晚发型重度子痫前期胎盘组织LncRNA HIF1A-AS1、HIF1A表达与胎盘螺旋动脉重铸的关系

目的分析晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织长链非编码RNA缺氧诱导因子-1α-反义链1(LncRNA HIF1A-AS1)、缺氧诱导因子-1α(HIF1A)表达异常与胎盘螺旋动脉重铸的相关性。方法选取2019年10月—2021年4月于本院住院分娩的92例晚发型重度子痫前期孕妇为子痫前期组,选取同期86例正常妊娠孕妇作为正常妊娠组。收集各孕妇年龄、收缩压、舒张压等一般资料,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胎盘组织LncRNA HIF1A-AS1、HIF1A mRNA水平,扫描电子显微镜下测定胎盘螺旋动脉管腔面积和管壁厚度;采用Pearson法分析晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织LncRNA HIF1A-AS1、HIF1A mRNA水平与各参数的相关性。结果与正常妊娠组相比,子痫前期组胎盘组织HIF1A mRNA水平及平均管壁厚度、收缩压、舒张压明显升高,LncRNA HIF1A-AS1水平、平均管腔面积明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织LncRNA HIF1A-AS1与HIF1A mRNA水平呈负相关(r=-0.628,P<0.05),且LncRNA HIF1A-AS1与平均管腔面积呈正相关(P<0.05),与平均管壁厚度、收缩压、舒张压均呈负相关(P<0.05);HIF1A mRNA与平均管腔面积呈负相关(P<0.05),与平均管壁厚度、收缩压、舒张压均呈正相关(P<0.05)。结论晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织LncRNA HIF1A-AS1、HIF1A异常表达,可能与胎盘螺旋动脉重铸不足有关。

三阴性乳腺癌血清外泌体和组织中lncRNA TINCR的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白编码(TINCR)在三阴性乳腺癌(TNBC)患者血清外泌体和组织中的表达情况,探讨其表达水平与TNBC发生、发展的关系。方法选取该院2017年1月至2019年1月收治的83例TNBC患者作为TNBC组,再选取同期就诊的62例非TNBC的乳腺癌患者作为非TNBC组,60例体检健康者作为对照组,检测机体血清外泌体和癌组织中lncRNA TINCR表达情况,分析lncRNA TINCR在血清外泌体和癌组织中表达的相关性,分析血清外泌体和癌组织中lncRNA TINCR表达与患者临床特征及预后的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清外泌体lncRNA TINCR表达对TNBC的诊断价值。结果TNBC组血清外泌体中lncRNA TINCR表达水平高于非TNBC患者和对照组(P<0.05),非TNBC组血清外泌体中lncRNA TINCR表达水平高于对照组(P<0.05);TNBC患者癌组织中lncRNA TINCR表达水平明显高于TNBC患者癌旁组织和非TNBC患者癌组织(P<0.05);Pearson相关性结果显示,癌组织与血清外泌体lncRNA TINCR表达水平呈正相关(P<0.05);血清外泌体和癌组织中lncRNA TINCR表达水平升高与TNBC患者肿瘤T分期、N分期和分级有关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清外泌体lncRNA TINCR表达水平诊断TNBC曲线下面积为0.772;截止随访时间TNBC患者总生存率为85.54%,共死亡12例,其中癌组织lncRNA TINCR高表达患者死亡率高于低表达患者(P<0.05)。死亡患者癌组织和血清外泌体lncRNA TINCR表达水平均高于生存患者(P<0.05)。结论血清外泌体和癌组织lncRNA TINCR在TNBC患者中表达上调,对TNBC诊断和病情判断具有一定的应用价值。

lncRNA TINCR靶向调控miR-221抑制大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白编码(TINCR)通过靶向调控微小RNA(miR)-221表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将体外培养大鼠心肌细胞分为对照组(正常培养)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体)和TINCR组(转染pcDNA3.1-TINCR过表达载体),实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TINCR和miR-221的表达,双荧光素酶报告基因实验检测TINCR与miR-221的靶向结合关系,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达;将miR-221模拟物或抑制剂转染至心肌细胞,分析心肌细胞凋亡变化;将miR-221模拟物与pcDNA3.1-TINCR过表达质粒共转染至心肌细胞中,观察miR-221对TINCR过表达的心肌细胞活力和凋亡的影响。结果:与对照组比较,TINCR组细胞中miR-221表达水平、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平明显降低,而细胞存活率和Bcl-2蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),但pcDNA3.1组与对照组比较各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实TINCR可与miR-221靶向结合。与miR-NC组比较,miR-221组细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);anti-miR-221组的实验结果与之相反。上调miR-221表达后,TINCR过表达对心肌细胞活力和凋亡的作用明显得到逆转(P<0.05)。结论:lncRNA TINCR可通过靶向调控miR-221表达抑制心肌细胞凋亡。

冷刺激小鼠脂肪组织差异表达长链非编码RNA的初步研究

脂肪组织主要有白色脂肪组织(WAT)和褐色脂肪组织(BAT)两种类型;WAT储存能量,BAT通过特异性表达解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)消耗能量产热。与BAT不同,WAT具有很强的可塑性,在寒冷刺激下,呈现褐色脂肪表型、获得褐色脂肪的产热活性("褐色化")。根据对冷刺激组(6℃)和对照组(28℃)小鼠的肩胛区褐色脂肪组织(iBAT)和皮下白色脂肪组织(sWAT)的RNA转录组测序分析结果,初步筛选出1个差异明显的长链非编码RNA(lncRNA-6030408B16Rik)。通过qRT-PCR检测lncRNA-6030408B16Rik在野生型小鼠的脾脏、肌肉、肾脏、十二指肠、大脑、肝脏、sWAT和iBAT中的表达;24只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分成冷刺激组(6℃)和对照组(28℃),两组小鼠分别在6和28℃环境下处理10d,分别采集两组的iBAT和sWAT;并分离出生1d的野生型小鼠褐色前脂肪细胞,诱导分化后,收集0、1、3、5d的细胞,检测UCP1基因和lncRNA-6030408B16Rik在分化过程中的时空表达。qRT-PCR结果显示iBAT和sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量均明显高于其他组织;与对照组相比,冷刺激组iBAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量极显著上调(P<0.01),冷刺激组sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量显著上调(P<0.05);前脂肪细胞诱导分化的过程中,lncRNA-6030408B16Rik的表达量呈先上调后下调的趋势。lncRNA-6030408B16Rik在脂肪组织中特异性高表达。lncRNA-6030408B16Rik可能对白色脂肪组织"褐色化"及褐色前脂肪细胞的分化具有重要的调控作用。

长链非编码RNA TINCR通过miR-7调控肝癌细胞系Huh7侵袭和迁移

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白质编码RNA(TINCR)通过miR-7调控肝癌Huh7细胞侵袭和迁移的机制。方法Real-time PCR测定Huh7细胞中TINCR表达。Huh7细胞中转染TINCR shRNA,CCK-8法测定增殖;Transwell小室法测定侵袭和迁移;Western blot测定MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测发现TINCR和miR-7有结合位点,荧光素酶报告系统鉴定二者靶向关系。Huh7细胞中共转染miR-7 inhibitor和TINCR shRNA,利用上述方法测定细胞增殖、迁移和侵袭变化。结果肝癌细胞中TINCR表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.05)。转染TINCR shRNA后的Huh7细胞中TINCR水平降低(P<0.05),细胞增殖、迁移以及侵袭能力均下降(P<0.05),细胞中MMP-2和MMP-9蛋白水平也降低(P<0.05)。TINCR靶向负调控miR-7表达。miR-7 inhibitor可以提高下调TINCR后的肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平(P<0.05)。结论下调TINCR可以通过靶向促进miR-7表达抑制肝癌细胞Huh7侵袭和迁移。

非编码RNA在牙源性干细胞成牙本质向分化中作用的研究进展

牙源性干细胞是从口腔组织中分离出来的成体干细胞,具有自我更新和多向分化的潜能。成牙本质向分化作为产生修复性牙本质的重要防御反应,其过程涉及一系列转录及转录后的基因表达调控。多项研究证实非编码RNA(ncRNA)在牙源性干细胞特别是牙髓干细胞成牙本质向分化过程中发挥了重要作用,是细胞分化的重要调控靶点,以维持细胞分化特性。新研究技术体系的建立使得ncRNA的调控机制得以进一步阐明。本文从功能、调控的靶基因及通路等方面,对目前ncRNA在牙源性干细胞成牙本质向分化过程中的相关研究进行综述。

长链非编码RNA SNHG20在肝癌组织中的表达和临床意义

目的:探究与分析长链非编码RNA SNHG20(lncRNA SNHG20)在肝癌组织中的表达和临床意义。方法:选取2019年10月-2021年1月本院收治的90例肝癌患者,检测肝癌组织和癌旁组织lncRNA SNHG20的表达,检测肝癌组织和癌旁组织β-Catenin、Cyclin D1及C-myc基因的表达,采用Pearson相关性分析lncRNA SNHG20与β-Catenin、Cyclin D1及C-myc表达的相关性。分析肝癌患者不同微血管侵犯、分化程度及TNM分期情况下lncRNA SNHG20的表达差异。结果:肝癌组织lncRNA SNHG20、β-Catenin、Cyclin D1及C-myc的表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,lncRNA SNHG20与β-Catenin、CyclinD1及C-myc的表达均呈正相关(P<0.05)。不同微血管侵犯、分化程度及肿瘤分期患者病灶组织lncRNA SNHG20、β-Catenin、Cyclin D1及C-myc表达显著不同,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:lncRNA SNHG20在肝癌组织中呈高表达状态,其在不同微血管侵犯情况、分化程度及肿瘤分期者中的差异较大。

前列腺癌组织中TINCR的表达及临床意义

目的探讨组织分化诱导非蛋白编码RNA(TINCR)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集本院2017年5月至2019年7月手术切除的72对前列腺癌组织和癌旁组织,采用原位杂交(ISH)检测TINCR阳性表达情况并计算累积光密度(IOD),实时定量PCR检测TINCR相对表达量并分析其水平与前列腺癌临床病理特征和预后的关系,生存分析采用Kaplan-Meier法而多因素分析采用Cox比例风险模型。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织的TINCR IOD值和表达水平减少(P<0.05)。TINCR表达与前列腺癌患者的年龄、PSA水平和淋巴结转移无关(P>0.05),而与临床T分期、Gleason评分和TNM分期有关(P<0.05),其中TINCR低表达于临床T_(3)+T_(4)期、Gleason评分>8分和TNMⅢ+Ⅳ期的组织中。单因素分析显示TINCR表达与前列腺癌的总生存期(OS)有关,其中TINCR高表达者的中位OS未达,优于低表达者的48.0个月(Log-rankχ^(2)=3.954,P=0.047),多因素分析显示TINCR表达降低是前列腺癌预后不良的危险因素(HR=4.953,95%CI:1.576~15.565,P=0.006)。结论前列腺癌组织中TINCR表达下调,可作为前列腺癌患者诊断及预后预测的潜在分子标志物。

SND1通过识别TINCR的甲基化位点促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长

目的探讨葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1(SND1)与组织分化诱导非编码RNA(TINCR)的相互作用及其对TINCR表达水平和瘢痕疙瘩生长的影响。方法收集2016年6月-2018年5月在陕西省人民医院接受治疗的Ⅱ、Ⅲ度烧伤患者的瘢痕疙瘩组织样本(n=27)。运用生物信息学方法预测TINCR序列中的RNA甲基化位点;培养人原代正常皮肤成纤维细胞(HFs)和瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs),设置HFs组和KFs组。取对数生长期KFs,设置:(1)对照组、空载组及甲基转移酶样蛋白3(METTL3)过表达组;(2)对照组和3-脱氮基腺苷(DAA)组;(3)对照组、SND1重组蛋白组及SND1重组蛋白+DAA组。采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测HFs和KFs中TINCR的相对表达水平,甲基化RNA免疫沉淀技术(MeRIP)联合RT-qPCR检测TINCR的甲基化水平,Western blotting检测SND1和METTL3蛋白的相对表达水平,放线菌素D处理联合RT-qPCR检测TINCR残留水平,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力。取18只BALB/c裸鼠,构建瘢痕疙瘩异种移植模型,随机分为瘢痕疙瘩组、瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组及瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白+DAA组,每组6只,采用HE染色观察瘢痕疙瘩组织生长情况,免疫组化染色和Western blotting检测SND1在瘢痕疙瘩组织中的表达水平。结果TINCR第三外显子含有7个潜在的RNA甲基化位点。与HFs相比,KFs中TINCR相对表达水平(5.43±0.35 vs.1.00±0.11,P<0.01)和甲基化水平(19.73%±1.56%vs.10.25%±1.13%,P<0.01)均明显升高,SND1和METTL3蛋白相对表达水平明显增高(P<0.01),甲基化的TINCR与SND1和METTL3均有结合。与空载组相比,METTL3过表达可促进METTL3 mRNA和蛋白的表达(mRNA:6.03±0.55 vs.1.09±0.09,P<0.01;蛋白:4.33±0.35 vs.0.96±0.08,P<0.01)、增高TINCR甲基化水平(32.89%±2.88%vs.19.04%±1.72%,P<0.01)和相对表达水平(4.65±0.32 vs.1.00±0.10,P<0.01)。与对照组相比,DAA处理可降低TINCR的稳定性[(8.50±1.13)h vs.(12.90±1.41)h,P<0.001]和甲基化水平(7.43%±0.55%vs.18.88%±1.76%,P<0.01),抑制KFs的活力和克隆形成能力(P<0.01)。与对照组相比,SND1重组蛋白处理可增加TINCR的稳定性[(23.95±1.25)h vs.(13.10±1.33)h,P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力(P<0.01),但对TINCR甲基化水平(20.15%±1.74%vs.19.04%±1.77%,P>0.05)无明显影响;DAA处理可消除SND1重组蛋白对TINCR稳定性[(12.00±1.21)h vs.(23.95±1.44)h,P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力的影响(P<0.01)。与瘢痕疙瘩组相比,瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组真皮层有大量成纤维细胞和胶原纤维,瘢痕疙瘩组织中SND1阳性细胞百分比(63.43%±3.32%vs.21.16%±4.67%,P<0.01)和蛋白相对表达水平(2.54±0.13 vs.1.00±0.10,P<0.01)明显增高;而经DAA处理后,瘢痕疙瘩组织中有大量疏松的胶原纤维,SND1阳性细胞百分比(38.52%±6.88%vs.63.43%±3.32%,P<0.01)和蛋白表达水平(1.07±0.09 vs.2.54±0.13,P<0.01)明显降低。结论KFs中TINCR呈高甲基化水平,SND1可识别并结合TINCR的甲基化位点,增强TINCR的稳定性,促进TINCR介导的瘢痕疙瘩生长。

TINCR靶向microR-544a/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)组织分化诱导非蛋白编码RNA(TINCR)靶向microRNA-544a(miR-544a)/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF7细胞株,设置空白对照组(不转入任何载体)、TINCR NC组(pcDNA3.1空载体)和TINCR上调组(pcDNA3.1-TINCR表达载体)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量;CCK-8法检测MCF7细胞增殖情况;流式细胞术检测MCF7细胞凋亡情况;Transwell法检测MCF7细胞侵袭情况;Western blotting检测MCF7细胞FBXW7、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白相对表达量。取TINCR上调组MCF7细胞,分为miR-544a NC组(转染miR-544a NC)和miR-544a上调组(转染miR-544a mimic),验证转染效率。结果空白对照组、TINCR NC组MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量、OD值、细胞凋亡率、穿膜细胞数及FBXW7、PCNA、Bax、MMP-2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组、TINCR NC组比较,TINCR上调组MCF7细胞lncRNA TINCR相对表达量、细胞凋亡率及FBXW7、Bax蛋白相对表达量升高(P<0.05),miR-544a相对表达量、OD值、穿膜细胞数及PCNA、MMP-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)。TINCR上调组与miR-544a NC组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a、FBXW7蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与TINCR上调组和miR-544a NC组比较,miR-544a上调组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a相对表达量升高(P<0.05),FBXW7蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论lncRNA TINCR可能通过靶向miR-544a/FBXW7,抑制人乳腺癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡。

肝癌组织LncRNA TINCR和ANRIL表达水平及其与患者预后的关系

目的探讨肝癌组织长链非编码RNA(LncRNA)组织分化诱导非蛋白质编码RNA(TINCR)和细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2010年7月至2012年11月本院进行手术切除的68例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用RT-PCR方法检测肝癌组织和癌旁组组中LncRNA TINCR和ANRIL相对表达量,分析LncRNA TINCR和ANRIL表达与患者临床病理特征及生存率的关系。结果肝癌组织中TINCR和ANRIL相对表达量均显著高于癌旁组织(P<0.05);TINCR表达量与患者肿瘤大小、肿瘤分化程度及TNM分期有关,ANRIL表达量与患者肿瘤大小和TNM分期有关;TINCR高表达患者无瘤生存率及5年总生存率均显著低于TINCR低表达患者(P<0.05);ANRIL高表达患者无瘤生存率及5年总生存率均显著低于ANRIL低表达患者(P<0.05);肿瘤大小、TINCR高表达和ANRIL高表达是影响肝癌患者预后的危险因素。结论肝癌组织中TINCR和ANRIL表达显著上调,可能参与肿瘤进展过程,与患者预后密切相关。