史锁芳治疗感染后咳嗽经验

史锁芳教授认为感染后咳嗽病位在肺,涉及肝脾,病理因素多责之于风、痰、火。临床治疗可根据病程分阶段论治:初期重在宣透,处方以三拗汤加质轻性浮之品;中期以清解郁热为主,辅以疏风散邪,常用桑叶、桑白皮、薄荷等;晚期清热养阴、润肺益气,处方可选麦门冬汤、沙参麦冬汤、清燥救肺汤加减。同时,史教授还善用“风四药”(桑叶、菊花、全蝎、僵蚕)疏风解痉止咳。对于难治性感染后咳嗽,史教授遵循因人制宜、因时制宜原则,因势利导,常获佳效。附验案2则。

基于时空医学探析“六经欲解时”

梳理历代医家对“六经欲解时”的认识及现代临床研究,对其进行论述。提出以光变时空理论为基础,从时空医学角度剖析“六经欲解时”相关条文背后更加深层的含义;总结了光变时空理论渗透下日周期、月周期、年周期的应用,强调了多维度考虑问题,同时注重天人相应,才能更好地理解张仲景确定六经欲解时辰的独特见解,为临床治疗提供思路。

基于五运六气理论分型论治不寐

基于五运六气理论探讨不寐,遵循三阴三阳开阖枢的时空周期规律,佐以六经欲解时理论,结合不寐的临床症状,将不寐分为入睡型、维持型、早醒型和特发型4种类型。入睡型不寐与少阴、太阴和阳明的开阖枢功能异常关系密切,治宜枢转少阴、降阳明、开太阴,方予麦门冬汤、归脾汤等。持续型不寐与太阳、少阴和少阳的功能失常息息相关,治分寒化、热化两端:寒化则温元阳、发太阳,予麻黄附子细辛汤;热化则滋少阴肾水、清上炎之火,方予黄连阿胶鸡子黄汤。早醒型不寐与少阴、厥阴和少阳功能失调密切相关,治宜通少阴枢纽、调厥阴气机、清少阳之火,方予柴胡辈、黄连温胆汤等。特发型不寐是一种易于特定时间清醒的不寐类型,以厥阴欲解时清醒者居多,治宜阖厥阴、升少阳,方予乌梅丸、当归四逆汤等。

胃蛋白酶原Ⅱ时间分辨荧光免疫分析法的建立

建立胃蛋白酶原Ⅱ (PGⅡ )的时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)。包被PGⅡ单抗 810 1# 和使用DTTA络合Eu3 + 标记PGⅡ单抗 810 2 # ,建立PGⅡTRFIA。结果用Log -Logit函数和四参数Logit函数数据处理。批内和批间CV分别为 2 .1%和 3.8% ,平均回收率为 10 4 .6 % ,灵敏度为 0 .0 2 μg/L。标准曲线呈直线 ,ED50 为 16 .2 1μg/L。与PGⅠ、AFP、CA5 0、CA12 5及CA2 4 2等无交叉反应。Eu3 + 标记单抗在 - 30℃保存 ,可达一年以上 ,免疫活性基本无损失。同批试剂连续分析 8个月结果稳定 ,与IRMA测定结果基本吻合。应用TRFIA检测血清PGⅡ具有灵敏度高、操作简便和时间短等特点 ,是一种适用于人群胃病普查的良好方法 ,具有推广应用价值。

甲状腺球蛋白抗体竞争TRFIA技术的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法用甲状腺球蛋白抗原包被96孔板,用铕(Eu3+)标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;批内变异系数(CV)为3.3%～4.1%,批间CV为3.7%～4.7%;平均回收率为97.9%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.881 3;男女TgAb测定值差异无统计学意义;TgAb的正常值范围为≤110 IU/mL。结论建立的TgAb-TRFIA是一个高敏感和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

血清甲状腺激素在老年慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者中的临床研究

目的研究不同发病阶段老年慢性阻塞性肺部疾病(慢阻肺)合并呼吸衰竭重症病人中血清TH水平的变化情况以及预后影响的研究。方法筛选48人老年慢阻肺伴随呼吸衰竭症重症病人为观察组研究对象,对照组48人为相同年龄段的单纯慢阻肺患者。应用时间荧光分辨免疫技术定时检测所有参与者的血清中三碘甲状腺原氨酸(TT_3)、血清甲状腺素(TT_4)、游离TT_3(FT_3)、游离TT_4(FT4)及促甲状腺激素(TSH)的水平,判断其变化情况。结果老年慢阻肺伴随呼吸衰竭症重症病人者TT_3比对照组要低很多(P<0.05),有显著性的差别。观察组TT_4、FT_4、TSH和对照组差距不大(P>0.05),没有显著性的差别。观察组中病死组病人TT_3、TT_4、FT_3、FT_4都比存活组低很多(P>0.05),有显著性差异;TSH水平差异没有显著性(P>0.05)。结论血清TH水平变化情况能够反映出老年慢阻肺伴随呼吸衰竭症重症病人的发病情况,老年慢阻肺伴随呼吸衰竭症重症病人TT_3明显低,检测的血清TT_3作为指标能有效诊断老年慢阻肺伴随呼吸衰竭重症病人发病情况及其预后估计。

甲状腺过氧化物酶抗体TRFIA技术的建立及临床应用

目的:建立甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法:用TPO抗原包板,用Eu3+标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TPOAb。结果:TPOAb-TRFIA的灵敏度为1.0IU/ml;批内CV为3.2%～5.3%,批间CV为3.6%～5.6%;平均回收率为97.95%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.9861;女性TPOAb测定值显著高于男性(P<0.01),且人群中TPOAb的阳性率女性也显著高于男性;TPOAb的正常值范围为≤32.6IU/ml。结论:本法建立的TPOAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。

全自动时间分辨荧光免疫分析系统EASYCUTA分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫的方法学性能验证方案和实验方法。方法参考CNAS-CL02:《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO 15189:2012)对医学实验室检测系统性能评价的相关要求,结合实际工作需求,设计实验验证方案,并对全自动时间分辨荧光检测仪EASYCUTA测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的精密度、正确度、线性分析测量范围、可检测极限、参考区间、分析灵敏度,抗干扰能力,交叉污染,方法学对比等进行验证和评价,并将检测结果与厂商(苏州新波公司)提供的性能指标进行比较。结果 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测系统检测HBV-M,TP,HCV,HIV项目的精密度、正确度、分析测量范围、可报告范围、参考区间、分析灵敏度、抗干扰能力、交叉污染,等均符合国际公认质量要求。方法学比对中,乙肝五项与Rochee601的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。术前四项(HBsAg、TP、HCV、HIV)与Abbott i2000的阴阳性符合率>95%、K值评级为"优"。方法学对比合格。结论 EASYCUTA全自动时间分辨荧光检测仪测定乙肝五项,TP-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab的主要分析性能验证结果与厂商说明书提供的分析性能一致,能够满足临床要求。本研究对规范医学实验室建设以及提供仪器检测质量具有重要的意义。

Sm^(3+)标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26%和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73%和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483MPL U/L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。

组织因子途径抑制物-2的时间分辨荧光免疫测定方法的建立及评价

目的建立测定血液中组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway-2,TFPI-2）含量的时间分辨荧光免疫测定方法（time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA）。方法以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体,单克隆抗体3C8作为第一抗体,原核表达的人TFPI-2作为标准品,Eu3＋标记的羊抗鼠单克隆抗体作为检测抗体,采用双抗体夹心法建立TFPI-2 TRFIA分析系统,并与酶联免疫吸附法（ELISA）进行比较。结果自制TFPI-2 TRFIA试剂标准曲线的线性范围为0.1~50 ng/mL,灵敏度为0.048 ng/mL,批内和批间变异系数均≤8.39%。应用该方法测定56例冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease,CHD）患者及24例正常体检者血浆中的TFPI-2分别为（10.58±7.12）和（8.53±2.32）ng/mL。结论我们建立的TFPI-2 TRFIA分析方法与ELISA相比灵敏度更好,定量检测结果能够敏感准确地反映血液内TFPI-2的浓度变化,特异性和稳定性均符合要求。

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。

基于龙砂医学流派思维运用乌梅丸汤方验案3则

介绍龙砂医学流派代表性传承人对乌梅丸的理解及临床运用。黄煌认为乌梅丸主治以呕吐、烦躁、厥冷、疼痛、久利为特征的疾病;顾植山认为乌梅丸主治厥阴枢机不利、阴阳气不相顺接、寒热错杂,部分病症在下半夜出现或加重者。并举验案3则。

口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为建立快速定量检测羊血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,本研究通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中获得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于纯化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。该方法能够检测羊血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的羊类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率为98%,阴性样品符合率为92%,总符合率为95%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法同传统的ELISA方法相比,特异性相当、敏感性更高,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。

犬细小病毒时间分辨荧光免疫法的建立及初步应用

随着人们物质生活水平不断提升,宠物犬的养殖数量不断增加,由犬细小病毒(CPV)引起的疾病的发病率也呈升高趋势。CPV是我国出入境口岸宠物检疫的重要病原之一,为提高检疫效率和准确率,本研究建立了犬细小病毒时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。本研究主要选用犬细小病毒特异性单克隆抗体(MAb)4C11和7D5分别作为包被抗体和检测抗体,检测抗体用镧系元素中的铕(Eu3+)标记,制备出双抗体夹心TRFIA分析法。结果显示,该方法灵敏度可达0.79 ng/m L;CPV标准品回收率为96.48%~105.17%,同步检测CCV、CDV、CAV-1、CPIV标准品,结果均为阴性;重复性检测发现批内和批间变异系数分别为4.78%~6.03%和4.23%~6.42%;4℃可保存6个月以上,37℃可保存7 d以上。临床检测结果与PCR方法一致。结果表明,该方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强、重复性好、操作便捷,受本底因素影响少等优点,适用于CPV的快速检测。且读卡方式多样,满足了不同实验条件的要求,具有较高的临床实用价值和推广价值。

基于《黄帝内经》五运六气理论的临证处方策略

文章在梳理历代医家运气用药经验,厘清运气方药、开阖枢方药、运气靶向药等概念基础上,提出基于运气理论临床,需辨运气之常与变、参合运气脉、运气体质与大司天理论,结合“标本中气”及其从化理论、“欲解时”理论,辨“开阖枢”三阴三阳时相论,构建运气临床思维范式与处方策略。

稀土掺杂无机纳米晶及其时间分辨荧光生物检测应用

时间分辨荧光生物标记作为一种灵敏的非放射性标记技术,在科研及医疗机构已获得广泛应用。传统的时间分辨荧光标记以稀土螯合物作为分子探针,存在着光化学稳定性差、长期生物毒性以及价格昂贵等缺点。稀土掺杂无机纳米晶因其优异的光化学与光物理性能,是目前普遍看好且有望成为替代稀土螯合物的新一代时间分辨纳米荧光探针。利用稀土纳米探针的长寿命发光,结合时间分辨探测技术,可以有效抑制短寿命的背景荧光干扰,显著提高生物检测的灵敏度和信噪比。本文系统地介绍了稀土掺杂无机纳米晶独特的发光性能及其作为时间分辨纳米荧光探针在疾病标志物体外检测方面的最新研究进展,并对该领域的未来发展方向和趋势进行了深入探讨。

柯萨奇病毒A16型时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制

目的建立一种简便、准确、灵敏度高的铕标记柯萨奇病毒A16型的时间分辨免疫荧光分析技术（TRFIA）。方法抗CA16单克隆抗体包被96孔板,用Eu^3＋标记抗CA16配对抗体,运用双抗夹心法建立柯萨奇病毒A16型的时间分辨免疫荧光分析法,分析其检测灵敏度、精密度,回收率,并比较其与其他检测试剂盒的相关性。结果 CA16时间分辨免疫荧光试剂的检测灵敏度为0.02 ng/ml,批内和批间变异系数分别在1.3%-8.5%和1.7%-11.9%之间,回收率在100.2%-101.5%之间,与金标准PCR相比,其检测结果的相关性均高于ELISA法和胶体金法。结论建立了铕标记柯萨奇病毒A16型的时间分辨免疫荧光分析法,该方法简便、准确、灵敏度高,适用于柯萨奇病毒A16型的临床筛查。