普通烟草外向整流Shaker K^(+)通道NtSKOR1的组织表达分析

外向整流Shaker K^(+)通道SKOR(Stelar K^(+)outward rectifier)是一类定位于植物根部中柱细胞质膜的外向整流Shaker K^(+)通道。为探究普通烟草NtSKOR1的启动子活性和不同时期组织表达情况,克隆该基因上游2439 bp的启动子序列,创制启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的烟草材料并进行组织化学染色,通过RT-qPCR验证该基因的表达。结果表明NtSKOR1启动子含有光响应、逆境胁迫和激素等相关的顺式作用元件;转ProNtSKOR1::GUS烟草的组织化学染色试验表明:萌发期至子叶展平期未检测到GUS活性;小十字期,在真叶叶脉和茎尖分生组织开始检测到GUS活性;生根期,除茎和叶脉的维管组织外,在根部维管组织也开始检测到明显GUS活性,且活性随烟株生长而逐渐增强;盛花期,主要在烟草的根、茎和叶脉维管组织检测到活性,且上部叶叶脉中的GUS活性高于下部叶叶脉。RT-qPCR与GUS活性检测结果基本一致。综上可知,NtSKOR1主要在烟草小十字期及后续发育阶段的根、茎、叶的维管组织中表达,烟草进入盛花期后,该基因在光合作用较强的上部叶中的表达高于下部叶,推测该基因可能参与烟草K^(+)转运和同化产物协同运输。

基于改进YOLO v4的轻量化烟梗识别方法

为完成烟叶精选工艺流程中打叶复烤后破碎烟叶的进一步去梗,实现破碎烟叶中烟梗的自动化检测,文章提出基于改进YOLO v4的轻量化烟梗识别方法。在YOLO v4基础模型上先后进行通道剪枝和层剪枝,大幅简化模型结构,改进后模型存储空间下降了93.77%,模型平均精度均值(mean average precision,mAP)和前向运算时间与基础模型持平。与同类别算法相比,模型精度平均提升8.7%,模型参数量大幅缩减。实验结果表明该实验剪枝模型更具轻量化,识别效果更好,能够满足实际生产需求。

打顶对烤烟植株钾素代谢和钾离子通道基因表达的影响

【目的】定量检测打顶对烟株钾离子通道基因表达的影响,为从分子水平上研究打顶对烟草钾素营养调控机理提供理论依据。【方法】在盆栽基质培养条件下,利用实时荧光定量PCR技术检测了打顶后(1h、5h、24h和14d)烟株钾离子通道基因表达的变化,并通过酶联免疫法分析烟株内源激素的含量。【结果】与不打顶处理比较,打顶能够降低整株钾累积量,有利于钾素向叶和根中分配;能够抑制NKT1和NTORK1基因在叶中表达,诱导其在根中表达。NKT1叶中表达量高于根,NTORK1在打顶后24h内叶中表达量高于根,打顶后14d根中表达量高于叶。根中钾离子通道基因表达是调控根系钾素累积和决定地上部K+浓度的关键。打顶有利于K+从根系细胞质膜中流出,导致由根系向地上部运输的K+减少,从而使烟叶中钾累积量降低。打顶对钾离子通道基因表达的调控作用与烟株内源激素水平变化有关,打顶后叶中IAA含量降低,根中IAA含量增加,其中14d时根中IAA比不打顶处理增加了140.7%。【结论】打顶后烟株内源激素水平变化可能是调控钾离子通道基因表达的主要原因,而钾离子通道基因表达的变化直接影响着烟株体内钾素累积和分配。

烟草钾离子通道研究进展

K+通道是烟草吸收K+的重要途径之一。近年来,已从多种植物或同种植物的不同组织器官中分离到多种K+通道基因。笔者从K+通道基因类型、K+通道基因的克隆与功能、K+吸收机制和K+通道分子调控技术等方面综述了烟草K+通道研究现状与进展。对应用生物工程技术改良烟草的钾营养性状进行了讨论,并对利用现代生物技术手段提高烟叶含钾量进行了展望。

烟草钾离子通道基因NtTPK的克隆及表达分析

采用同源克隆的方法对烟草品种K326中的一个钾离子通道基因NtTPK进行了研究,该基因序列全长1 317 bp,编码438个氨基酸。实时荧光定量PCR结果表明,该基因在茎中的表达量最高;在低钾处理24 h后该基因表达量最低;200 mmol·L^(-1)NaCl处理24 h后该基因表达量最高;在烟草打顶7 d后,该基因在叶和根中的表达量达到最高。这些结果为进一步研究该基因的功能提供了一定理论基础。

烟草钾离子通道及转基因烟草抗逆性的研究进展

钾离子通道蛋白是烟株吸收土壤中钾离子的重要通道蛋白,能明显改善烟草的品质和提高烟株的抗逆性,因此研究转钾离子通道基因烟草具有广阔的应用前景。采用载体介导法和DNA直接摄取法等向烟草中导入高效吸收积累型钾离子通道基因,烟株的吸钾量明显增加,而且烟株的抗逆性也显著增强,因此转钾离子通道等相关抗逆基因已经成为改良烟草抗逆境胁迫的新途径。笔者对烟草钾离子通道、转化方法以及烟草转相关抗逆基因的研究现状及进展进行综述,为建立烟草钾高效和抗逆体系提供参考。

烟草NtKAT3基因克隆、序列和表达分析

钾离子通道对植物体具有重要的生理功能,利用同源克隆的策略从烟草品种K326中获得一个钾离子通道基因,该基因全长1 989 bp,蛋白编码662个氨基酸,分子量75.6 ku,等电点7.2。同源性分析结果显示,该基因与绒毛烟草钾离子通道基因KAT3、林烟草钾离子通道基因KAT3等具有较高的同源性,所以命名为NtKAT3。根据生物信息学分析,NtKAT3具有5个跨膜区,是一个疏水蛋白。基因表达分析表明,NtKAT3在根中的表达量最高,其次是叶、茎和花;烟草幼苗在低钾处理后NtKAT3的表达量先升高后降低,NtKAT3的表达量在12 h时达到最高值,在48 h达到最低值;200 mmol·L^(-1)NaCl处理后,NtKAT3基因表达量在6 h达到最低值,24 h达到最高值,说明该基因表达量受到低钾和盐胁迫诱导。

烟草钾离子通道基因NKT5的克隆和序列分析

本研究运用已经获得的1条490bp的普通烟草钾离子(K^+)通道基因的中间片段来设计特异性引物,应用RACE方法获得其3'和5'末端cDNA序列。通过三段cDNA序列拼接结合全长克隆测序验证,获得一个未报道的普通烟草K^+通道基因,并将其命名为NKT5(NCBI登录号为HM010922)。NKT5的cDNA全长为2365bp,其中5'端非编码区190bp、3'端非编码区249bp、编码区1926bp,编码641AA。对该基因进行了序列分析及功能预测,为进一步阐明其在烟草吸钾及抗逆过程中的功能及分子机制奠定了基础。

烟草根皮层原生质体质膜钾通道的特性研究(英文)

采用膜片钳技术对烟草根皮层原生质体质膜上的钾通道进行全细胞记录,从而深入研究烟草K+的吸收机制和调控机理。结果表明,内向钾通道在膜电压低于-40 mV时,可以被K+激活。内向电流可以被钾通道的专一抑制剂TEA+抑制。动力学分析表明内向钾电流产生的K+表观解离常数(Km)≈15.2 mm o l/L,类似于低亲和性钾通道。该通道具有依赖于胞外K+浓度的特性,对胞外NH4+、C a2+、M g2+浓度变化反应敏感,内向K+电流可被不同程度地抑制。

影响烟草香味的主要次生代谢途径及其研究进展

介绍了影响烟草香味的3条次生代谢途径,阐述了代谢频道和基因工程对次生代谢的调控及目前用基因工程来提高烟草次生物质含量的研究进展,并对利用代谢工程对烟草香气品质改良的可能途径和应用前景进行展望。

不同离子对烟草根皮层细胞质膜内向K^＋通道的影响

以烟草(Nivotiana tobacum L.)为材料,利用膜片钳技术分析钙、钠、钾、锂4种离子对根皮层细胞质膜上内向钾通道的影响.结果表明,烟草根皮层细胞质膜上的内向钾通道对Na^+,Li^+敏感,并可被其抑制.且当胞外溶液中的K^+完全被Na^+和Li^+取代时,没有出现明显的内向电流.表明内向型钾通道对Na^+/K^+和Li^+/K^+具有极高的选择透性.当电压达到-170 mV时,同时增大胞外K^+浓度,由Ca^(2+)(7 mmol·L^(-1))处理的细胞质膜上内向钾通道的电流增加,而Mg^(2+)(25 mmol·L^(-1))处理的细胞质膜上内向钾通道的电流下降.暗示钙和镁虽属同族元素,且结构近似,但对烟草根皮层质膜上的内向钾通道在超级化作用下具有不同的作用机制.

植烟土壤中16种多环芳烃的洗脱净化技术及含量测定

为测定植烟土壤中16种多环芳烃(PAHs)的含量,建立并优化了土壤样品的洗脱净化方法,比较了不同洗脱剂、净化方法及净化条件的提取效果。结果表明,3种洗脱剂中正己烷-二氯甲烷混合液(体积比1∶1)洗脱效果最好,四通道色谱分离仪法在提取效果、溶剂耗量、操作时间上均优于硅胶柱法。在最佳操作条件下(洗脱剂用量2 m L/次、洗脱时间50 s/次)洗脱5次后采用气相色谱—质谱联用仪对16种PAHs进行检测,16种PAHs均在20~2 000μg/L内呈线性关系(R>0.99),仪器检出限为0.72~2.09μg/L,植烟土壤中16种PAHs的加标回收率为80.3%~114.4%,相对标准偏差为4.2%~12.3%。该方法简便、高效,能准确测定出植烟土壤中16种PAHs的含量。

高氯土壤条件下烤烟对Cl~–通道抑制剂的生理响应

【目的】在我国部分烟区,土壤氯离子含量高是造成烟叶氯离子含量高的一个主要因素,困扰着当地优质烟草的生产。研究氯离子通道抑制剂对烤烟成熟期叶片生理指标的影响,可为生产中合理降氯提供一定的参考。【方法】2015年在河南科技大学采用盆栽土培试验,设置四个处理,分别为200μmol/L NFA、200μmol/L9-AC、200μmol/L Zn2+和蒸馏水,土壤含氯量为50 mg/kg。于移栽后30、45、60、75 d灌根,每个处理每次每盆灌1 L,连灌3天。测定了成熟期烤烟中部功能叶片中的CLC-Nt2基因表达强度、光合色素含量、叶绿素荧光参数、相关元素积累量以及烟株生物量。【结果】1)与对照相比,施用抑制剂Zn2+、NFA、9-AC的烟株叶片中CLC-Nt2的表达量显著降低,分别为对照的82.22%、75.39%、72.19%,但3组抑制剂处理之间无显著差异。2)Zn2+、NFA、9-AC处理的叶片叶绿素总含量较对照分别增加20.15%、29.10%、45.52%,差异达到显著水平。同时,经不同抑制剂处理的叶片叶绿素荧光特性也表现出不同程度的增加,表明抑制剂可以减缓氯含量对烤烟PSⅡ光合机构的伤害。3)抑制剂对烤烟叶片中Cl–、K+、NO3–的积累有明显影响。与对照相比,抑制剂处理的3组叶片中Cl–含量显著降低,降幅在18.17%~33.48%;K+含量和NO3–含量明显提高,增幅分别为5.28%~10.20%和12.19%~25.24%,其中以9-AC处理的效果最佳。4)抑制剂对烤烟生物量的合成有促进作用。与对照相比,施用抑制剂后烟株叶、茎、总干重显著提高,增幅分别为17.02%~32.45%、10.54%~20.66%和13.21%~25.50%;而根干重增加幅度较小,仅为5.94%~11.43%,根冠比显著降低。抑制剂的作用效果表现为9-AC>NFA>Zn2+>CK。【结论】当植烟土壤中氯离子含量较高时,外施氯离子通道抑制剂能够对烤烟植株生长及体内一系列生理活动产生积极作用,在一定程度上缓解了氯害对烟草的不利影响。在本试验条件下,施用200μmol/L 9-AC的烟株整体表现最优,而施用200μmol/L Zn2+的处理在基本满足降低叶片氯离子含量的同时降低了生产成本,这为生产中合理降氯提供了一定的参考。

高等植物钾转运蛋白

钾在植物生长发育过程中具有许多重要的作用。以模式植物拟南芥中克隆和鉴定的钾通道和转运体为基础,全面介绍了高等植物中钾转运体系家族,包括Shaker通道、KCO通道、KUP/HAK/KT转运体、HKT转运体和其它转运体。同时,分析了在高等植物中存在多种钾吸收和转运机制的可能原因。

烟草行业会员制营销模式研究

会员制营销是基于以顾客服务为中心的理念形成的一种营销模式,它的核心思想包括培育顾客忠诚度,改进客户关系管理以及提供个性化的高附加值服务。我国现有的烟草营销模式存在营销链条不完整,缺乏系统的营销规划,目标市场不明确,市场信息不对称等一系列问题。会员制营销模式在烟草营销中的运用有利于辨识不同客户的商业价值,维护零售客户的品牌忠诚度,稳定市场占有率,获得持续收益,建立市场拉动型的烟草流通渠道。

烟草电压依赖阴离子通道NtVDAC1.1的电子克隆及生物信息学分析

为研究电压依赖阴离子通道（VDAC）基因在烟草根系分泌有机酸的作用,进而为了解该基因的功能和应用提供基础,以拟南芥At VDAC1（NM_110994）为搜索序列,应用电子克隆技术得到一条烟草VDAC基因全长c DNA,命名为Nt VDAC1.1。生物信息学分析表明该基因全长为1 018 bp,有着完整的开放阅读框,编码276个氨基酸。进化关系及同源性分析表明,Nt VDAC1.1与其他物种的VDAC有着较高的相似性,其中与茄科植物马铃薯三个膜孔蛋白有着很高的一致性（0.768-0.902）。功能分析显示,Nt VDAC1.1为膜孔蛋白,参与了阴离子的转运、阴离子转运调节和跨膜运输。二级和四级结构分析均表明,Nt VDAC1.1含有α-螺旋和β-折叠。氨基酸位点分析表明,该蛋白具有多种类型的修饰位点,其中的磷酸化位点说明该基因与信号转导有关,对阴离子通道活性具有调节作用。

产品替代性对烟草在线销售的影响

以烟草企业为背景,构建含有两个制造商,一个零售商的双渠道模型,运用Stackelberg博弈和纳什均衡分析不同渠道组合下博弈双方的均衡价格策略和利润情况,探究烟草制造商开拓网络销售渠道的必要性和优劣所在。结论表明:含有网络销售的双渠道结构对烟草制造商来说并不是最佳策略,产品之间的替代性对制造商开设网络渠道获取的利润以及我国控烟效果有重大的影响。

基于模糊综合评价法的烟田水利设施经济评价

介绍了模糊综合评价法应用于烟田排洪渠工程经济评价中的基本步骤,并在模糊综合评价中就各影响因子进行了定量分析.采用专家投票的方法建立模糊关系矩阵,运用模糊合成算子得出评价结果.通过对影响因子按其属性及评价目标进行了分类,可以更好地反映各因子之间的关系.结果显示模糊综合评价法在烟田排洪渠工程经济评价中产生了良好的效果.

卷烟配送渠道分销酒类产品的对策研究

本文针对卷烟销售配送渠道存在的问题,分析对比了卷烟分销渠道和酒类产品(以啤酒为例)分销渠道的现状和特点,研究使用卷烟分销渠道行销酒类产品的可行性,进一步分析了存在的问题并给出相应的解决方案。

不同烤烟基因型钾离子通道特性研究

通过对4个不同钾营养效率的烤烟品种的根皮层细胞质膜内向跨膜钾电流进行全细胞记录,研究钾营养效率不同的烤烟基因型的钾离子通道的特性。结果表明,NC89的电流密度(pA/pF)最高,约为-80;其次是农大202及净叶黄,其电流密度分别为-60及-50;NC2326的电流密度在四个基因型中最小,大约-40。结果表明,烤烟根皮层细胞质膜跨膜内向钾电流的大小,与基因型对K+亲和力及吸收能力的大小,以及烤烟基因型钾营养效率高低有着密切的关系,可以作为一个比较可靠的参考鉴定指标,指导K+营养高效的基因型的筛选与鉴定。