烟叶米根霉检测、碳源代谢表型及其对7种杀菌剂的敏感性

采用组织分离法检测了烘烤烟叶霉烂病病原菌米根霉Rhizopus oryzae,采用Biolog FF代谢板分析了其碳源代谢表型特征,并测定了其对7种杀菌剂(多菌灵、异菌脲、咪鲜胺、氟硅唑、丙环唑、苯醚甲环唑和嘧菌酯)的敏感性。结果表明:米根霉在田间烟叶、编烟杆和编烟绳上的检出率均为100%。米根霉能代谢和产孢的碳源分别有66和30种,主要包括核糖醇、D-阿拉伯醇和β-环式糊精等;不能代谢和产孢的碳源分别有29和65种,包括a-环式糊精、L-海藻糖和D-半乳糖醛酸等。7种杀菌剂对烟草米根霉的菌丝生长均表现出不同的抑制作用,抑菌活性最强的是氟硅唑和苯醚甲环唑,其EC50值分别为8.31和9.71mg/L;其次为丙环唑、异菌脲和咪鲜胺,其EC50值分别为14.24、32.84及>10mg/L;最弱的为嘧菌酯和多菌灵,其EC50值均>100mg/L。研究结果可为烘烤烟叶霉烂病化学防治提供参考和依据。

烟草米根霉对6种杀菌剂的敏感性及菌株保存条件筛选

采用孢子萌发法测定了烟草上米根霉Rhizopus oryzae对6种杀菌剂(代森锰锌、多菌灵、嘧霉胺、嘧菌酯、啶酰菌胺及氟啶胺)的敏感性,并就其适宜的保存条件进行了筛选,同时采用离体叶片法测定了上述6种杀菌剂对烟叶霉烂病的防治效果。结果表明:6种杀菌剂对米根霉孢子萌发和烟叶霉烂病均表现出了不同的抑制活性。其中,抑制孢子萌发活性最为明显的是氟啶胺和啶酰菌胺,其EC90值分别为0.67和1.53 mg/L;其次为代森锰锌和嘧菌酯,15.16和17.66 mg/L;最弱为嘧霉胺和多菌灵,71.87和81.96 mg/L。对烟叶霉烂病防效最好的为嘧菌酯,50 mg/L处理的防效为85%;其次为啶酰菌胺,200 mg/L处理时防效为83%;氟啶胺的防效较差,1 000 mg/L处理时仅为48%;而代森锰锌、多菌灵和嘧霉胺在最高使用剂量(分别为4 000、800和800 mg/L)时防效均低于20%。病原菌保存方法筛选结果表明,保存后米根霉的孢子萌发率均发生了不同程度降低。其中,4℃保存于20%甘油组的孢子悬浮液萌发率为60%;4℃保存的孢子干样萌发率为36%;4℃保存的孢子悬浮液和–20℃保存于20%甘油的孢子悬浮液萌发率均低于20%;20℃保存的孢子干样萌发率为11%;–20℃保存的孢子悬浮液萌发率为6%。研究结果可为烘烤期烟叶霉烂病防治和米根霉孢子的保存提供参考依据。

烤后不同霉变程度烟叶际真菌群落组成与多样性分析

【目的】为了解烤后不同霉变程度烟叶真菌群落组成与多样性。【方法】基于IlluminaMiSeq高通量测序平台对烤后烟叶叶柄和叶片叶际样品的真菌群落组成进行了分析。【结果】霉变重烟叶叶片(BQ)、霉变重烟叶叶柄(BZ)、霉变轻烟叶叶片(JQ)、霉变轻烟叶叶柄(JZ) 4类样品真菌分布于子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、接合菌门(Zygomycota)等7个菌门、27个纲、58个目、104个科、171个属的360个真菌分类单元(OTUs)。不同霉变程度烟叶叶际真菌群落组成、分类单元的相对丰度及优势分类单元皆存在不同程度差异。在属的水平上,霉变重烟叶叶片(BQ)的优势菌属为Aspergillus (89.64%)、Myrothecium (2.54%)、Rhodotorula (2.48%)、Gibberella (1.49%);霉变重烟叶叶柄(BZ)的优势菌属为Aspergillus(96.93%)和Alternaria(1.92%);霉变轻烟叶叶片(JQ)的优势菌属为Aspergillus(40.13%)、Rhodotorula(31.81%)、Alternaria(16.75%);霉变轻烟叶叶柄(JZ)的优势菌属为Aspergillus (62.77%)、Alternaria (9.74%)、Rhodotorula (5.20%)。【结论】霉变轻烟叶叶片样品真菌群落的多样性最高,霉变轻烟叶叶柄的真菌群落丰富度最高。霉变重烟叶样品的叶片部位的真菌群落丰富度和多样性均高于叶柄。烟叶霉烂为烤房常见病害,其病原真菌种类多样,且广泛分布于烟叶和环境中。该研究结果为烤房烟叶霉烂病的防治可根据不同发病程度的不同部位的真菌群落构成特征,制定相应的防治方案提供了参考依据。

烟草米根霉致病力及不同渗透压和pH环境下的代谢表型特征分析

为明确温度、叶位和创伤对烟叶霉烂病病原菌米根霉致病力的影响,及不同渗透压和pH环境下病原菌的代谢表型特征,采用穿刺法接种烟草离体叶片,测定了米根霉在不同温度及不同叶位烟叶中的致病力,并在Biolog PM 9和PM 10代谢板中96种渗透压和96种pH环境下培养米根霉,分析了其代谢表型特征。结果表明,米根霉可致病的温度范围为20℃~38℃,温度高于45℃无致病力;烟叶叶柄和叶片均可被侵染,创伤有利于侵染;米根霉对不同叶位烟叶的致病力间存在差异,其中对下部成熟叶的致病力较强,上部幼嫩叶的致病力较弱;米根霉具有广泛渗透压和pH适应能力,能在1%~10%(质量分数)氯化钠、3%~6%(质量分数)氯化钾、2%~5%(质量分数)硫酸钠、5%~20%(体积分数)乙二醇、1%~2%(质量分数)甲酸钠、2%~3%(质量分数)尿素、1%~12%(质量分数)乳酸钠、20~200 mmol·L^(-1)的磷酸钠(pH 7.0)、10~100 mmol·L^(-1)的硫酸铵(pH 8.0)、10~100mmol·L^(-1)的硝酸钠等渗透环境中正常生长,不能在3%~6%甲酸钠、4%~7%尿素、20~200 mmol·L^(-1)苯甲酸钠(pH 5.2)的渗透环境中生长;其pH适应范围为3.5~10.0,最适pH约为7.0。米根霉具有较强的脱羧酶活性和较弱的脱胺酶活性。