汽油和甲醇两种燃料的汽车尾气的TK基因突变试验比较

甲醇燃料极有希望成为更清洁的汽油替代品,然而有关甲醇燃料汽车尾气对健康影响的研究报道极少,更未见对甲醇和汽油两种燃料汽车尾气的遗传毒性进行比较研究。为此本课题在同样的车型,同样的工况条件下采集了甲醇尾气和汽油尾气,选用L 5 178Y细胞Thymidine kinase(TK)基因突变试验,在同样的剂量范围进行了两种尾气的遗传毒性检测,并与微核试验和彗星试验的结果进行了比较。结果显示,在33～133ml/ m l范围内,汽油尾气的遗传毒性强于甲醇尾气,但是甲醇尾气的细胞毒性强于汽油尾气;与微核试验和彗星试验比较证实,L 5 178Y细胞TK基因试验检测基因突变更加灵敏。

用tk基因突变试验评价长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性

目的评价有丝分裂抑制剂长春新碱和秋水仙碱的遗传毒性,并比较短期和长期tk基因突变试验的检出灵敏度.方法用长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤细胞分别进行3h及24h染毒,用微孔板法进行tk基因突变试验,计算相对悬浮生长、接种效率、相对存活率、相对总生长及突变频率等指标,并比较短期和长期处理的结果.结果两种受试物3h处理均未出现明显的阳性反应,而24h连续处理后,两种受试物均能诱导tk基因突变频率增高,诱发突变频率分别为自发突变频率的1.6～4.8倍和2.1～6.2倍,呈阳性结果.结论长春新碱和秋水仙碱在长期处理试验中能诱导tk基因突变,而在短期处理试验中未发现明显诱变性,即长期处理能提高tk基因突变试验的检出灵敏度.

长春花碱3和24h处理TK6细胞TK基因突变试验比较研究

[目的]比较用长春花碱对人淋巴母细胞TK6处理3h和24h的诱变性。[方法]用长春花碱对TK6细胞分别进行3h和24h染毒处理,用微孔板法进行TK基因突变试验。计算TK6细胞的接种效率(PE)、相对存活率RS、相对悬浮增值率RSG、总的相对增长率RTG、突变频率MF。[结果]在3h处理条件下,随长春花碱浓度的增加,RS、RTG和RSG等均降低,中、高剂量水平已表现出明显的细胞毒性,但各剂量水平的MF与溶剂对照比较差异均有统计学意义(P﹤0.05);在24h处理条件下,其MF随VBL浓度的增加而增加,并有一定的剂量-反应关系。[结论]较长时间处理对于长春花碱等细胞周期依赖性的毒物是必要的。

用TK基因突变试验评价葛根素的抗诱变性

背景与目的:用TK6人类淋巴母细胞TK基因突变试验评价葛根素的抗诱变性。材料与方法:设溶剂对照组、5μg/ml甲基磺酸甲酯(MMS)组、5μg/mlMMS分别加葛根素25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的各试验组、5μg/mlMMS+100μg/mlVitC对照组,共6组。按上述分组加入葛根素与MMS处理4h后测定第0d的平板接种效率(PE0)、第3d的平板接种效率(PE3)、细胞悬浮生长率(RSG)和总突变频率(TMF)。结果:100μg/ml葛根素剂量组能显著降低MMS诱导的TK基因突变频率。结论:在本实验条件下,葛根素在较高剂量范围可抑制MMS诱导的TK6细胞TK基因突变,有潜在的开发应用前景。

用TK基因突变试验评价大蒜素的抗诱变性

[目的]用TK6人类淋巴母细胞的TK基因突变试验评价大蒜素的抗诱变性,为大蒜素抗诱变作用及其可能机制的研究提供毒理学依据,并为TK基因突变试验在抗诱变性检测方面的应用及推广积累资料。[方法]设溶剂对照组、5μg/ml MMS组、5μg/ml MMS+大蒜素0.1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml试验组、5μg/ml MMS+100μg/ml VitC对照组。分别采用同时处理和后处理两种方法测定PE0、PE3、RS和TFT。[结果]大蒜素在两种处理条件下均能显著降低MMS诱导的TK基因突变频率,并呈较好的量效关系,两种处理条件的作用强度差异无统计学意义。[结论]在本实验条件下,大蒜素可抑制MMS诱导的TK6细胞TK基因突变,有很好的开发应用前景。

运用TK基因突变试验及小鼠微核试验测定95%乙草胺原药的遗传毒性

[目的]观察95%乙草胺原药的遗传毒性,为其安全使用及农药管理登记提供依据。[方法]建立95%乙草胺原药的致突变试验模型,通过TK基因突变频率和微核率对其遗传毒性进行评价。[结果]95%乙草胺原药各剂量组TK6细胞TK位点突变频率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组比较,95%乙草胺原药染毒组的骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显增高(P>0.05)。[结论]在本试验条件下,95%乙草胺原药无诱导小鼠骨髓细胞染色体损伤及致TK6细胞基因突变的作用。

用TK基因突变试验和彗星试验评价亚硒酸钠的致突变性和抗突变性

目的用TK基因突变试验和彗星试验检测亚硒酸钠(Na2SeO3)的致突变性和抗突变性。方法设阴性对照组、阳性对照组、抗突变对照组,以及致突变试验组和抗突变试验组各5个剂量组,处理L5178Y细胞3 h,按常规方法进行TK基因突变试验和彗星试验。结果 TK基因突变试验中,6.0～24.0μg/ml Na2SeO3致突变试验组的突变频率(MF)显著高于阴性对照组;0.2～1.6μg/ml Na2SeO3抗突变试验组的突变频率低于丝裂霉素C(MMC)阳性对照组。在彗星试验中,3.0～24.0μg/ml Na2SeO3致突变试验组的平均拖尾率和Olive尾距(OTM)显著大于阴性对照组;0.2～1.6μg/ml Na2SeO3抗突变试验组的平均拖尾率和平均OTM值显著低于重铬酸钾(K2Cr2O7)阳性对照组。结论在不同的剂量范围内,亚硒酸钠可表现出一定的致突变作用和抗突变作用。

基于TK基因突变试验评价卷烟烟气的遗传毒性

目的采用TK基因突变试验研究卷烟烟气的遗传毒性。方法以L5178Y tk+/-3. 7. 2C小鼠淋巴瘤细胞为研究对象,3R4F参比卷烟的烟气为受试物,卷烟烟气经DMSO萃取后,设置试验剂量组为20、40、80、100、150μg/m L,另设二甲基亚砜溶剂对照组和环磷酰胺阳性对照组,对L5178Y tk+/-3. 7. 2C小鼠淋巴瘤细胞染毒处理及表达。结果在加S9的情况下,80μg/m L的突变频率是溶剂对照组3倍以上,实验结果呈阳性。结论在此次试验条件下,卷烟烟气具有TK基因致突变作用。

小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验的结果判定

小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验(MLA)是遗传毒性试验标准组合推荐方法之一,在药物非临床安全性评价及其他领域被广泛使用。本文以遗传毒性试验国际工作会议(IWGT)进行MLA国际验证的相关内容为依据,介绍MLA有关背景数据和结果判定的新标准,供国内同行参考,并建议在试验研究中采纳。

用TK基因和HGPRT基因突变试验检测人参皂甙Rg1的抗诱变性

[目的]用TK基因和HGPRT基因突变试验评价人参皂甙Rg1的抗诱变性,为其进一步的开发利用提供资料。[方法]用人参皂甙Rg10.391、3.125、25、200μg/ml与阳性致突变物甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/ml同时处理TK6细胞4h,采用微孔板法检测tk和hgprt两个位点突变频率。[结果]随受试物剂量的增加,人参皂甙Rg1拮抗MMS诱变性的作用增大,表现在tk和hgprt两个位点突变频率均较MMS组降低,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]人参皂甙Rg1具有拮抗MMS诱导的tk基因和hgprt基因突变的作用;TK6细胞可用于TK基因和HGPRT基因突变的同时检测,但TK基因突变试验比HGPRT基因突变试验更为敏感。

用TK基因和HGPRT基因突变试验检测人参皂甙Re的抗诱变性

背景与目的:用TK基因和HGPRT基因突变试验评价人参皂甙Re的抗诱变性,为其进一步的开发利用提供资料。材料与方法:设人参皂甙Re12.5、25、50、100μg/ml分别与致突变物甲基磺酸甲酯(MMS)5μg/ml同时处理TK6细胞的实验组,同时设溶剂对照组(1DMSO),阳性诱变对照组(MMS5μg/ml)和抗诱变阳性对照组(VitC+MMS),各组处理TK细胞4h后,采用微孔板法检测TK和HGPRT两个位点的突变频率。结果:随着剂量的增加,人参皂甙Re拮抗MMS诱变性的作用增大,表现在TK和HGPRT两个位点突变频率均较阳性诱变对照组降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂甙Re具有拮抗MMS诱导的TK基因和HGPRT基因突变的作用;TK基因突变试验比HGPRT基因突变试验更为敏感。

长春花碱和秋水酰胺诱导TK6和TK6-E6细胞TK基因突变比较研究

目的比较TK6和TK6-E6人类淋巴母细胞TK基因突变试验对2种纺锤体毒物——长春花碱(VBL)和秋水酰胺(CCM)检出情况的差异。方法用长春花碱和秋水酰胺处理TK6和TK6-E6细胞24小时,进行常规TK基因突变试验,检测细胞毒性及tk位点突变频率。结果随着长春花碱和秋水酰胺浓度的增加,TK6和TK6-E6细胞的相对存活率(RS%)和相对悬浮生长率(RSG%)均降低。相同剂量下,TK6-E6细胞的RS%和RSG%均比TK6高。长春花碱和秋水酰胺对TK6和TK6-E6细胞均有致突变性,TK6-E6细胞的诱发和自发突变频率高于TK6,而除了突变频率(MF)中CCM5·0ng/ml组和SC%中CCM0·625ng/ml组外,其它相同剂量下,TK6-E6的MF和慢生长集落百分比(SC%)均高于TK6细胞(P<0·05)。结论两种细胞都可用于TK基因突变试验,但由于TK6-E6所用细胞量少,倍增时间较短,故建议使用TK6-E6细胞。

不同焦油释放量卷烟诱导TK基因突变能力的比较研究

目的:研究卷烟烟气冷凝物对TK基因的致突变作用,并比较不同焦油释放量卷烟样品的TK基因致突变能力。方法:以盒标焦油为5、8和11 mg的市售卷烟(分别为1、2和3号样品)烟气冷凝物为受试物,分别以20、40、60、80、100、150μg/mL的卷烟烟气冷凝物对小鼠淋巴瘤细胞L5178Y tk+/-3.7.2C进行染毒处理,以15μL/mL的二甲基亚砜为溶剂对照,3μg/mL的环磷酰胺为阳性对照,处理3 h,细胞洗涤重新接种培养2 d,加入三氟胸苷继续培养12 d后,计数有突变集落生长的孔数,计算各样品剂量组的三氟胸苷抗性突变频率,并比较不同样品的致突变强度。结果:1号样品在剂量为150μg/mL时、2号样品和3号样品在剂量为100μg/mL时,小鼠淋巴瘤细胞三氟胸苷抗性突变频率是溶剂对照组3倍以上,并且随着卷烟烟气冷凝物剂量的增加,三氟胸苷抗性突变频率呈上升趋势,呈现明显的剂量-反应关系,3种卷烟样品的TK基因致突变强度分别为0.37、0.36和0.38。结论:3种卷烟样品的烟气冷凝物均对小鼠淋巴瘤细胞表现出TK基因致突变作用,比较3种样品的致突变强度发现,卷烟烟气的致突变强度与焦油释放量无明显相关关系。

遗传毒性基因突变评价方法的研究进展

基因突变是癌症发生与发展的重要物质基础,也是遗传毒性评价重要的检测终点之一.随着新型药物的涌现以及对药物评价试验要求的不断提高,传统的试验体系也历经了一系列优化.然而,不同的致突变新检测方法对不同检测品种的适用性及其优势和局限不尽相同.本文根据2018年国家食品药品监督管理总局颁布的《药物遗传毒性研究技术指导原则》,就临床前安全性评价领域常用的致突变性检测方法及研究进展进行总结,以期为相关科研及安全评价工作者提供有益借鉴.

烯啶虫胺的致突变性试验

目的:研究烯啶虫胺的致突变性,为其安全生产和使用提供参考依据。方法:采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、Ames试验、中国地鼠肺细胞(CHL)染色体畸变试验和小鼠淋巴瘤细胞L5178YTK基因突变试验检测烯啶虫胺的致突变性。结果:烯啶虫胺未引起骨髓嗜多染红细胞微核率的异常增高(P>0.05);在直接作用或代谢活化条件下,鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102各剂量组回复突变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍;烯啶虫胺各剂量组的CHL细胞染色体畸变率和L5178Y细胞TK基因突变频率,与阴性对照组比较,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:在本试验条件下,未发现烯啶虫胺有致突变性。

长春花碱诱导TK6细胞tk位点杂合性丢失的研究

目的建立用人类淋巴母细胞TK 6检测纺锤体毒物——长春花碱的TK基因突变试验方法,同时探讨长春花碱的遗传毒性分子机理。方法使用长春花碱0.625 ng/mL、1.250 ng/mL、2.500 ng/mL和5.000 ng/mL对TK 6细胞染毒24 h,进行TK基因突变试验。检测细胞相对存活率(RS%)、相对悬浮增长率(RTG%)、tk位点突变频率(M F)和缓慢生长集落的百分比(SC%),同时对突变集落tk位点杂合性丢失(LOH)进行分析。结果随着长春花碱浓度的增加,TK 6细胞的相对存活率和相对悬浮增长率均降低,而tk位点突变频率逐渐增加,且有剂量反应关系。tk位点杂合性分析表明长春花碱诱发的突变集落中有96.4%为LOH丢失,其中半合子LOH为39.3%,纯合子LOH为57.1%。结论长春花碱可诱导TK 6细胞tk基因突变,主要以LOH为主。

体外微核试验与基因突变试验比较

目的通过2种方法检测3种市售染发剂,评价染发剂的遗传毒性并对最终结果进行比较。方法选用小鼠淋巴瘤细胞(L5178Y)为细胞系进行体外微核(MNvit)试验和TK基因突变试验(MLA),MNvit试验经过细胞制片、染色、显微镜观察计数进行结果分析,TK MLA通过计算突变频率(MF)分析受试物是否具有遗传毒性。结果 MNvit试验结果显示,3种染发剂的实验组微核率与阴性对照组比较均有显著性差异(P <0.05),确定MNvit试验为阳性。TK MLA结果显示3种染发剂与对照组比较差异具有显著性(P <0.05)。样品3的MNvit试验结果虽最终判定为阳性,但在活化系统存在时却没有出现阳性结果。结论通过对3种染发剂的检测,无论MNvit试验还是TK MLA,试验判定结果具有高度一致性。TK MLA耗时长,成本高,操作麻烦,可以考虑将MNvit试验作为遗传毒性另一种方法。但3种样品的体内微核试验结果却均为阴性,体外或体内微核试验用于检测染发剂的遗传毒性出现不同结果,有必要进一步探讨遗传毒性的测试组合。

红花水提取物的安全性研究

目的 研究红花水提取物的毒性大小。方法 用红花水煎液进行了急性毒性、小鼠骨髓微核、TK基因突变、体外细胞毒性和Ames试验。结果 红花的LD50 >88 8g/kgBW ,属无毒物 ,对CHO和CHL的IC50 分别为 6 0 7mg/ml和 6 6 5mg/ml(生药终浓度 ) ,遗传毒性试验结果均为阴性 ,2 2 2 0mg/皿剂量的红花对TA98、TA10 0和TA10 2均有明显抑制细菌生长的作用。结论 红花水提取物对正常细胞有一定的毒性 ,但有抑制细菌生长的作用 。

五味子的急性毒性和遗传毒性研究

目的 研究五味子的急性毒性和遗传。 方法 将五味子干燥果实用 80 %的乙醇提取制备其粗提物。用霍恩氏法设 2 .15、4.64、10 .0、2 1.9和 46.4g/kgBW五个剂量组研究五味子乙醇粗提物对昆明种小鼠的急性毒性 ;用2 .5、5 .0和 10 .0 g/kgBW三个剂量组进行了小鼠微核试验 ;用 0 .0 4、0 .12、0 .5 8、2 .3 2、11.5 9和 5 7.97mg/皿六个剂量组进行了Ames试验 ;用 113 .2 8、2 2 6.5 6、45 3 .12和 90 6.2 5 μg/ml四个剂量组进行了TK基因突变试验。 结果 46.4g/kgBW剂量组 10只小鼠 2 4h内全部死亡 ,2 1.9g/kgBW剂量组 2 4h内死亡 8只 ;10 .0g/kgBW剂量组小鼠灌胃后出现精神萎靡、活动量减少 ,行动迟缓 ,无死亡 ;4.64 g/kgBW剂量组仅有活动量减少 ,无其它症状 ;2 .19g/kgBW剂量组无异常表现 ;其LD50 分别为雄 14 .67和雌 19.96g/kgBW。微核试验中各剂量组的雄雌小鼠均未见微核率增加 ;Ames试验中各剂量组均未见回变菌落数增加 ,其中 5 7.97mg/皿剂量组菌落数显著减少 ,五味子乙醇粗提物有明显的抑菌作用 ;TK基因突变试验中各剂量组的突变频率与对照组比较差异均无显著性。 结论 在所选试验和剂量范围内五味子的乙醇粗提物未显示致突变作用。