烟草青枯病拮抗菌TBWR 1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。

烟草青枯病发病程度与土壤环境间的响应关系

为探究烟草青枯病发生与土壤生态环境因子间的关系,明确与青枯病发病程度相关的因素,通过田间调查收集青枯病不同发病程度的根际土壤,测定土壤理化指标和酶活性并用16S DNA、内转录间隔区(Internally transcribed spacer, ITS)基因测序技术分析烟株发病与未发病植株根际土壤细菌、真菌群落结构的差异。结果表明,在烟株发生青枯病的根际土壤中,随着烟株发病程度的加重,土壤pH值、有机质含量、总氮含量降低,硝态氮(NO_(3)^(-)-N)含量升高;发病烟株根际土壤真菌群落中镰刀菌属(Fusarium)、毛霉属(Mucor)、Pseudaleuria与细菌群落中肠杆菌属(Enterobacter)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)的相对丰度高于正常烟株根际土壤;通过LEFse及相关性分析发现,柱孢霉菌属(Cylindrocarpon)、毛霉属(Mucor)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)可能是不同青枯病发病程度烟株根际土壤中微生物在属水平产生差异的主要物种;冗余分析(RDA)结果表明,总氮含量、有机质含量可能是影响烟草青枯病发生的关键土壤因子。综上所述,土壤总氮含量、有机质含量与鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、毛霉属(Mucor)微生物相对丰度的降低以及柱孢霉菌属微生物相对丰度的增加是引起烟草青枯病严重发生的关键因素。

烟草青枯病不同发病阶段根际土壤酚酸物质与微生物的关系分析

为探究土壤根际环境因子对烟草青枯病发生的影响,采集田间健康与患青枯病烟株的根际土壤,测定其理化指标和酚酸类物质含量,并采用16S DNA和ITS基因测序技术分析了健康与发病烟株根际土壤细菌及真菌群落结构的差异。结果表明:在发病烟株根际土壤中,碱解氮(AN)、硝态氮(NO-N)和速效钾(AK)的含量显著高于健康烟株根际土壤的;与健康烟株相比,患病烟株根际土壤的细菌多样性降低,丰度减小;土壤真菌毛霉属(Mucor)和Pseudaleuria属的相对丰度在中度发病土壤中增加;香兰素、对香豆酸、阿魏酸、苯甲酸这4种酚酸类物质含量在患病与健康土壤样品间存在显著差异;毛霉属和Pseudaleuria属以及鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)均与根际土壤对香豆酸、阿魏酸、苯甲酸含量呈正相关。综上所述,土壤香豆酸、阿魏酸、苯甲酸含量的变化,细菌鞘氨醇单胞菌属相对丰度的降低,以及真菌毛霉属和Pseudaleuria属相对丰度的增加是导致烟草青枯病发生程度加重的关键因素。

一株烟草青枯菌拮抗细菌的筛选及鉴定

利用不同地点采集发病烟苗根围土样的方法,从重庆黔江烟草地共采集了土样31份,经分离纯化获得一株对供试致病烟草青枯菌有较强抑制作用的拮抗菌株swu31-2,通过其形态特征,生理生化试验和16S rDNA序列的测定,初步判定属于铜绿假单胞菌.

烟草青枯病病原菌的分离及其拮抗菌的筛选

从福建烟田的病株中分离出烟草青枯病病原菌，从其原位土壤中经过分离纯化得到40种土壤菌株，经过平板拮抗法筛选后，得到对青枯病菌有明显抑制作用的5株土壤细菌，分别命名为T1、T2、T3、T4和T5，其中，菌株T5的拮抗带最大，菌落拮抗带达10．2～21．4mm.

烟草青枯病拮抗内生细菌的分离、鉴定及其田间防效

从病区健康烟草植株茎杆内分离到一株对烟草青枯罗尔氏菌（Ralstonia Solarbocarum）有强拮抗作用的内生细菌，命名为B-001菌株．拮抗性研究表明，B-001菌株对多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌以及病原真菌均有较强的抑制作用．形态和生理生化特征初步表明菌株B-001为芽孢杆菌属（Bacillus）细菌．经扩增、测序得到B-001的16S rDNA序列，GenBank接收号为DQ444283．用ClustalX进行多重序列对比，并通过MEGA3方法构建16SrDNA系统发育树，表明：菌株B-001与Bacillus subtilis（DQ415893）的相似性为99．2％，并处于同一分支；结合形态和生理生化指标，将其鉴定为枯草芽孢杆菌（B．subtilis）．2005和2006年在湖南省桂阳县、宁乡县进行了田间试验，防效在40．03％-78．14％，防治效果良好，且明显优于农用链霉素．

烟草青枯病拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

【目的】从不同烟区健康烟草的根际土壤样品中筛选对烟草青枯病具有较强拮抗作用的芽孢杆菌,为防治烟草青枯病提供生防资源。【方法】随机从福建龙岩、四川德昌、陕西汉中等地健康烟草根际土壤中采集30份土壤样品,采用平板稀释法从中分离芽孢杆菌,以烟草青枯病菌为靶标菌筛选拮抗芽孢杆菌,并通过培养特性、菌体形态、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,对筛选的拮抗芽孢杆菌菌株进行鉴定;采用温室盆栽试验,测定拮抗芽孢杆菌的促生作用、定殖能力和抑菌活性。【结果】从健康烟草根际土壤中分离得到1株抗烟草青枯病菌活性较好的菌株LW-4,经鉴定其为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。LW-4菌悬液对烟草青枯病菌的防治效果为70.37%,其可定殖于烟草根际土壤,具有良好的定殖能力。LW-4对烟草有明显的促生作用;用饱和度为25%的硫酸铵获得的LW-4抑菌物质对烟草青枯病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达37.82mm。【结论】菌株LW-4在烟草青枯病防治中具有潜在的利用价值。

利用嫁接技术防治烟草青枯病试验研究

以抗青枯病烟草品种反帝3号、Oxord940、D101、K346、Coker176为砧木,以品质优但抗性差的云烟87为接穗,进行烟草嫁接苗对青枯病防治效果试验。结果表明,烟草嫁接苗在生育期、农艺性状和外观质量等方面与对照非嫁接烟苗基本一致,但对细菌性青枯病的抗病力则大大增强,各处理对烟草青枯病的防治效果分别达到73.73%、69.50%、73.97%、67.49%和68.35%,其中以反帝3号和D101为砧木的嫁接烟苗防效最高,各处理间防效差异不显著。研究结果为烟草青枯病防治开辟了一条新途径。

一株烟草青枯拮抗细菌的筛选、鉴定和培养特性研究

为烟草生物肥料的研制和生产提供优良菌株资源,筛选可有效拮抗烟草青枯病原菌的菌株,优化其培养条件,确定其分类地位。采用抑菌圈测定法从高粱根际土中筛选烟草青枯拮抗菌株,并对其单因素液体拮抗条件进行优化,通过其表型特征、生理生化特征和遗传特征等多相分析来确定其分类地位。获得一株对烟草青枯病原菌具有较好拮抗效果的细菌MT-002-B-7,抑菌圈直径可以达到28.67 mm,该菌的液体最佳发酵条件为以葡萄糖为碳源,以谷氨酸为氮源,装液量10%,培养基初始p H值为7.0,接种量3%,温度35℃,转速150 r/min,培养25 h。鉴定结果表明该菌为铜绿假单胞菌。该菌株对烟草青枯病原菌拮抗效果良好,可作为研制烟草生物肥料的菌株资源。

烟草青枯病菌拮抗菌的筛选、鉴定及生防特性研究

烟草青枯病危害严重, 以拮抗菌进行防病的生物防治手段成为研究热点。从不同烟田分离纯化出238株细菌菌株, 首先经牙签接种初筛, 选取对青枯病菌抑制效果较好的菌株制备其抑菌物质的粗提物, 以牛津杯法复筛, 最终获得3株对烟草青枯病菌有明显抑制作用的拮抗细菌。全细胞脂肪酸、16S rDNA及gyrB基因测序等分析结果表明, 菌株H19、Y6为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）, 菌株H34为甲基营养型芽孢杆菌（B.methylotrophicus）。3株拮抗菌经CAS检测平板法和Salkowski比色法, 发现均具有产铁载体和吲哚-3-乙酸（IAA）的能力, 以菌株H19能力最强。温室促生试验结果表明, 3株拮抗菌能显著促进烟草株高、鲜重及干重等指标, 与对照相比, 平均增长率分别达到70%~115%、40%~49%和32%~42%。温室控病试验结果表明, 菌株H19、H34和Y6明显降低烟草青枯病的发病率, 防效达76.57%、60.98%和69.83%, 稍逊于农用链霉素处理的78.66%。

湖南烟草青枯病土壤拮抗菌的筛选

在室内对来自湖南嘉禾、郴县、永州、永兴、桂阳和湘西等 2 3个烟区青枯病发病较轻的烟地根际土壤进行细菌分离 ,获得 317个菌株 .测定了这些菌株对青枯菌拮抗性 ,筛选出有明显抑菌作用的菌株 4 8个 ,其中最有效的拮抗菌株 10个 .对该 10个菌株相互之间的拮抗性测定结果表明 ,有 6个菌株相互之间无拮抗作用 ,可在烟草青枯病的生物防治中应用 .

烟草青枯病拮抗菌培养条件的研究

为了开发有效防治烟草青枯病的生物有机肥，对与烟草青枯病拮抗效果较好的3株拮抗菌T3，T4，T5进行了培养条件研究，结果表明，3种菌最适培养条件为35℃，pH7．5，振荡培养28h时产菌量最多，4-28h为对数生长期。同时考察了拮抗菌利用堆肥生长的情况，3种菌均可利用堆肥生长，随着堆肥量的增多，生长量增加，如果同时适当增加培养基中的碳氮比，菌的生长更好。

湖南烟草青枯病菌的致病性及生物型研究

从湖南省１２个县、市采集分离烟草青枯病菌菌株５６个．根据其致病性测定结果分为强、中、弱３个类群，分别占４６．４％，１６．１％和３７．５％．大多数调查地点强、弱致病类群并存．对其中５１个菌株进行生理生化测定，根据其对乳糖、麦芽糖、纤维二糖和甘露醇、山梨醇、卫茅醇的利用能力以及对硝酸盐的还原作用，判定其生物型分别属于生物型Ⅲ，Ⅲ－１，Ⅲ－２，Ⅲ－３，Ⅲ－４．

宜宾市抗青枯病烤烟品种筛选及根系土壤病原菌变化动态研究

研究了宜宾市各烤烟品种在田间小气候环境中的青枯病感病动态规律,得出了烤烟品种OX-2028是高抗青枯病的品种,云烟85、云烟203、云烟97、云烟87属有一定抗性的品种,而OX-2001、红花大金元、NCRT69属感青枯病的品种,可作为生产上预测青枯病发生的指示品种;并且绘制了各品种根系土壤青枯病原菌的动态变化曲线图,分析了温湿度对发病的影响,为制定各品种青枯病的预测预报和制定有效的用药保护措施提供了科学依据。

豫南烟区烟草青枯病危害调查及病原鉴定

2014年从豫南烟区信阳市罗山县、驻马店市确山县和遂平县共采集25个疑似青枯病烟草病样和10份病土,分离纯化出菌株26个,测序所得的序列与NCBI数据库中的Ralstonia solanacearum基因组序列进行Blast比对,相似度达到98%以上,对分离鉴定得到的烟草青枯病菌进行回接试验,表现出典型的青枯病症状,发病组织在TTC培养基上也同样分离得到典型的青枯菌菌落,证实病原为烟草青枯病病原。由此表明,豫南烟区确有烟草青枯病的发生。

烟草青枯病颉颃细菌的筛选及其防病效果研究

从安徽、浙江等地的烟草、蕃茄和辣椒等茄科作物根标、根围土壤和病、健植株组织中，分离纯化到１６８个细菌菌株，通过室内异步培养法和平板扩散法，筛选出１７个对烟草青枯病菌具有一定颉颃作用的菌株，其中，ＡＱＢ—４６和ＡＱＢ一３３两菌株抑菌能力最强，抑菌圈直径分别为３３．７ｍｍ和３０．６ｍｍ。盆栽防病结果表明，这２个菌株对青枯病的防治效果在接种青枯菌后的３０ｄ内一直维持在５４．２％６４．７％。菌株ＡＱＢ－６２室内抑菌试验效果明显低于ＡＱＢ－４６和ＡＱＢ一３３，但盆栽防病的效果在接种后的２０ｄ内也一直维持在４９．９％５３．０％的水平。接种前３ｄ喷施颉颃菌的各处理，其防病效果远高于接种后３ｄ喷施颉颃菌的各处理，前者防效最高为６４．７％，而后者最高仅为１５．０％，说明颉颃菌对烟草青枯病的防治主要表现为预防。此外，颉颃菌的防病作用主要表现为减轻发病程度，而对发病率没有影响。颉颃菌除具有直接的抑制青枯菌定殖、繁衍、扩展外，有的菌株如ＡＱＢ—６２还具有一定的诱导抗性作用。ＡＱＢ－４６，ＡＱＢ－３３和ＡＱＢ－６２等３个菌株可望研制成生物农药，使之更有效地防治烟草青枯病。

青枯菌拮抗菌2-Q-9的分子鉴定及抑菌相关基因的克隆

通过16SrDNA碱基序列的测定和同源性分析,鉴定青枯菌拮抗菌2-Q-9与桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)亲缘关系最近,其16SrDNA序列提交GenBank,登录号为FJ613127.根据已测得的该拮抗菌外泌抗菌肽氨基酸序列中的一段设计简并引物,利用染色体步移法得到全长序列780bp,经测序和BLAST比对分析表明,该基因属于CodY家族,与已鉴定的转录因子抑制剂CodY(ZP_01171531)的同源性最高;表现在氨基酸水平的相似性为77%,其序列全长已提交GenBank,登录号为FJ613128.

湖南烟草青枯病初侵染来源研究

从湖南各烟区共采集烟田土壤样本 2 82份 ,烟苗根围土壤及根组织样本各 4 58份 ,经分离鉴定 ,其带菌率分别为 2 .9% ,2 .3%和 1.5% .在烟田土壤、烟苗根围土壤及烟苗根组织中存活的病菌均可作为烟草青枯病大田发病的初次侵染源 .病田土壤带菌是本病发生的主要初侵染源 .以大田土壤带菌为初侵染源的烟田发病呈聚集型分布 ,以烟苗带菌为初侵染源的烟田发病呈分散型分布 .

烟草青枯病拮抗菌室内抑菌活性研究

为了筛选适合安徽优质烟区且对烟草青枯病更具拮抗抑菌活性作用的拮抗菌,采用光密度法和平板计数法分别测定了3种烟草青枯病拮抗菌发酵液的拮抗抑菌效应和影响因子进行研究。结果表明:3种拮抗菌均具有较好的拮抗活性。5,10,20,40,80倍5个浓度梯度的3种拮抗菌都比对照(CK)的光密度值(OD)高,均高于57个百分点以上,且达到了显著水平;且拮抗抑菌顺序依次为AKJK-2013-02>AKJK-2013-13>AKJK-2013-11。3种拮抗菌均能在开始生长时就能分泌抗菌物质,且拮抗抑菌活性与发酵时间呈成正相关;3种拮抗菌的拮抗抑菌活性都随着存放时间的增加而减弱,且均在存放28 d后的拮抗抑菌活性还能达到83.5%以上。因此,3种烟草青枯病拮抗菌具有一定的开发价值和应用前景。

烟草青枯菌拮抗放线菌和细菌的田间试验

从健康烟草根围土壤中分离、筛选得到对烟草青枯病菌拮抗效果较好的放线菌和细菌。经鉴定两株拮抗放线菌均属链霉菌属(Streptomyces),分别是绿色类群橄榄绿链霉菌(S.olivaceoviridis)、粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌(S.roseofulvus);拮抗细菌分别为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sphaericu)。在贵州省麻江县烟田进行田间试验,3次平均相对防效从大到小依次为粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌(63.65%)、球形赖氨酸芽孢杆菌(60.03%)、蜡样芽孢杆菌(43.85%)、绿色类群橄榄绿链霉菌(41.76%)、40%硫酸链霉素(17.11%)。