烟草黑胫病菌毒素对烟草防御性相关酶的诱导作用

液体振荡培养的黑胫病菌孢子经过滤、浓缩、硫酸铵沉淀、透析、离心,获得初提纯黑胫病菌毒素。利用不同浓度毒素处理烟草幼苗,检测烟叶中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化氢酶(CAT)的活性以及对丙二醛(MDA)含量变化的影响。结果表明,抗病品种K326经毒素处理后的CAT和MDA活性均低于感病品种红花大金元,而红花大金元的PAL活性比K326易被激活。初步说明烟草黑胫病菌毒素处理过的烟草能够诱导提高相关酶CAT,PAL的活性,减少有害物质MDA的含量。

烟草镰刀菌根腐病病菌致病粗毒素的研究

本试验测定了经尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani)粗毒素浸泡后烟草幼苗抗病相关酶系的活性及细胞膜透性的变化,以研究毒素对烟草的致病作用。结果表明,引起烟草根腐病的尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌的毒素属于非寄主专化性毒素(NHST)。烟草幼苗经毒素处理12～60h,其过氧化物酶(peroxidase,POD)和多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的活性都迅速升高,随后下降,幼苗出现不同程度的萎蔫。50%的毒素液处理幼苗根部54h后,根部细胞膜的损伤率比对照均增加了80%,叶片的细胞膜损伤率比对照增加了90%。另外毒素处理能抑制烟草种子胚根的生长,使幼苗萎蔫,与病原菌直接接种表现相同,说明毒素是病原菌侵染烟草导致发病的一个重要因子。

烟草黑胫病粗毒素高产培养条件的筛选

烟草黑胫病粗提毒素对烟草叶组织有明显的损伤作用，同一叶片不同部位对粗毒素的敏感性相似，不同生理年龄烟叶以及同一生理年龄不同品种的烟叶对毒素的敏感性不同。高压灭菌法和抽滤灭菌法所得到粗提毒素无明显差异。土豆６００ｇ／ Ｌ，糖５０ｇ／ Ｌ，硫酸铵３ｇ／ Ｌ，硫酸镁０．８ｇ／ Ｌ，培养时间２４ｄ 为最佳的粗毒素高产培养条件。菌丝干重与毒素产量高低无线性相关关系。

表达苏云金杆菌δ-内毒素基因的转基因烟草的抗虫性

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)HD-1的δ-内毒素基因原始克隆TH12和TH48分别含有5.3kb和6.6kb型两类同源异族基因。经定点突变改造其5′端,酶切对3′端进行缺失后,在大肠杆菌中仍能表达出有杀虫活性的被修饰的毒蛋白。将上述加工过的基因插入到双元载体pBin437(pBin19的派生质粒)中,借助辅助Ti质粒pAL4404转入烟草,获得了抗卡那霉素的再生植株。经Southern印迹和狭槽印迹(Slot blot)杂交证明有1—5个拷贝的毒素基因整合至烟草染色体中。Northern印迹法分析结果表明这两类基因都在转基因植株中得到表达。有4株5.3kb类型,3株6.6kb类型的转基因植株对烟青虫有高抗性,与对照相比,这7株转基因烟草植株的杀虫率可达40—50%,并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育,表现明显的抗虫作用。结果表明这两类毒蛋白基因都可在植物中表达并赋于转基因植株以抗虫性。

烟草低头黑病菌毒素对烟草细胞膜透性的影响

为探讨烟草低头黑病菌与烟草之间的分子互作 ,于 2 0 0 2年进行了烟草低头黑病菌毒素对烟草细胞膜透性和叶绿素含量影响的试验。结果表明 ,烟草低头黑病菌毒素可以引起烟草细胞膜透性增加 ;该毒素对不同抗感烟草品种细胞膜透性的影响有差异 ;该毒素接种后 36～ 6

苏云金芽孢杆菌cry1Aα核心毒素基因转化烟草及其杀虫活性

将苏云金芽孢杆菌cry1Aα的C端编码区截短，获得编码N端609个氨基酸约1.8kb的核心毒素基因，将其构建到植物表达载体转化烟草，研究直接表达的活性ICP核心毒素被昆虫取食后的杀虫效果。T1代种子发芽的抗生素抗性分离和PCR检测证实cry1Aα核心毒素基因整合到了烟草基因组，Western杂交检测表明转化烟草能够正常表达大小为75．6kD的核心毒素蛋白。生物测定结果表明，转化烟草对初孵棉铃虫平均有高于60％的致死率，对初孵甜菜夜蛾平均达到70％的致死率，最高致死率均可达到90％以上，并对昆虫的生长发育有明显的抑制作用。

烟草靶斑病菌毒素对烟草防御酶及丙二醛含量的影响

采用烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)粗毒素原液处理6叶期烟草幼苗,测定12、24、36、48、60、72h后烟草叶片中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,经烟草靶斑病菌粗毒素处理后的烟草POD、PAL的活性及MDA含量都高于对照,并呈现一定的波动性;PPO和CAT先升高后下降,始终高于对照;而SOD酶的活性表现为持续下降。

烟草镰刀菌根腐病抗性鉴定方法研究

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法,采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种(小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01)的镰刀菌抗病性进行了研究。结果表明,镰刀菌毒素液胁迫法可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系毒素浓度为8%,处理时间6 d;镰刀菌孢子悬浮液接种法可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系孢子液浓度为107个/mL,处理时间4 d;带菌菌谷接种也可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系菌谷比例为20%,处理时间9 d;离体叶片用菌饼和草酸液处理,能区分品种的抗感性,但不能区分品种的抗感程度。研究结果认为孢子悬浮液接种法和带菌菌谷接种与其他3种方法相比可以准确评价品种对镰刀菌根腐病的抗感性。

寄主专化性毒素及其在烟草上的研究进展

植物病原真菌寄主专化性毒素的研究已在多方面开展,从产毒真菌的种类到毒素的化学结构,从毒素的检测到毒素的利用,从毒素的提纯到毒素的信号传导等。笔者就寄主专化性毒素的产毒真菌、提取与纯化、检测方法、作用机制、应用领域以及在烟草上的研究等方面进行了阐述,以期将寄主专化性毒素的研究引入烟草种质鉴定与抗病育种中。

钠盐与AT毒素对烟苗根生长的影响

为确定不同钠盐对烟草赤星病菌AT毒素毒性的影响，作者采用摩擦接种处理、浇根处理、种子根处理3种生物测定方法，确定了以烟草种子根处理法作为烟草赤星病菌的毒性测定方法。用10种化合物分别以5种不同浓度与AT毒素混合接种烟苗，分别以单独接种毒素稀释液与无菌水作对照。根长测定数据经DPS软件统计分析，结果表明单独施用AT毒素明显抑制烟苗根的生长，差异极显著；氢氧化钠、硝酸钠、苯甲酸钠、酒石酸钠均不能改变毒素对根长的影响，碳酸钠（200mg／mL）、酒石酸钾钠（200mg／mL）、四硼酸钠（0．02-0．2mg／mL）、氟化钠（0．2～2mg／mL）、柠檬酸钠（0．2mg／mL-200mg／mL）、钼酸钠（0．02-2mg／mL）对烟草赤星病菌毒素有明显钝化作用，以钼酸钠0．02mg／mL浓度处理效果最好，其次为柠檬酸钠0．2mg／mL处理；钼酸钠20-200mg／mL处理可增加AT毒素的毒性，浓度越大效果越显著。

烟草靶斑病菌(Rhizoctoniasolani)粗毒素的生物活性及理化性质

为揭示烟草靶斑病菌毒素的致病机理,进行了烟草靶斑病菌毒素的分离、纯化和生物活性测定方法及理化特性研究。结果表明:经分离纯化获得了烟草靶斑病菌的毒素。该毒素可以损伤离体叶片,抑制种子萌发和胚根的生长,并且可致使幼苗萎蔫,离体叶片针刺法最适宜毒素的生活性测定。烟草靶斑病菌毒素具有热与光稳定性,较耐储藏,是一类极性化合物,活性物属非蛋白类物质。

赤星菌毒素对烟草幼苗致病特性的研究

文章首先测验了3种培养液对烟苗生长的影响和赤星病菌在培养液中产生毒素的能力,据此选出查彼培养液用于产生毒素的培养。病菌在查彼培养液中生长28天后,表现出最高的毒素活性,毒素活性临界值(TWE50)为32。然后用毒素粗提液处理幼苗,以幼苗悬滴接种法为对比。烟苗在12小时内可见对毒素发生明显反应,表现为根部变褐和须根脱落,对悬滴接种的反应要到72小时后才可鉴别。毒素处理后36小时内烟苗进而萎蔫,21个品种的萎蔫程度与12小时内的根部反应趋势一致,根部反应和萎蔫的程度又同时与品种对悬滴接种的反应趋势相一致,3种反应间的吻合度平均近80％。

烟草低头黑病菌毒素对烟草丙二醛含量和某些防御酶的动态影响

本文研究了烟草抗病品种(Burley21)和感病品种(NC82)在烟草低头黑病菌毒素诱导下,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性的动态变化。结果表明,在毒素的诱导下,MDA含量的增减比率抗病品种Burley21低于感病品种NC82。不论Burley21还是NC82,SOD、POD和PPO活性皆在前期表现为上升后期下降,但抗病品种较感病品种下降速度慢,而且POD在后期还表现为高活性。表明抗病品种(Burley21)具有比感病品种(NC82)更强的防御能力和抗膜脂过氧化能力。

霍乱毒素B亚单位基因分泌型表达载体的构建及转化烟草的研究

为了探索利用植物分泌特性来表达重组蛋白的可行性,先构建了含钙网蛋白信号肽的植物双元载体pBI-cal,再向该载体中插入霍乱毒素B亚单位编码基因,最后得到表达载体pBIcal-ctb。通过根癌农杆菌介导,该表达载体转化烟草,在卡那霉素抗性培养基上筛选,得到30棵抗性植株。经PCR鉴定,霍乱毒素B亚单位基因已经整合到烟草基因组中。初步表达分析表明,转基因烟草中含有具生物活性的霍乱毒素B亚单位蛋白。

烟毒性弱视的图形视觉诱发电位探讨

目的 研究烟毒性弱视的图形视觉诱发电位的变化。方法 检验对象为 36例 72眼烟毒性弱视患者 ,视力数指～ 0 .8,眼科常规检查无明显病变。检测条件 :视刺激为黑白棋盘格 ,空间频率 1°2 2′视角 ,时间频率 2 .9Hz ,对比度10 0 % .结果 72眼中 32眼P VEP无波 ,4 0眼P10 0潜伏期延迟。结论 研究说明图形视觉诱发电位是诊断烟毒性弱视特别是早期眼底正常的一种好方法。

烟草祖先种及重要野生种PDR1基因的生物信息学分析

植物的多向耐药性(Pleiotropic drug resistance,PDR)转运蛋白隶属于ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白家族的G亚家族。该类蛋白参与植物多种初生、次生代谢物的跨膜运输,在植物的生长发育、响应逆境胁迫、解毒过程中起着重要作用。近年的研究还表明,该蛋白与多种植物对真菌病原的抗性有关。本文以烟草祖先种和重要野生种为研究对象,以拟南芥PDR12蛋白、烟草的PDR1基因为探针,通过搜索同源序列,从数据库中提取烟草及祖先种、重要野生种中的PDR基因、蛋白序列,并通过生物信息学分析手段对其编码蛋白的理化特性、氨基酸序列特征、蛋白结构、功能、启动子序列及表达调控特征进行了分析,并以本氏烟(Nicotiana benthamiana)NbPDR1为代表,预测了该基因启动子的顺式作用元件,以普通烟草(Nicotiana tabacum)NtPDR1基因为例,预测了其基因编辑位点。结果表明,这些PDR基因相似性高,均编码跨膜蛋白,具有典型的跨膜结构域和核酸结合结构域。该基因启动子区有多个与病原真菌诱导、干旱等逆境胁迫响应相关的元件,暗示该基因可能是抗真菌病害、响应逆境胁迫的广谱抗性基因。最后,本文预测的基因编辑位点,为烟草PDR基因的功能研究、基因编辑及抗病育种提供理论基础。

烟草漂浮育苗有害藻类致病机制及其防治研究进展

烤烟漂浮育苗技术自21世纪初叶在我国大面积应用以来,已在我国的烟叶生产中发挥了重要的积极作用。然而,漂浮育苗系统的环境特点却极易导致藻类滋生。有害藻类的大量繁殖不仅会与烟苗竞争养分和溶氧,还会导致营养液理化指标下降,不利于烟苗正常生长发育。同时,许多有害藻类产生的藻毒素能够严重抑制烟草种子萌发和幼苗生长,危害烟苗健康,诱发多种烟苗病害的发生。本文综述了烟草漂浮育苗系统中有害藻类的种类、发生特点、藻毒素种类与致病机制,提出了源头防藻、生态控藻和药剂除藻等多种防治措施和策略。并对有害藻类的新型绿色防治措施进行了展望,旨在推进我国烟草漂浮育苗系统中有害藻类的基础研究与防治技术研发。

烟草抗黑胫病突变体的细胞筛选

经实验我们成功地建立了在细胞水平上筛选烟草抗黑胫病突变体的筛选体系。该体系的主要内容为:γ-射线500—2000拉德诱变高度感病品种的花药后用50—80％的黑胫病菌粗毒素为选择压力,筛选出抗毒素花粉植株,用离体叶片法测定选出抗病植株,再从后代鉴定中选出抗病性能够稳定遗传的突变系。γ-射线及高浓度毒素处理均能得到抗病植株。选自感病品种的花粉植株中约有9—50％是真正抗病的。这些抗病植株中有一部分的抗病性能够稳定遗传。用该法已从感病优质品种小黄金1025及乔庄黑苗中选出6个突变系。并自N.C.628(抗)×小黄金1025(感)及N.C.628(抗)×庆胜2号(感)的F_1花粉植株中选出4个抗病系。所有的抗病系经3—4代后均表现出稳定抗性。其中一个突变体(R400)的抗性似由不完全显性多基因控制。

毒素胁迫烟草抗黑胫病鉴定及抗性指标分析

为建立一种高效准确的烟草黑胫病抗性鉴定方法,以4种具有不同抗性特性的烟草品种为材料,研究培养基附加不同浓度黑胫病病菌毒素及不同胁迫时间对烟草种子萌发和根系生长的影响。结果表明,烟草黑胫病病菌毒素胁迫对烟草种子的发芽率和根系生长均有抑制作用,抑制效果随胁迫浓度的增加而增强,且不同品种对毒素胁迫的耐受力不同,利用体积浓度为50%的毒素胁迫15 d时,抗病品种G28、中抗品种YN116、中感品种净叶黄、感病品种红花大金元的根系长进培养基中的株数比率分别为79.38%、70.74%、33.55%和13.36%。初步确定鉴别烟草种子抗性特性的最佳粗毒素胁迫浓度为50%(即含蛋白质13.53 μg/mL,含糖19.64 mg/mL)、最佳鉴定时间为胁迫15 d,利用该方法可在短期内高效准确地鉴定出不同品种(种质)对烟草黑胫病的抗感水平,加快烟草抗黑胫病育种进程。

筛选烟草抗黑胫病细胞突变体的粗毒素浓度的初步研究

烟草黑胫病严重影响烟草的生产,是一类毁灭性真菌病害。近年来,随着无公害烟叶概念的提出,降低农药残留,减少农药使用,提高烟叶品质,成为烟叶生产所追求的目标。因此,防治烟草黑胫病的研究重点应该放在强抗病性烟草品种的选育上。采用细胞突变体筛选与组织培养技术相结合的方法,以烟草黑胫病无菌粗毒素对两个烟草品种(红花大金元、云烟85)叶片外植体进行离体筛选。结果表明,筛选红花大金元细胞突变体的临界浓度为6%,筛选云烟85细胞突变体的临界浓度为7%。