4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内毒力测定

采用生长速率法测定了4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌[Thielaviopsis basicola(Berk.and Br.)Ferraris]的室内抑菌毒力。测定结果表明,多菌灵、甲基托布津、大生M-45和杀毒矾等4种药剂对烟草根黑腐病菌的EC50分别为0.4251、5.3134、30.2686和37.2234mg/L,EC90分别为0.8170、11.4312、110.1398和160.5393mg/L。并且,结合对各种药剂有效成分和作用机理的比较,确定最佳的用药方式为多菌灵与大生M-45交替施用。

安徽省烟草根黑腐病病原鉴定及生物学特性分析

为了明确引起安徽省烟草根黑腐病的病原菌种类,选择具有典型症状的烟草根黑腐病烟株,采用胡萝卜圆片法对病原菌进行了分离。同时根据病原菌的培养形态和r DNA-ITS区序列对病原菌种类进行了鉴定,采用灌根法对病原菌进行致病性测定,并对病原菌的生物学特性进行研究。鉴定结果表明,分离得到的病原菌菌株为基生根串珠霉(Thielaviopsis basicola),对烟草品种云烟87有致病力。生物学特性分析表明,病原菌生长的最适培养基为V8,菌丝生长和孢子萌发最适温度为25℃、最适p H为6,分生孢子致死温度为53℃。该病原菌能有效利用淀粉、麦芽糖、葡萄糖等碳源以及尿素、硝酸锌等氮源。

皖南烟田三种土传病原物分子检测

为检测皖南烟田土传病害的分布,2011—2012年从皖南烟区烟田共采集土样51份,采用分子生物学方法对烟田土壤进行了烟草黑胫病、根黑腐病和青枯病检测。结果显示,烟田土壤中烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和青枯病菌的阳性率分别为19.6%、41.2%和56.9%,3种烟草土传病原菌在皖南烟区多数烟田均有分布,其中青枯病菌检出率最高。本研究证明了应用分子生物学方法检测土传病原菌的可能性,生产上可为烟草种植提供理论依据。

烟草根黑腐病拮抗木霉菌株TB72的鉴定及抑菌作用

菌株TB72是针对烟草根黑腐病菌从烟草报际土壤中分离筛选出有较强拮抗作用的木霉菌,为进一步明确其抑菌能力、控病效果及其对烟草根黑腐病的生防潜能,本研究通过平板对峙培养法、抑菌活性检测和控病测试,结合菌株TB72的培养性状、形态特征和分子鉴定确定其分类地位。试验结果发现菌株TB72对烟草根黑腐病菌具有明显拮抗作用,抑菌率达52.3%;控病试验表明菌株TB72对烟草根黑腐病的防效达84.5%,能显著降低烟株接种病菌后的发病率和病情指数。抑菌活性检测菌株TB72无菌滤液在测试的各浓度下对病菌苗丝生长和孢子萌发均有较好的抑制效果。通过对菌株TB72的培养性状、形态特征及ITS序列分析,确定其为木霉属中的棘孢木霉Trichoderma asperellum。

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。

增加施钾量对红花大金元烤烟部分生理生化参数及“两黑病”发生的影响

针对生产中红花大金元烤烟品种对黑胫病和根黑腐病(俗称"两黑病")抗性较低的问题,通过田间试验研究了不打杀菌剂条件下增加施钾量(与目前生产推荐187.5kgK2Ohm–2相比,分别增加75和150kgK2Ohm–2)对红花大金元烟株移栽后不同时间段健康烟株烟叶中的总氮、蛋白质、游离氨基酸、可溶性糖、总酚和类黄酮含量等生理生化指标及烤烟"两黑病"发病情况的影响。结果表明,随施钾量增加,烟叶内总氮、蛋白质和游离氨基酸含量下降,而可溶性糖、总酚和类黄酮含量则相反;同时"两黑病"发病情况也呈明显下降趋势。上述指标在对照与高钾处理间差异显著,且上述结果在烟株移栽后不同时间段规律一致。烤后烟叶产量、产值以中钾处理最大,高钾处理次之,对照最小。中、高钾两处理产量比对照分别增加4.49%和1.55%,产值分别增加18.27%和12.34%,中钾处理与对照间差异明显。说明目前红花大金元烤烟生产中的推荐施钾量偏低,应适当增加施钾量以增强烟株抗性,减少"两黑病"病害的发生。就本试验而言,当地施钾量以增加75kgK2Ohm–2(即总量达262.5kgK2Ohm–2)为宜。

宜宾烟区烤烟根黑腐病发生动态及主要影响因素

为有效防控烤烟根黑腐病害,于2019年和2020年采用普查和系统调查相结合的方法,对宜宾烟区烤烟根黑腐病发生动态及主要影响因素进行了研究。结果表明,苗期烤烟根黑腐病发病较轻或不发病;大田期于5月初开始零星发病,5月中旬至7月上旬进入发病高峰期,病害流行速度随降水量增加而增加,7月中旬至8月中旬,病害流行速度增长缓慢直至趋于零。前茬作物和栽培模式对烤烟根黑腐病发生均有较大影响,前茬为水稻的烤烟根黑腐病发病最轻,前茬为玉米的次之;栽培模式以全生育期覆盖地膜的地块根黑腐病发病较重。经普查发现,烤烟根黑腐病的发生随海拔升高呈加重趋势。聚类分析结果显示,宜宾烟区烤烟根黑腐病的发生可划分为较重发生区、中等发生区和轻或偏轻发生区,其中以中等、轻或偏轻发生区为主。综合普查和系统调查分析认为,宜宾烟区降水量、轮作方式、栽培模式是影响根黑腐病发生的主要因子,海拔高度是影响根黑腐病发生的次要因子。

烟草体内外拮抗细菌协同控制根黑腐病及诱导寄主抗性试验

烟草内生细菌T295和烟草土壤根际细菌R27均能有效抑制烟草根黑腐病,为探索烟草体内外拮抗细菌协同作用于烟株的防病效果及控病机理,测定了菌株T295和R27协同作用对烟草根黑腐病的防效和对菌丝、孢子的抑制作用,以及对烟草体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)等相关防御酶活性的影响。结果表明:内生细菌T295和土壤根际细菌R27协同作用于烟草能明显提高对烟草根黑腐病的控制效果,其无菌发酵液混合处理可以明显提高病原菌菌丝生长的抑制效果,但对孢子萌发抑制作用不明显。经内生细菌T295处理后的烟草,其体内5种酶活性高于R27处理,但混合菌液与T295处理的烟草酶活性变化差异不显著,内生细菌T295和土壤根际细菌R27两者诱导抗性未表现出累加效应,表明混合菌液处理的烟株诱导抗性主要与内生细菌T295能提高烟草中相关防御酶活性有关。

3种烟草根茎病害防治药剂的筛选

为了有效控制烟草根茎病害的发生和危害,通过田间小区试验,分别研究不同药剂对烟草青枯病、烟草黑胫病和烟草根黑腐病的防治效果。结果表明:不同药剂均能在一定程度上降低烟草根茎病害的发病率和病情指数,对于烟草青枯病,解淀粉芽孢杆菌的防效最佳,相对防效在70%以上,其次是中生菌素;对于烟草黑胫病,当发病较轻时,拜耳卓润和哈茨木霉菌有一定防效,相对防效在34%以上,但随着病情的加重,防治效果一般;对于烟草根黑腐病,枯草芽孢杆菌的防治效果最佳,相对防效达70%以上,其次是哈茨木霉菌。

土壤抑制烟草黑根腐病的机制

能抑制植物病害的土壤称为抑病土．抑病土在世界上分布广泛，已报道了多种植物土传病害可被土壤抑制．在烟草黑根病抑病机制的研究方面也有许多报道，本文根据这些作者及自己的研究资料加以综述．

土壤中烟草根黑腐病菌的real-time PCR分子检测

根据烟草根黑腐菌与其它近缘真菌在ITS序列上的差异,设计PCR检测引物TbF/TbR,并通过对各菌株基因组DNA扩增验证其特异性;以接种10倍浓度梯度的根黑腐菌孢子的土壤DNA为模板,建立土壤烟草根黑腐菌real-time PCR检测的标准曲线,得出每个反应体系中分生孢子数目的对数(x)和对应的Ct值(y)之间呈线性关系:y=-1.5373x+24.955,R2=0.9909(P<0.01)。通过对5块烟田土壤烟草根黑腐菌检测和烟田烟草根黑腐病的调查,证实上述方法可以准确检测土壤中烟草根黑腐菌孢子数量。

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌,采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌,通过平板对峙和含毒介质法,筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明,菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育,均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长,提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明,菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%,均高于其对照药剂;菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%,与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明,菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内,在烟草茎和叶内也能长时间存在,表明两菌株能够良好定殖。16Sr DNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明,菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa,菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述,菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用,并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果,是具有生防潜力的菌株。

不同生物制剂对烤烟提质防病效果及土壤特性的影响

【目的】探明不同生物制剂对烤烟提质防病及土壤特性的影响,为减施化学农药,保障烟区烟叶生产安全并促进当地烟草产业的可持续发展。【方法】采用随机区组试验,对比分析单施枯草芽孢杆菌(A)、单施木霉菌(B)、单施苦参硫磺(C)、枯草芽孢杆菌与苦参硫磺配施(AC)和木霉菌与苦参硫磺配施(BC)下烟草根黑腐病和黑胫病的发病率、土壤理化性质、土壤微生物多样性、农艺性状及烟叶品质的差异。【结果】各处理根黑腐病发病率为1.76%~5.04%,防效为28.77%~65.08%,除A外,其余处理根黑腐病发病率较不施药(CK)显著降低;各处理黑胫病发病率为2.33%~4.40%,防效为31.82%~48.86%,除A外,其余处理黑胫病发病率较CK显著降低,AC和BC对2种病害的防效较佳,防效为47.05%~65.08%,且农艺性状表现较好;烟叶物理特性,中部烟叶以C表现较好,得分较CK提高6.02%,上部烟叶以AC表现最好,得分较CK提高6.74%;各处理中部烟叶化学成分协调性略差于CK,上部烟叶则以A、C较好,均较CK提高4.35%;各处理土壤细菌多样性指数为8.06~8.60,除A稍低于CK外,其余处理均高于CK但无显著差异,土壤真菌多样性指数为6.80~7.59,其中,BC(7.59)、B(7.34)均显著高于CK(6.86);各处理土壤理化性质无显著差异,AC和BC使土壤容重呈降低趋势,孔隙度呈上升趋势。【结论】苦参硫磺与木霉菌或枯草芽孢杆菌配合施用能较好地防治烟草黑胫病和根黑腐病,不同程度提高烟叶的物理特性、协调化学成分,木霉菌可显著提高土壤真菌多样性。

生防真菌与氨基寡糖素组合对烟草黑胫病和根黑腐病的防治

针对烟草黑胫病和根黑腐病两种烟草土传病害日益加重的现状,利用生防真菌棘孢木霉MX菌株和产紫青霉Q2菌株分别与植物诱抗剂氨基寡糖素进行组合,在盆栽条件下测定了其分别在两种病害胁迫下的抗病效果。结果表明,产紫青霉Q2和棘孢木霉MX对烟草黑胫病菌和根黑腐病菌均有较强的拮抗作用,其发酵滤液能有效抑制两种病原菌的生长,与氨基寡糖素组合后能够更好地促进烟草幼苗的生长,对黑胫病和根黑腐病的防治效果均达到65%以上,能显著提高发病烟草中防御酶PAL、SOD、POD的活性。

河南省烟草根黑腐病菌的分子鉴定及致病性分析

为明确引起河南省烟草根黑腐病的病原菌种类,选用具有典型根黑腐病的烟草病株及其根际土壤为试验样品,采用组织分离法和胡萝卜圆片法对病原菌进行分离,根据菌株形态及rDNA-ITS序列对病原菌种类进行鉴定,并采用灌根接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,用胡萝卜圆片法分离获得YYTB、LNTB、JXTB与JYTB 4株病原菌分离物,其中LNTB、JXTB菌株在PDA培养基上纯化获得JXTB'和LNTB'两株白色变异菌株。菌株YYTB、JYTB、JXTB和LNTB的形态学观察结果基本一致,菌落呈灰色至橄榄绿色,内生分生孢子梗无色至褐色,单生或簇生,内生分生孢子单孢,无色,杆状,两端钝圆,厚垣孢子黑褐色,簇生或单生。白色变异菌株JXTB'和LNTB'的形态学观察结果基本一致,菌落白色,厚垣孢子无色,分生孢子梗与内生分生孢子的形态特征及大小与YYTB、JYTB、JXTB和LNTB菌株无明显差异。6个菌株的rDNA-ITS序列与Gen Bank中登录号为AF275482、U97334[Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr.]的rDNA-ITS序列同源性在99%以上,且对豫烟6号烟苗均具有致病性,白色变异菌株JXTB'和LNTB'的致病性相对正常菌株YYTB、JYTB、JXTB和LNTB较弱。因此,将河南省烟草根黑腐病的病原菌鉴定为根串珠霉Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr.。

土壤生境抑制烟草根黑腐病研究进展

烟草根黑腐病是一种世界性真菌病,曾给各主要种烟国造成巨大损失。为此简述了近20年来烟草根黑腐病在中国各主要种烟省份爆发流行的状况,并对此病害的病原菌、生物学特性、侵染和病症特征加以介绍,总结了土壤理化性质、土壤养分状况、根系分泌物和土壤微生物等土壤生境因子对该病病原菌存活、侵染、病害爆发的影响,提出通过加强田间管理、改进栽培策略、合理施用肥料、引入生物防治等措施,以改善土壤生境为目标,抑制烟草根黑腐病爆发。

棘孢木霉T-6对烟草促生及对黑胫病和根黑腐病的抗病作用

利用生防菌防治土传病害是植物病害防治中的重要措施,在温室盆栽条件下研究了棘孢木霉T-6对烟草促生和抗病效果。结果表明,棘孢木霉T-6对烟草黑胫病菌、烟草根黑腐病菌的菌丝生长抑制率分别达49.62%、59.23%;温室盆栽条件下,棘孢木霉T-6对黑胫病和根黑腐病的防治效果分别达到74.45%和75.14%。棘孢木霉T-6处理后提高了烟草叶片叶绿素含量、类胡萝卜素含量和超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,棘孢木霉T-6处理的烟株生长状况明显好于对照。棘孢木霉T-6能够促进烟株生长和提高烟草对黑胫病和根黑腐病的抗性,具有良好的应用潜力。

烟草根黑腐病拮抗菌的分离鉴定和生防作用特性研究

为挖掘对烟草根黑腐病菌有较强拮抗效果,且可在烟株根部稳定定殖的生防菌资源,以烟草根黑腐病菌为靶标,利用稀释涂布法和平板对峙法分离筛选出高效拮抗活性菌株,对其进行系统发育分析以及粗脂肽抑菌活性检测;并运用PCR技术检测拮抗细菌的脂肽编码基因,利用趋化性及生物膜成膜等试验研究烟草根系分泌物及其产生的各种有机酸对拮抗菌根部定殖的影响。结果表明:从烟草根际土壤中分离得到两株Thielaviopsis basicola高效拮抗菌株S2-1和SNSY15-5,分子鉴定表明,S2-1和SNSY15-5均为芽孢杆菌属细菌;拮抗菌S2-1和SNSY15-5脂肽粗提物对T.basicola毒力较强,EC 50值分别为1.93和2.56 mg·mL^(-1),SNSY15-5含有参与脂肽类家族细菌素(bmyB)、生物素操纵子(bioA)和假定蛋白(yngG)合成的基因;S2-1菌株中含有参与脂肽类家族生物素操纵子(bioA)合成的基因;烟草品种K326根系分泌物产生的苹果酸对S2-1和SNSY15-5有较强的吸引作用,S2-1和SNSY15-5在苹果酸中的数量分别达到63.35×10^(4) CFU·mL^(-1)和42.35×10^(4) CFU·mL^(-1),K326烟草根系分泌物及其草酸可促进S2-1生物膜形成,而K326烟草根系分泌物及其柠檬酸则促进SNSY15-5生物膜形成。该研究结果为开发效果稳定的微生物菌剂提供理论基础。

烟草根黑腐病抗性位点RBRR1的InDel分子标记开发与分析

【背景和目的】RBRR1是通过远缘杂交与回交导入栽培烟草的一个单显性广谱型根黑腐病抗病位点,为了开发基于该位点的简单高效稳定且成本低的紧密连锁分子标记。【方法】在已有酶切扩增多态性序列(Cleaved amplified polymorphism sequences,CAPS)标记相关序列基础上,利用云晒1号基因组与抗、感根黑腐病材料重测序信息,基于其序列插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)多态性设计抗病相关分子标记,并开展遗传效应和遗传变异分析。【结果】筛选到4对具有良好多态性的引物,在目标单株的分子标记辅助选择中具备便捷、高效且呈共显性的特点。遗传效应分析表明,通过分子标记辅助选择导入RBRR1位点能够极显著提高栽培烟草根黑腐病抗性。遗传变异分析结果显示,在烟草核心种质资源中仅有白肋烟TN90和SoTa2携带有RBRR1抗病基因,并发现4对引物在普通烟草自然群体中呈现2种基因型。【结论】RBRR1抗病位点在我国尚未进行广泛利用,具有较高的利用价值;而开发的4个InDel标记可用于该抗性位点的分子标记辅助选择育种和后续抗病基因的精细定位与克隆。

烟草根黑腐病不同发病程度与土壤养分及微生物群落的关系

【目的】分析烟草根黑腐病发病程度对土壤养分及微生物群落结构的影响,探究不同病害发生条件下土壤环境、微生物群落间的关系,为烟草根黑腐病防控提供理论依据。【方法】以贵州省安顺烟区为调查区域,收集烟草根黑腐病不同发病程度(0、1、3、5级)烟株根际土壤,测定土壤理化性质;采用16S rDNA和ITS基因测序技术进行分析,探讨不同发病程度下烟株根际土壤养分、细菌及真菌群落结构差异。【结果】与正常土壤相比,随着病害程度的加重,土壤细菌群落的均匀度和丰富度降低,而真菌群落的均匀度和丰富度升高。与正常土壤相比,发病土壤中细菌群落鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、Candidatus_Udaeobacter、苔藓杆菌属(Bryobacter)和芽单胞菌属(Gemmatimonas)相对丰度下降,而芽孢杆菌(Bacillus)丰度上升;同时真菌群落镰刀菌属(Fusarium)、柱孢属(Cylindrocarpon)、毛霉属(Mucor)丰度下降,而Nicotiana、茎点霉属(Setophorna)、亡革菌属(Thanatephorus)、锥毛壳属(Coniochaeta)、织球壳菌属(Plectosphaerella)和四枝孢属(Tetracladium)丰度上升。指示物种分析结果表明,芽单胞菌属、织球壳菌属和四枝孢属可能是不同发病程度土壤细菌、真菌群落属水平差异的主要物种。冗余分析(RDA)和方差分解分析(VPA)结果表明,土壤铵态氮(NH-N)和有机质(SOM)是细菌、真菌群落结构发生变化的主要驱动因子。【结论】根际土壤中细菌芽单胞菌属丰度的下降和真菌四枝孢属丰度的上升是烟草根黑腐病严重发生的关键微生物因素,提高土壤SOM和NH-N含量能有效降低烟草根黑腐病发病程度。