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应用TK自杀基因治疗骨肉瘤的研究进展
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作者 何新 丁洪忠 +2 位作者 王立民 刘慧丽 郑树刚 《中国现代医生》 2008年第18期113-115,共3页
近年来,人们针对骨肉瘤及其肺转移的基因治疗方面进行了多领域的研究,尤其是在应用自杀基因治疗骨肉瘤方面取得了许多可喜成果,比如替代性前体药物的研究、肿瘤特异性启动子联合自杀基因的研究等。本文就TK自杀基因在骨肉瘤基因治疗中... 近年来,人们针对骨肉瘤及其肺转移的基因治疗方面进行了多领域的研究,尤其是在应用自杀基因治疗骨肉瘤方面取得了许多可喜成果,比如替代性前体药物的研究、肿瘤特异性启动子联合自杀基因的研究等。本文就TK自杀基因在骨肉瘤基因治疗中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 tk自杀基因 基因治疗 骨肉瘤
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TK自杀基因对甲胎蛋白阳性肝癌的特异性杀伤作用 被引量:1
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作者 黄韬 高国栋 陈思远 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期531-533,共3页
目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV tk) /丙氧鸟苷 (GCV )自杀基因系统在体内外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法 在体外按MOI值为 10 0、10、1、0用重组腺病毒转染人肝癌细胞BEL 740 2和SMMC 772 1,48h后用噻唑蓝 (M... 目的 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV tk) /丙氧鸟苷 (GCV )自杀基因系统在体内外对人肝癌细胞的杀伤效应。方法 在体外按MOI值为 10 0、10、1、0用重组腺病毒转染人肝癌细胞BEL 740 2和SMMC 772 1,48h后用噻唑蓝 (MTT)法测定细胞存活率。在两种肝癌裸鼠模型上 ,瘤体内注射重组腺病毒 ( 1× 10 12 pfu/L) 0 .1ml,GCV作用后观察抑瘤效果。 结果 体外MOI为 10 0时 ,可杀死 99.8%的BEL 740 2细胞和 17.8%的SMMC 772 1细胞 ,两者差异有显著性 ( P <0 .0 5 )。体内BEL 740 2组肿瘤生长明显受到抑制。结论 在体内外 ,腺病毒介导的含AFP调控序列的HSV tk/GCV自杀基因系统对甲胎蛋白 (AFP)阳性肝癌细胞具有特异性杀伤作用 ,该系统可望用于肝癌的特异性基因治疗。 展开更多
关键词 肝细胞癌 基因治疗 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 tk自杀基因 HSV-tk基因
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shRNA随机文库结合TK自杀基因筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子
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作者 李建彬 米志强 +8 位作者 安小平 谭莉 陈斌 王晓娜 范华昊 张文慧 张博 方祥 童贻刚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期48-54,共7页
构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进... 构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进行PCR反应,将PCR产物酶切后置于慢病毒载体pLenti-U6启动子下游由此构建shRNA随机文库;利用重叠PCR将HIV-1 LTR片段和TK基因连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系HEK293/TK;将所获得的文库质粒包装成慢病毒后侵染所构建的HEK293/TK细胞系,通过加入药物GCV进行加压筛选获得存活细胞。结果:成功筛选到加药后存活下来的细胞,抽提细胞基因组,采用巢式PCR扩增目的干扰序列并用Western blot对干扰序列进行验证,鉴定获得一个克隆所表达的shRNA能对TK基因的表达起到抑制作用,通过测序分析获得其干扰序列,该序列很有可能针对HIV-1 LTR某宿主相关因子。结论:成功构建了一种筛选HIV-1 LTR相关宿主因子的方法,筛选所得序列可以定位到具体相关宿主因子,为靶向筛选抗HIV-1药物提供了重要手段。 展开更多
关键词 慢病毒载体 shRNA随机文库 人类免疫缺陷病毒(HIV-1) 末端重复序列(LTR) tk自杀基因
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pAdKDR/CD/TK自杀基因系统对大肠癌SW480细胞体外杀伤作用的实验研究 被引量:2
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作者 刘志毅 金虎 +5 位作者 李丹 戴春雷 张红裔 翟春亮 谷洋 刘明 《中国临床研究》 CAS 2011年第2期91-95,共5页
目的研究腺病毒介导的KDR/CD/TK双自杀基因系统对大肠癌SW480细胞的杀伤作用。方法构建pAdKDR/CD/TK重组腺病毒,采用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒感染大肠癌SW480细胞、ECV304细胞及LS174T细胞,再加入不同浓度前药(GCV、5-FC)培养后,... 目的研究腺病毒介导的KDR/CD/TK双自杀基因系统对大肠癌SW480细胞的杀伤作用。方法构建pAdKDR/CD/TK重组腺病毒,采用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒感染大肠癌SW480细胞、ECV304细胞及LS174T细胞,再加入不同浓度前药(GCV、5-FC)培养后,以MTT法检测细胞生长抑制率,观察重组腺病毒联合GCV和5-FC对大肠癌SW480细胞、ECV304细胞和LS174T细胞的杀伤作用,了解前药GCV、5-FC、GCV/5-FC对3种细胞的杀伤作用及KDR启动子的靶向杀伤作用。结果 pAdKDR/CD/TK重组腺病毒对3种细胞具有相似的感染率,感染腺病毒的3种细胞中除LS174T细胞外,均检测到目的基因的表达。当转基因细胞的比率为50%时,SW480和ECV304细胞分别有(31.3±5.64)%、(33.5±5.4)%的存活,而LS174T细胞存活率仍为(98.1±0.95)%(P均<0.01)。单用GCV浓度为80μg/ml时,SW480细胞、ECV304细胞、LS174T细胞的生存率分别为(45.6±6.5)%、(45.9±5.4)%、(99.5±4.7)%,单用5-FC浓度为1000μg/ml时,三者生存率分别为(40.4±5.8)%、(45.3±4.7)%、(97.0±6.2)%,联合用药(80μg/ml+1000μg/ml)时,三者生存率分别为(20.5±0.46)%、(25.6±1.33)%、(97.3±3.96)%。联合用药分别与GCV及5-FC单独用药生存率比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。提示单独应用GCV及5-FC对SW480细胞、ECV304细胞有较强的杀伤作用,联合用药效果更佳。结论含KDR启动子的融合基因,具有选择性杀伤作用。前药GCV、5-FC对转染融合基因的大肠癌SW480细胞具有体外抑制作用,且有较强的旁观者效应。 展开更多
关键词 自杀基因 CD tk 含激酶插入结构域的受体 杀伤作用 旁观者效应 大肠癌
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端粒酶启动子调控tk基因靶向性杀伤鼻咽癌细胞的实验研究 被引量:4
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作者 徐芳 文忠 +3 位作者 邱元正 肖健云 赵素萍 郭梦和 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期695-699,共5页
目的探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应。方法通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的... 目的探讨端粒酶催化亚单位启动子/胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(hTERTp/tk)基因特异载体在体外靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应。方法通过细胞转染将hTERTp/tk转染鼻咽癌细胞株中,采用RT-PCR及MTT法检测hTERTp/tk/pGL3体外特异性杀伤鼻咽癌细胞的效应及其tk基因、端粒酶表达。结果转染hTERTp/tk/pGL3后可见tk基因表达,端粒酶及其hTERT表达较对照组下降。hTERTp/tk/pGL3能特异性杀伤鼻咽癌HNE1细胞,而对正常成纤维细胞无杀伤作用,hTERTp/tk/pGL3杀伤细胞的效应比阳性对照CMV/tk/pGL3的无选择性杀细胞作用略低。结论hTERTp/tk基因特异表达系统具有靶向性杀伤鼻咽癌细胞的作用及抑制肿瘤细胞端粒酶活性。 展开更多
关键词 HTERT启动子 tk自杀基因 鼻咽癌 靶向基因治疗
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携带Egr-1基因调控序列的TK基因的腺病毒载体的构建 被引量:5
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作者 刘金龙 郭仕英 +4 位作者 刘训良 李朝军 杜青 郭治源 夏建国 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期262-264,F0004,共4页
目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack... 目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack/Egr-1;与pET酶切获得TKcDNA相连,构成pAdTrack/Egr-1-TK;用PmeI酶切后与pAdEasy-1混合,应用细菌内同源重组法获得重组表达质粒pAdEgr-1-TK。结果:重组表达质粒pAdEgr-1-TK的酶切鉴定符合预期结果,感染肿瘤细胞可见绿色荧光表达。结论:通过细菌内同源重组成功构建含GFP做标志基因的pAdEgr-1-TK重组表达质粒,为研究Egr-1调控自杀基因及对肿瘤细胞进行灭活打下了基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 EGR-1 tk自杀基因
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突变型自杀基因HSV1-sr39tk真核表达载体的构建与鉴定
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作者 杨宇娟 徐开林 +3 位作者 潘秀英 鹿群先 李振宇 何徐彭 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2006年第2期81-83,共3页
目的克隆突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV1-sr39tk并构建其真核表达载体。方法通过PCR扩增HSV1-sr39tk基因,用BamHⅠ和BglⅡ双酶切纯化的PCR产物,在T4DNA连接酶作用下于室温将其连接于经BamHⅠ单酶切的慢病毒载体转移质粒pTK151上,... 目的克隆突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV1-sr39tk并构建其真核表达载体。方法通过PCR扩增HSV1-sr39tk基因,用BamHⅠ和BglⅡ双酶切纯化的PCR产物,在T4DNA连接酶作用下于室温将其连接于经BamHⅠ单酶切的慢病毒载体转移质粒pTK151上,重组质粒经PstⅠ酶切及测序鉴定。结果阳性重组质粒酶切及测序鉴定与预期结果完全相符。结论成功克隆出突变型自杀基因HSV1-sr39tk,并成功构建其真核表达载体。 展开更多
关键词 突变型自杀基因HSVl-sr39tk 真核表达载体
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以HIV-1 5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型的构建 被引量:1
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作者 李建彬 陈斌 +7 位作者 米志强 安小平 李存 刘大斌 王晓娜 范华昊 方祥 童贻刚 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期96-100,共5页
构建以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,用于体外筛选潜在的对HIV-1启动子具有抑制作用的药物,或用于筛选与HIV-1复制相关的宿主因子。通过PCR扩增HIV-1 5'LTR片段和胸苷激酶基因(thymidine kinase gene... 构建以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,用于体外筛选潜在的对HIV-1启动子具有抑制作用的药物,或用于筛选与HIV-1复制相关的宿主因子。通过PCR扩增HIV-1 5'LTR片段和胸苷激酶基因(thymidine kinase gene,TK基因),以这2片段为模板进行重叠PCR将两者连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系;加入药物更昔洛韦(GCV)检测TK基因的表达。成功构建了HIV-1 5'LTR调控TK基因表达的稳定细胞系,在其培养过程中加入药物更昔洛韦时,细胞逐渐死亡。构建了以HIV-1 5'LTR为靶点的药物筛选细胞模型,该模型利用TK基因作为报告基因方便灵敏,可用于筛选针对HIV-1 5'LTR的潜在抗HIV药物。 展开更多
关键词 HIV LTR tk自杀基因 药物筛选
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The use of suicide gene systems in vascular cells in vitro
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作者 XU LING FEI DE HUA XU +3 位作者 KAI GE, ZHONG CHENG ZHENG LAN YIN SUN XIN YUAN LIU (Shanghai Institute of Biochemistry, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China) 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1998年第1期73-78,共6页
To investigate the efficiency of suicide gene systems on vascular cells, HSV-tk/GCV and EC-CD/5-FC systems were established on vascular endothelial cells in vitro by retroviral transduction. Both modified cell lines w... To investigate the efficiency of suicide gene systems on vascular cells, HSV-tk/GCV and EC-CD/5-FC systems were established on vascular endothelial cells in vitro by retroviral transduction. Both modified cell lines were highly sensitive to prodrugs, the IC50 for GCV was less than 0.4 μM, and IC50 for 5-FC was less than 75 μM,while the parental endothelial cells were insensitive even at the highest concentrations of prodrugs in this experiment. Mixed cellular assay showed that significant bystander effect was exhibited in modified endothelial cells.When only 10% or 30% of the mixed cells were tk positive and exposed to 20 μM GCV for 6 days, more than 60% or 90% of the whole population was killed. Similar result was also found in CD positive cells. These results indicated that both HSV-tk/GCV and EC-CD/5-FC systems could efficiently suppress endothelial cell growth in vitro. 展开更多
关键词 Endothelial cell suicide gene HSV-tk/GCV system EC-CD/5-FC system bystander effect
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