C组IC50为354.21μmol/L;Cr(Ⅵ)组IC50为35.65μmol/L;维生素C与Cr(Ⅵ)同时加入时,IC50为5 111.79μmol/L;Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理时,IC50为1 392.51μmol/L;维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒时,IC50为3 247.79μmol/L。维生素C与Cr(Ⅵ)联合作用组IC50均明显高于Cr(Ⅵ)单独染毒组,其差异有非常显著性(P<0.01)。维生素C与Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞的IC50值顺序为:两者同时加入试验组>维生素C处理后再用Cr(Ⅵ)染毒组>Cr(Ⅵ)染毒后再用维生素C处理组。结论无论哪一种顺序加入维生素C对Cr(Ⅵ)所致的细胞毒性均具有拮抗作用,如果与Cr(Ⅵ)同时加入,维生素C对Cr(Ⅵ)诱导的细胞毒性的拮抗作用更强。 展开更多
关键词 六价铬 维生素C L-02肝细胞 mtt 细胞毒性 时序效应
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糖皮质激素对鼻黏膜放射性损伤后黏液纤毛传输功能的影响 被引量:1
11
作者 杜友红 彭福森 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2010年第5期345-347,352,共4页
目的观察鼻腔局部应用糖皮质激素对鼻黏膜放射性损伤后黏液纤毛传输功能的影响,探讨糖皮质激素治疗在鼻黏膜放射性损伤中的作用。方法 38例鼻咽癌患者随机分为实验组和对照组,实验组于放疗开始后给予布地奈德鼻腔局部治疗,采用糖精试验... 目的观察鼻腔局部应用糖皮质激素对鼻黏膜放射性损伤后黏液纤毛传输功能的影响,探讨糖皮质激素治疗在鼻黏膜放射性损伤中的作用。方法 38例鼻咽癌患者随机分为实验组和对照组,实验组于放疗开始后给予布地奈德鼻腔局部治疗,采用糖精试验分别测定放疗前及放疗后各阶段的鼻腔黏液纤毛传输时间(mucociliary transport time,MTT)。对照组除不使用布地奈德,其他治疗均与实验组一样。结果两组中放疗后各阶段鼻腔MTT较放疗前显著延长,呈时间依赖性;放疗后各阶段实验组和对照组的MTT比较有统计学意义,鼻腔局部使用糖皮质激素能显著减少放疗后鼻腔黏液纤毛传输时间。结论鼻腔应用糖皮质激素对鼻黏膜放射性损伤后黏液纤毛传输功能具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 鼻黏膜 鼻窦炎 放射性损伤 糖皮质激素 鼻黏液纤毛传输时间
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池蝶蚌CyPA的应激表达及对Hela细胞生长的影响 被引量:2
12
作者 罗春 徐灵 +6 位作者 何静 史建伍 盛军庆 彭扣 王军花 黄滨 洪一江 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期475-481,共7页
研究分析了池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)亲环蛋白A(Cyclophilin A,Cy PA)诱导的应激反应和对Hela细胞生长的影响。采用嗜水气单胞杆菌诱导刺激池蝶蚌,并利用Real-time PCR技术对其肝脏、性腺和血淋巴中Cy PA基因m RNA的表达量进行分析... 研究分析了池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)亲环蛋白A(Cyclophilin A,Cy PA)诱导的应激反应和对Hela细胞生长的影响。采用嗜水气单胞杆菌诱导刺激池蝶蚌,并利用Real-time PCR技术对其肝脏、性腺和血淋巴中Cy PA基因m RNA的表达量进行分析,应激实验表明,在嗜水气单胞杆菌刺激后血淋巴、肝脏和性腺中的Cy PA在诱导4h出现一个表达峰,8h后开始下降,说明池蝶蚌Hs Cy PA基因参与免疫防御应答反应;利用p ET-32a(+)表达载体,根据Hs Cy PA基因c DNA的序列,构建了含有完整开放阅读框(ORF)的表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,优化诱导条件后,通过亲和层析获得了含量较高的上清可溶性蛋白;采用MTT法,将原核表达的重组Cy PA蛋白稀释到相应(50、100、200、400和800 ng/m L)浓度,刺激Hela细胞系后发现,重组池蝶蚌Cy PA蛋白能促进Hela细胞生长,刺激浓度为100 ng/m L时,达到最大增殖率18.5%。结果初步表明,池蝶蚌Cy PA是一个既参与免疫应激又对细胞的生长发育具有影响的功能广泛的蛋白质。 展开更多
关键词 池蝶蚌 亲环蛋白A REAL-timePCR 原核表达 HELA细胞 mtt
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不同贮藏温度下大别山五针松花粉活力的变化 被引量:3
13
作者 项小燕 吴甘霖 +3 位作者 段仁燕 王志高 张中信 王广艳 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期114-116,共3页
大别山五针松( Pinus dabeshanensis C. Y. Cheng et Y. W. Law)为松科( Pinaceae)松属( Pinus Linn.)植物,自然种群数量极少,目前仅发现在安徽省岳西县大王沟海拔900-1300 m阴坡和半阴坡有相对集中的分布,种群规模计200余株,且... 大别山五针松( Pinus dabeshanensis C. Y. Cheng et Y. W. Law)为松科( Pinaceae)松属( Pinus Linn.)植物,自然种群数量极少,目前仅发现在安徽省岳西县大王沟海拔900-1300 m阴坡和半阴坡有相对集中的分布,种群规模计200余株,且多为成年个体,林下幼苗极少,自然更新困难,为中国特有珍稀树种之一[1]。大别山五针松常在每年3月份至4月份形成花芽,5月中下旬花粉成熟并散发,花粉具气囊,此时雌球花张开接受传粉,球果翌年9月成熟[2]。据作者近年的调查,大别山五针松种子败育率较高,且种子质量较低,这也是该种类濒危的重要原因之一。 展开更多
关键词 大别山五针松 贮藏温度 贮藏时间 花粉活力 mtt染色法
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RTCA法用于医疗器械细胞毒性检测的研究 被引量:1
14
作者 黄婷 陈婕 +5 位作者 郭欢 张寒旭 王晓亮 李炎 黄明 荣祖元 《北京生物医学工程》 2020年第6期594-600,共7页
目的通过实时无标记细胞分析法(real time cell analysis,RTCA)与MTT法的比较研究,探讨RTCA法用于医疗器械细胞毒性常规检测的可行性。方法首先,通过筛选细胞接种密度建立基于L929细胞的RTCA细胞毒性检测方法。然后,使用不同浓度的DMSO... 目的通过实时无标记细胞分析法(real time cell analysis,RTCA)与MTT法的比较研究,探讨RTCA法用于医疗器械细胞毒性常规检测的可行性。方法首先,通过筛选细胞接种密度建立基于L929细胞的RTCA细胞毒性检测方法。然后,使用不同浓度的DMSO稀释液、标准对照材料浸提液、56批真实世界的医疗器械产品,从简单到复杂分别比较RTCA法与MTT法用于细胞毒性检测结果的一致性,并且汇总多次试验的阴性对照和阳性对照结果,比较两种方法的可重复性。结果RTCA法检测不同浓度的DMSO稀释液没有剂量效应关系,检测标准对照材料浸提液与MTT法结果完全一致并高度相关(R=0.9898),检测56批医疗器械产品与MTT法结果一致率为80.4%,仅中度相关(R=0.6183)。RTCA法的可重复性不比MTT法好。结论RTCA法能有效检测医疗器械细胞毒性,但是部分产品可能因溶出物干扰检测结果而不适用。RTCA法作为一种新型的医疗器械细胞毒性检测方法的适用性还需要进一步研究。 展开更多
关键词 实时无标记细胞分析法 mtt 医疗器械 细胞毒性
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microRNA-21、PTEN、RASA1及caspase-3在肾上腺醛固酮瘤中的表达及相关作用机制
15
作者 书星 赵洋 +3 位作者 孙敏 南玉奎 王慧琴 齐飞波 《中国临床保健杂志》 CAS 2021年第6期826-830,共5页
目的研究microRNA-21(miR-21)、PTEN、RASA1及caspase-3在肾上腺醛固酮瘤中的表达情况,探究其内在相关性及对疾病的影响机制。方法采用荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测样本中miR-21及PTEN、RASA1、caspase-3的表达量,再用细胞转染建... 目的研究microRNA-21(miR-21)、PTEN、RASA1及caspase-3在肾上腺醛固酮瘤中的表达情况,探究其内在相关性及对疾病的影响机制。方法采用荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测样本中miR-21及PTEN、RASA1、caspase-3的表达量,再用细胞转染建立人肾上腺皮质细胞(HACC)模型,采用Western Blot技术检测细胞模型中caspase-3表达量。结果miR-21在肾上腺醛固酮瘤和瘤旁组织中的表达量分别为0.109±0.050和0.040±0.019,差异有统计学意义(P<0.001);其中瘤组织样本中PTEN阳性表达率为22.91%(P=0.001),瘤旁组织样本中PTEN阳性表达率85.42%(P=0.001),RASA1阳性表达率分别为8.33%和60.41%(P<0.001),caspase-3阳性表达率分别为25.00%和89.58%(P<0.001),均差异有统计学意义。HACC细胞模型显示,当miR-21过表达时,caspase-3蛋白表达下调,细胞表现出过度增殖趋势;miR-21表达抑制时,caspase-3蛋白表达上调,细胞表现为生长抑制。结论肾上腺醛固瘤组织中miR-21高表达可能通过下调PTEN、RASA1及caspase-3,从而抑制细胞凋亡并参与肿瘤进展。 展开更多
关键词 肾上腺醛固酮瘤 MICRORNA-21 PTEN RASA1 HACC CASPASE-3 荧光定量PCR Western Blot mtt 免疫组织化学
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Screening of antiproliferative activity mediated through apoptosis pathway in human non-small lung cancer A-549 cells by active compounds present in medicinal plants 被引量:1
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作者 Nutan V.Badgujar Kinnari N.Mistry +1 位作者 Dharamshibhai N.Rank Chaitanya G.Joshi 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2018年第12期666-675,共10页
Objective: To explore the antiproliferative activity and apoptosis in cells caused by active compounds present in plants using different techniques. Methods: We investigated the antiproliferative effects of methanolic... Objective: To explore the antiproliferative activity and apoptosis in cells caused by active compounds present in plants using different techniques. Methods: We investigated the antiproliferative effects of methanolic extracts from different parts of seven plants on A-549(lung cancer) cells and primary cell culture(chick embryo fibroblast cells, as normal cells) using MTT assay and the potent plant was fractioned further. All these fractions were screened again for anti-proliferative activity. DNA fragmentation and DAPI staining were used to study apoptosis. Quantitative real-time was used to investigate the expression of apoptoticrelated genes. LC-MS and 1 H-NMR techniques were used to identify the active compounds present. EnzCheck caspase-3 assay kit was used to measure caspase-3 activity. Results: Methanolic extract of Vitex negundo(V. negundo) was selected as a potent fraction. Among all fractions screened, ethylacetate fraction of V. negundo was selected as the most potent antiproliferative fraction and phytochemical analysis of the extract revealed the presence of secondary metabolites. Ethaylacetate fraction of V. negundo was found to cause characteristic apoptotic morphological changes and generation of ROS in A-549 cells. Ethaylacetate fraction of V. negundo also induced apoptosis in A-549 which was supported by DNA fragmentation and DAPI staining. To investigate the molecular mechanism behind the cytotoxic effect of ethaylacetate fraction of V. negundo, quantitative real-time PCR was used to measure expression levels of p53, bax, bcl2, casp-3 and casp-9. Using LC-MS and 1 H-NMR techniques, cytotoxic compounds(luteolin and p-hydroxy benzoic acid) were identified which increased casp-3 activity in a dose and time-dependent manner in A-549 treated cells. Conclusions: It is concluded from the present study that V. negundo is capable of triggering growth-inhibitive and apoptosis effects in A-549 cells, signifying that V. negundo may possesses anti-lung cancer activity. 展开更多
关键词 Apoptosis DNA FRAGMENTATION ASSAY ROS mtt ASSAY Real time ASSAY DAPI STAINING
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和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究 被引量:3
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作者 窦建卫 杨艺 +4 位作者 杨小蒨 杨燕莹 李高彪 唐锐 朱宇红 《山东中医药大学学报》 2022年第1期101-107,共7页
目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白... 目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。 展开更多
关键词 和胃降逆胶囊 人胃癌AGS细胞 细胞增殖 细胞凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路 四甲基偶氮唑蓝法 蛋白质印迹法 实时荧光定量聚合酶链式反应
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化合物MDPE的抗肿瘤活性
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作者 李海晶 杨春柳 +2 位作者 张晓旭 路惬楠 杨更亮 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第2期174-180,共7页
探讨化合物1-(3R,3aR)-8-甲基-3-(p-甲苯基)-3a,4-二氢硫色并[4,3-c]-1-乙酰基吡唑啉(MDPE)的体外和体内抗肿瘤生物活性.体外实验采用MTT法,研究MDPE对SGC7901,A549,Hela,HepG2,H22和S180细胞的生长抑制作用;体内实验研究MDPE对H22肝癌... 探讨化合物1-(3R,3aR)-8-甲基-3-(p-甲苯基)-3a,4-二氢硫色并[4,3-c]-1-乙酰基吡唑啉(MDPE)的体外和体内抗肿瘤生物活性.体外实验采用MTT法,研究MDPE对SGC7901,A549,Hela,HepG2,H22和S180细胞的生长抑制作用;体内实验研究MDPE对H22肝癌细胞皮下移植瘤和S180腹水瘤的抑制作用.结果显示:在体外实验中,MDPE对SGC7901,A549,Hela,HepG2,H22和S180细胞的生长抑制作用高于同浓度的顺铂,半致死质量浓度(IC50)分别为8.44,8.91,7.30,11.04,7.08和6.93μg/mL;在体内实验中,MDPE以每天给药1,5和10mg/kg的剂量灌胃给药,连续给药10d,对H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤的抑制率分别为45.33%,50.16%和51.73%,对S180腹水瘤小鼠的生命延长率分别为29.16%,56.66%和79.75%,此外,还考察MDPE对免疫系统和骨髓的影响.结果证实,MDPE是一种潜在的抗肿瘤药物,其作用机制等值得今后进一步深入研究. 展开更多
关键词 抗肿瘤生物活性 体内和体外 mtt 肿瘤抑制率 生命延长率
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LAK细胞活性与体外培养时间关系的研究
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作者 杨菁 岳春丽 +1 位作者 王化洲 谭兆印 《锦州医学院学报》 1995年第3期12-14,共3页
本文报告了以引产胎儿胸腺细胞为淋巴细胞来源,用IL-2激活后LAK活性与培养时间的关系。经多次重复实验证明,MTT法是简单、易行、准确可靠的检验LAK活性的方法之一。在我们实验室的培养条件之下,LAK活性最高时间是在... 本文报告了以引产胎儿胸腺细胞为淋巴细胞来源,用IL-2激活后LAK活性与培养时间的关系。经多次重复实验证明,MTT法是简单、易行、准确可靠的检验LAK活性的方法之一。在我们实验室的培养条件之下,LAK活性最高时间是在培养4~8天之间,此间LAK活性比培养前增加了85.7~114.3%,是收获LAK细胞的最佳时间。两周后LAK活性衰减很快,因此,作者认为、LAK细胞培养时间不宜超过两周。 展开更多
关键词 LAK活性 体外培养 mtt 培养时间
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索拉非尼对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响 被引量:6
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作者 程秀莲 韩利峰 +2 位作者 唐秀丽 赵娜 刘宁宁 《肝脏》 2020年第11期1181-1184,共4页
目的探讨索拉非尼对肝癌细胞株HepG2、MHCC97-H、QGY-7701、Bel-7404和SKHep-1细胞活性和细胞凋亡的影响,以及对JAK-STAT信号通路的影响。方法利用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)比色法和流式细胞仪分别检测了不同浓度索拉非尼对各细胞株抑制作... 目的探讨索拉非尼对肝癌细胞株HepG2、MHCC97-H、QGY-7701、Bel-7404和SKHep-1细胞活性和细胞凋亡的影响,以及对JAK-STAT信号通路的影响。方法利用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)比色法和流式细胞仪分别检测了不同浓度索拉非尼对各细胞株抑制作用以及细胞凋亡的影响;采用qRT-PCR法和免疫印迹法分别检测了索拉非尼在不同人肝癌细胞株中对JAK-STAT信号通路中JAK2和STAT3 mRNA和蛋白表达量的影响。结果MTT结果显示,索拉非尼对肝癌HepG2、MHCC97-H、QGY-7701、Bel-7404和SKHep-1细胞株半数抑制浓度分别为(13.17±0.09)μmol/L、(9.28±0.05)μmol/L、(11.97±0.07)μmol/L、(8.49±0.06)μmol/L和(10.54±0.03)μmol/L;当索拉非尼浓度为20μmol/L,孵育细胞时间为72 h时,其抑制效果最佳;与对照组相比,索拉非尼均能促进肝癌HepG2、MHCC97-H、QGY-7701、Bel-7404和SKHep-1细胞株的凋亡(P<0.01);索拉非尼能够降低肝癌细胞株JAK2和STAT3 mRNA和蛋白的表达量。结论索拉非尼能够抑制肝癌细胞的活性,诱导细胞发生凋亡;JAK-STAT信号通路普遍存在于各肿瘤细胞中,索拉非尼能够抑制信号通路蛋白表达,提示索拉非尼作用靶点可能是JAK-STAT信号通路,也可能是防治其他肿瘤的新靶点。 展开更多
关键词 肝癌细胞 流式细胞仪 mtt QRT-PCR 免疫印迹法 JAK2蛋白 STAT3蛋白
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