YAP、p-STAT3、LMP2A在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、外源性表达潜伏膜蛋白2A(LMP2A)在鼻咽癌(NPC)中的表达及临床意义。方法收集2020年12月至2021年12月于临沂市人民医院接受治疗的202例NPC患者的活检术石蜡标本作为观察组,同时收集本院98例鼻咽黏膜慢性炎组织标本作为对照组。分析两组YAP、p-STAT3及LMP2A的表达,并分析YAP、p-STAT3及LMP2A三指标与NPC患者的临床病理参数、预后关系。结果观察组YAP、p-STAT3、LMP2A蛋白高表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、组织分化以及有无远处转移NPC患者之间YAP表达比较差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期和有无淋巴结、远处转移NPC患者之间p-STAT3表达比较差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、组织分化以及有无淋巴结转移NPC患者之间LMP2A表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。经随访后发现,预后良好组181例,预后不良组21例;两组年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同预后患者TNM分期、淋巴结及远处转移情况、YAP、p-STAT3、LMP2A高表达率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析可知,TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结及远处转移、YAP、p-STAT3及LMP2A高表达是影响NPC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论NPC患者中YAP、p-STAT3、LMP2A呈上升表达,且三指标高表达与NPC病情的发生发展以及预后之间存在密切联系,对预测患者预后不良具有重要意义。

鼻咽癌组织中miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin的表达及调控作用

目的:观察鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中miR-200c、潜伏期膜蛋白1(LMP1)、E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-binding protein 2,ZEB2)和E-cadherin的表达变化,并探讨其调控作用。方法:选取2021-05~2022-06于广州市花都区人民医院住院的NPC患者62例和鼻咽炎患者41例为研究对象。分别采用RT-PCR法检测两组患者组织中的miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达和免疫印迹的方法检测两组组织中LMP1、ZEB2和E-cadherin蛋白表达,并对miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达进行Pearson线性相关分析。结果:NPC组织中miR-200c的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05),LMP1和ZEB2 mRNA和蛋白的表达水平均高于鼻咽炎组(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05);NPC组织中LMP1 mRNA与miR-200c的表达呈负相关(r=-0.853,P<0.05),miR-200c与ZEB2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.842,P<0.05),ZEB2 mRNA与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.590,P<0.05)。结论:NPC组织中LMP1和ZEB2表达升高,而miR-200c和E-cadherin表达水平降低,有望成为NPC诊疗新靶点;LMP1可能通过诱导下调miR-200c的表达,使得ZEB2转录因子表达上调,最终抑制E-cadherin的表达,从而促进NPC的侵袭和转移。

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.

鼻咽癌组织中EB病毒LMP1的表达与癌细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨EB病毒编码的LMP1在体内鼻咽癌细胞中，是否可能通过影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡的生物学过程，而在鼻咽癌的发展演进过程中起作用。方法：采用TUNEL法原位检测癌细胞的调亡程度，用免疫组化LSAB法检测LMP1、PCNA、p53和bcl－2蛋白表达Z分析LMP1的表达与癌细胞增殖、凋亡以及与p53、bcl－2表达的相关性。结果：LMP1的表达与否，与鼻咽癌细胞增殖活性的差异无显著意义，而与癌细胞凋亡程度之间的差异有显著意义，其表达与癌细胞凋亡程度呈正相关；LPM1的表达与p53和bcl－2的表达无相关性。结论：提示LMP1在体内鼻咽癌组织中可能有促使癌细胞凋亡的生物学作用，其机制可能是通过激活细胞毒性T淋巴细胞，增强后者对癌细胞的杀伤作用。LMP1对癌细胞增殖和凋亡的作用可能并不受p53及bcl－2表达的影响。

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制，对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照，采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物；②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒，以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ；③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应；④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料，应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法，确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物?

EB病毒LMP1对鼻咽癌中瘤细胞分化的影响

目的 探讨EB病毒LMP1对早期鼻咽癌中瘤细胞分化的影响。方法 收集 31例早期鼻咽非角化性癌活检组织。采用DAKO公司的PNA探针和PNA原位杂交试剂盒检测EB病毒早期RNAs (EBERs)。应用免疫组化法检测LMP1,α catenin ,β catenin ,γ catenin以及高、低分子量细胞角蛋白。结果 31例癌组织中均有相当数量的瘤细胞呈EBERs阳性 ,其中19例表达LMP1( 6 1.2 9% )。LMP1阳性组γ catenin的表达百分率 ( 5 3 .2 5± 34.12 % )明显低于LMP1阴性组 ( 80 .42±15 .77% ,P <0 .0 1)。γ catenin的表达与低分子量细胞角蛋白的表达间呈正相关 (r=0 .44 0 ,P <0 .0 5 )。α catenin ,β catenin和γ catenin的表达相互间呈两两正相关。结论 鼻咽癌中瘤细胞的LMP1能下调γ catenin的表达 ,从而抑制瘤细胞的分化。

EBV-LMP1上调Ezrin表达对鼻咽癌细胞转移潜能的影响

背景与目的:细胞骨架相关蛋白Ezrin的异常表达与肿瘤侵袭转移密切相关,既往研究已证实EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barr virus latent membrane protein1,EBV-LMP1)可促进鼻咽癌细胞的转移能力。本研究旨在进一步探讨EBV-LMP1是否通过改变Ezrin的表达来影响鼻咽癌细胞的转移能力。方法:采用免疫细胞化学和Western blot检测两种鼻咽癌细胞株-CNE1细胞(EBV阴性)和CNE1-GL细胞(稳定转染EBV-LMP1)中LMP1和Ezrin的表达;细胞-基质粘附实验检测CNE1、CNE1-GL和经Ezrin抗体预处理的CNE1-GL细胞(AntiEzrin-CNE1-GL)对细胞外基质的粘附力;Transwell小室法检测上述3种细胞的运动和对重组基底膜侵袭能力。结果:CNE1细胞中Ezrin阴性表达,而CNE1-GL细胞中Ezrin强阳性表达。CNE1-GL细胞对细胞外基质的粘附率[(89.38±6.12)%]强于CNE1细胞[(49.42±5.37)%](P<0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞对基质的粘附率[(56.94±4.08)%]明显下降,与CNE1-GL相比,差异有统计学意义(P<0.05)。运动实验和侵袭实验均提示CNE1-GL细胞运动、侵袭能力(107±11和179±25)强于CNE1细胞(27±3和46±6),差异均有统计学意义(P<0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞的运动、侵袭能力(38±4和51±5)较CNE1-GL细胞显均显著下降(P<0.001)。结论:CNE1细胞中EBV-LMP1可通过上调Ezrin表达来促进细胞转移。

EB病毒诱发淋巴瘤中LMP的表达

背景与目的:EB病毒潜伏膜蛋白-1(latent membrane protein-1,LMP-1)是一种病毒癌蛋白,可能在淋巴瘤发生中起重要的作用。本文旨在了解EB病毒诱发的淋巴瘤细胞与正常人淋巴细胞中LMP的差异表达情况。方法:应用实时定量PCR方法检测EB病毒诱发淋巴瘤细胞和正常人淋巴细胞中LMP(LMP-1、LMP-2A及LMP-2B)的差异表达情况。采用Western blot检测LMP-1蛋白表达。结果:建立了EBV诱发淋巴瘤的动物模型获得诱发淋巴瘤,检测LMP-1、LMP-2A、LMP-2B在诱发淋巴瘤细胞及正常人淋巴细胞中的表达情况。实时定量PCR结果表明,LMP-1在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调255.7倍,表达差异有统计学意义(P<0.05),LMP-2A在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调37.74倍,表达差异有统计学意义(P<0.01),LMP-2B在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调330.63倍,表达差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果表明LMP-1在诱发的淋巴瘤细胞中的表达比在正常淋巴细胞中的表达上调。结论:在EB病毒诱发的淋巴瘤发生过程中LMP可能起重要作用。

EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响

背景与目的:EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)在鼻咽癌的浸润和转移过程中起重要的作用。本实验目的在于研究EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响和探讨其中的相关机制。方法:应用免疫细胞化学RT-PCR法和Western blot检测LMP1、E-cadherin和intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)在人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和转染了LMP1基因的CNE1-GL细胞中的表达。应用细胞-细胞粘附实验、细胞-基质粘附实验、划痕实验和细胞运动实验观察LMP1对鼻咽癌细胞粘附和运动能力的影响。结果:免疫细胞化学结果显示:LMP1在CNE1和CNE1-GL细胞中的阳性率分别为0和(96.60±3.03)%(P<0.01);E-cadherin蛋白的阳性率分别为(37.47±1.50)%和(19.53±1.92)%(P<0.01);ICAM-1蛋白的阳性率分别为(5.27±1.45)%和(93.33±4.23)%(P<0.01)。RT-PCR和Westernblot结果表明,与CNE1细胞相比较,CNE1-GL细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),而ICAM-1的mRNA和蛋白表达则明显升高(P<0.01)。肿瘤细胞同质粘附实验显示,CNE1-GL细胞的同质粘附能力较CNE1细胞弱(P<0.05)。肿瘤细胞-基质粘附实验得出CNE1-GL细胞的异质粘附能力(A值=0.60±0.03)较CNE1细胞(A值=0.46±0.01)强(P<0.01)。肿瘤细胞运动实验显示,穿过PVPF膜的CNE1-GL细胞数多于CNE1细胞(119.3±6.0 vs 46.3±7.0,P<0.05)。结论:LMP1通过抑制E-cadherin表达、促进ICAM-1表达从而抑制肿瘤细胞的同质粘附能力、增强其异质粘附能力和运动能力来参与鼻咽癌的侵袭和转移。

一种新的基于LMP准则的自适应正弦波频率估计算法

自适应IIR陷波器在许多不同的信号处理场合,尤其在估计淹没在噪声中的正弦波频率方面得到广泛应用。本文在研究了多种自适应IIR陷波器算法的基础上,提出了一种基于LMP准则的修正LMP-MNG算法,仿真结果验证了算法的有效性。

EB病毒LMP1促鼻咽癌细胞生长与CD23、bcl-2表达和凋亡的关系

目的 :探讨EB病毒LMP1表达促鼻咽癌细胞系生长作用与CD2 3、bcl 2表达和细胞凋亡的关系。方法 :用免疫组化LSAB法检测LMP1、CD2 3和bcl 2蛋白的表达 ;用MTT法测定鼻咽癌细胞系的生长能力 ;用DNA电泳法、流式细胞法和TUNEL法检测癌细胞凋亡 ;用CD2 3单抗阻断和MTT法观察CD2 3单抗对鼻咽癌细胞系生长的影响。结果 :表达LMP1的鼻咽癌细胞系 (L CNE1)的生长能力明显增强 ,并有CD2 3蛋白表达 ,而非表达LMP1的鼻咽癌细胞系 (V CNE1和CNE1)的CD2 3表达阴性 ;3种鼻咽癌细胞系均无凋亡发生 ,而都仅有 2 %～ 3 %的细胞表达bcl 2蛋白 ;CD2 3单抗能明显地抑制L CNE1细胞系的生长 ,但对V CNE1和CNE1细胞系的生长无明显影响。结论 :提示LMP1促鼻咽癌细胞系生长可能是通过上调CD2 3所致 ,而与bcl 2的表达和细胞凋亡无关。

LMP2/LMP7基因多态性与乙型肝炎病毒感染结局的关系

目的:探讨低相对分子质量蛋白酶体(LMP)基因单核苷酸多态性(SNP)与HBV感染结局之间的关联.方法:提取287例HBV持续感染者(包括无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎及乙型肝炎后肝硬化患者)及278例健康对照外周血基因组DNA,用PCR-RFLP方法分析LMP2/LMP7基因Codon60/Codon145两个多态性位点的基因型.结果:LMP7基因多态性位点在健康对照与无症状HBV携带者之间的差异有统计学意义(P<0.05),与携带Gln/Gln基因型者比较,携带Gln/Lys基因型者乙型肝炎患病风险增加3.35倍(95%CI:2.02-5.58),携带Lys/Lys基因型者乙型肝炎患病风险增加3.46倍(95%CI:1.41-8.48),携带至少1个Lys等位基因者(即Gln/Lys和Lys/Lys基因型)乙型肝炎患病风险增加3.37倍(95%CI:2.06-5.52);;LMP7基因多态性位点在健康对照与进展性肝炎(包括慢性乙型肝炎和肝硬化)患者之间的差异有统计学意义(P<0.05),与携带Gln/Gln基因型者比较,携带Gln/Lys基因型者乙型肝炎患病风险增加2.22倍(95%CI:1.48-3.32),携带Lys/Lys基因型者乙型肝炎患病风险增加4.33倍(95%CI:2.15-8.73),携带至少1个Lys等位基因者(即Gln/Lys和Lys/Lys基因型)乙型肝炎患病风险增加2.49倍(95%CI:1.69-3.65);;LMP2/LMP7基因多态性位点在无症状HBV携带者与进展性肝炎患者间的差异无统计学意义(P>0.05).结论:LMP7基因可能是无症状HBV携带和进展性肝炎的易感基因;;LMP基因多态性与HBV感染的结局可能无明显相关性.

EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建

目的 克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌。提取质粒 ,限制性内切酶消化 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 扩增的LMP1cDNA长度为 115 8bp ,测序结果与已知序列吻合 ,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论 成功克隆了EBV LMP1cDNA ,并构建了pET 32a LMP1原核表达载体 。

EB病毒潜伏期膜蛋白LMP2A对胃癌细胞增殖的影响

目的:构建EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的腺病毒表达载体,探讨LMP2A表达对胃癌细胞的作用.方法:RT-PCR扩增获取目的基因LMP2A,采用AdEasy系统构建携带目的基因的重组腺病毒载体pAd-2A,脂质体法将重组质粒pAd-2A转染HEK293细胞包装重组腺病毒.用重组腺病毒感染靶细胞SGC(胃癌细胞),通过MTT实验、流式细胞分析、激光共聚焦检测目的基因LMP2A表达对靶细胞增殖的影响.结果:限制性酶切、PCR及测序鉴定证实,目的基因LMP2A正确插入重组质粒,HEK293细胞成功包装出具有稳定感染性的重组腺病毒,命名为vAd-2A,经测定病毒滴度为3.16×10^(12)pfu/L.MTT实验、流式细胞分析以及激光共聚焦检测结果显示,感染腺病毒vAd-2A的SGC细胞增殖旺盛(感染vAd-2A细胞vs感染vAd细胞和未感染病毒细胞,P<0.01),S期细胞比例升高(24 h:35.2%±5.1%vs 14.0%±3.4%,13.2%±4.6%,P<0.01;48 h:25.6%±4.1%vs 12.9%±2.6%,12.5%±3.2%,P<0.01),LMP2A可诱导细胞周期调节蛋白cyclinE的表达.结论:成功构建了EBV潜伏期膜蛋白基因LMP2A的重组腺病毒表达载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒,同时证实LMP2A可通过诱导cyclinE的表达促进SGC细胞增殖.

一种α稳定分布下的变抽头长度LMP算法

针对无法事先知道滤波器抽头长度,且系统中存在α稳定分布噪声的情况,提出了一种α稳定分布背景下的变抽头长度自适应算法,采用3个并行的滤波器,比较数据段内其平均P阶误差大小,每K点数据段更新一次抽头长度,数据段内滤波器权值采用LMP算法调整。算法仿真表明,算法在不同特征指数的α稳定分布下都具有很强的韧性,能自适应调整到最优抽头长度,达到最优抽头长度的LMP算法的稳态误差。

LMP-1 mRNA反义寡核苷酸抑制大鼠成骨细胞的分化

为深入探讨LIM矿化蛋白 1(LMP 1)在成骨细胞分化中的作用 ,体外培养大鼠成骨细胞 ,在培养基中加入LMP 1反义寡核苷酸 (LMP 1antisense终浓度为 0 8mol L) ,以阻断大鼠成骨细胞中LMP 1mRNA的表达。对照组加nonsense(终浓度为 0 8mol L)。测定细胞的碱性磷酸酶 (ALP)活性、培养基中骨钙素 (OC)的含量 ,免疫组化分析Ⅰ型胶原蛋白的表达 ,Northernblotting检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果显示 :LMP 1mRNA被LMP 1antisense阻断后 ,ALP活性降低、OC分泌减少、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达下降。上述结果表明 :LMP 1mRNA被LMP 1反义寡核苷酸阻断后 ,成骨细胞分化受到明显的抑制 ,提示LMP 1是成骨细胞分化必不可少的正调节因子。

鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N端XhoⅠ酶切位点的丢失

背景与目的;众所周知,EB病毒LMP1基因在鼻咽癌变过程起着一定的作用。本研究通过检测广东地区鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切位点的丢失,探讨LMP1基因变异在鼻咽癌发生发展中的作用。方法:收集中山大学肿瘤防治中心鼻咽癌患者鼻咽新鲜活检标本63例。收集EB病毒健康携带者外周血单个核细胞(PBMCs)10例作为对照。采用QIAamp DNA Mini Kit和QIAampDNA Blood Mini Kit分别抽取组织和外周血单个核细胞的DNA,应用巢式PCR扩增EB病毒LMP1基因的N-末端区,并用Xho Ⅰ对扩增产物进行酶切。采用四色荧光 末端终止法对扩增产物进行序列分析。结果:10例健康携带者外周血单个核细胞的EB病毒LMP1基因N-末端区均未见Xho Ⅰ酶切位点的丢失。63例鼻咽癌组织中有50例(79.37％)出现Xho Ⅰ酶切位点的丢失(Xho Ⅰ-loss),还有4例(6.34％)为Xho Ⅰ酶切位点部分丢失,只有9例(14.29％)未见Xho Ⅰ酶切位点的丢失(wt-Xho Ⅰ)。除了Xho Ⅰ酶切位点的丢失(nt:169423～169428;GAGCTC→GA T CTC)外,还发现四个错义点突变。结论:本研究所检测的广东地区EB病毒健康携带者外周血单个核细胞所携带的EB病毒LMP1基因为wt-Xho Ⅰ,而在鼻咽癌组织中主要为Xho-Ⅰ-loss。因此,我们认为EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切位点的丢失和其?

UBAP1以及LMP1基因在鼻咽癌组织中的表达研究

目的研究UBAP 1和LMP 1基因在鼻咽癌组织中的表达和相关机制。方法本研究采用免疫组化(immunohistochemistry)检测鼻咽癌细胞的增殖,通过Western blot和RT-PCR检测UBAP 1和LMP 1基因在人鼻咽癌发生发展过程中的表达。结果免疫组化结果表明,与正常CK相比,检测到UBAP 1表达明显下调,细胞增殖数目减少;而LMP 1则明显上调,导致其细胞增殖数目增加。NPC细胞中的IL-6和TNF-α的水平与对照相比有显著的增加;为了验证之前检测的UBAP 1和LMP 1基因表达的准确性,本研究检测了UBAP 1以及LMP 1蛋白在NPC细胞中的表达,结果显示与基因表达结果的趋势相一致。结论UBAP 1和LMP 1基因与癌细胞的增殖和迁移相关,且UBAP 1和LMP 1也可能具有不同的信号通路效应因子,是早期诊断和靶向治疗的潜在新靶点,也是NPC预后的新分子标记。

EBV-LMP1促CNE2细胞迁移的作用机制

目的:探讨EBV-LMP1对鼻咽癌细胞CNE2迁移表型的影响及作用机制。方法:用RV-LNSX,RV-LMP1和RV-LMP1TRADD逆转录病毒分别感染CNE2细胞,G418筛选后,观察和检测转基因细胞的形态学特点,在基质中的运动迁移能力以及E-钙黏蛋白(E-Cadherin)表达的变化;用pLNSX,pLNSX-LMP1和pLNSX-LMP1TRADD质粒分别与E-Cadherin报告基因共转染293细胞,检测LMP1对E-Cadherin启动子活性的影响。结果:与CNE2和CNE2-LNSX细胞相比,CNE2-LMP1在培养过程中由扁平、鹅卵状上皮细胞形态逐渐演变为细胞间接触消失的长梭状纤维细胞形态,相对迁移明显增大(n=3,P<0.05),且E-Cadherin表达明显下调或缺失;随着共转染野生型LMP1(pLNSX-LMP1)剂量的增加(0.2,0.6,1.0μg),对E-Cadherin启动子转录活化的抑制率增加,呈明显浓度依赖性;LMP1TRADD不改变CNE2细胞形态学及迁移表型,对E-Cadherin启动子的转录活性及蛋白表达亦无明显影响。结论:抑制E-Cadherin启动子活化可能是EBV-LMP1下调E-Cadherin蛋白表达、促CNE2细胞迁移的机制之一,位于LMP1羧基端的TRADD可能是其促迁移的主要活性部位。

EBV-LMP1C端RNA的体外转录合成及其靶脱氧核酶的初步筛选

目的探讨用体外转录方法制备EBV-LMP1C端RNA并用该RNA对其靶脱氧核酶进行初步筛选。方法用巢式PCR方法从绒猴淋巴细胞系B95-8细胞中扩增EBV-LMP1exonc,重组入pGEM-11zf载体,并用T7RNA聚合酶对其进行体外转录制备EBV-LMP1C端RNA。根据该RNA的一、二级结构设计合成3种靶向10～23脱氧核酶,据体外剪切效率筛选高效特异的靶向脱氧核酶。结果成功地构建含EBV-LMP1exonc基因的重组质粒,用体外转录方法用1μg质粒转录出40.25μg高纯度的EBV-LMP1C端RNA,有1种脱氧核酶DZ1对该RNA体外剪切效率达89%。结论用T7RNA聚合酶体外转录方法成功制备了高纯度的EBV-LMP1C端RNA,经体外剪切筛选出高效特异的1种脱氧核酶,为进一步研究奠定了基础。