一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii)G86的鉴定及其对亚硝酸盐的降解作用

从河北邯郸某虹鳟养殖场的底泥中分离得到一株革兰氏阴性菌,对其形态特征及16S rRNA基因序列进行测定分析并做生理生化鉴定,确定为一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii),编号为G86。经发酵培养试验得到优化后的培养基和培养条件为:温度10℃,pH 6,转速180 r/min。以亚硝酸钠为唯一氮源,在上述培养条件下在72 h对总氮和亚硝酸盐氮的去除率分别为33.05%和31.85%。本次分离得到的托拉斯假单胞菌G86可以作为养殖生产上降解亚硝酸盐的备选菌株。

黄色金针菇黑腐病病原菌的分离与鉴定

为探明引起黄色金针菇黑腐病的病原菌,为黄色金针菇病害防治及栽培管理等奠定基础,开展了黄色金针菇(Flammulina filiformis)黑腐病的病害调查和病原菌分离鉴定试验。结果表明,引起黄色金针菇黑腐病的病原菌为托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)。

耐冷亚硝酸盐型反硝化菌Pseudomonas tolaasii Y-11的鉴定及其脱氮特性

【目的】反硝化细菌在生物脱氮中具有重要作用,而耐冷亚硝酸盐型反硝化细菌研究较少,本文从长期淹水的冬水田泥土分离获得一株耐冷高效去除亚硝酸盐氮和总氮的好氧反硝化细菌Y-11,明确其分类地位以及除氮特性,以期为后续利用该菌在初冬到春末处理亚硝酸盐水体污染奠定基础。【方法】通过形态学特征、特异性磷脂脂肪酸以及16S rRNA基因测序分析对该菌株进行鉴定;在好氧条件下以亚硝酸钠为唯一氮源,分别研究不同初始温度、转速、p H、碳源、接种量以及亚硝酸盐氮浓度对该菌去除亚硝酸盐氮和总氮的影响,确定最适降解条件。【结果】分离得到的菌株Y-11,经鉴定归于托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii);在国内外尚无该种菌具有反硝化作用的报道,是对亚硝酸盐型反硝化细菌的进一步补充。Y-11菌株的最适脱氮条件为15℃,200 r/min,p H7.0,100 m L反硝化培养基中最适接种量为1.5×108CFU,最佳碳源为乙酸钠,亚硝酸盐氮为10 mg/L;以乙酸钠为电子供体,15℃、初始p H为7.2、150 r/min振荡培养,48 h对亚硝酸盐氮和总氮的去除率分别为100%和61.28%。【结论】Y-11是一株具有较高反硝化能力的托拉斯假单胞菌,能高效地去除亚硝酸盐氮和总氮,其最适温度是15℃左右,是一株耐冷反硝化细菌。

平菇褐斑病病原菌的分离与鉴定

近年来褐斑病给我国平菇生产造成的损失日益严重。其症状主要表现为菌盖表面出现褐色斑点;如果湿度过高,菌盖表面能形成菌脓;如果感染原基或幼菇,会导致子实体畸形或停止发育。从病斑组织分离出病原细菌T3,根据Biolog自动鉴定系统鉴定结果、16S rDNA序列分析以及嵌套PCR检测结果进行了综合鉴定,确认该病原细菌为Pseudomonas tolaasii。

水杨酸对平菇细菌性褐斑病的防治效果试验

通过平皿抑菌试验和活体药效试验研究不同浓度的水杨酸对由托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)引起的平菇(Pleurotus ostreatus)细菌性褐斑病的防治效果。结果表明,浓度为5.00 mg/m L水杨酸可有效防治平菇细菌性褐斑病,且可以促进平菇菌丝的生长。

一种平菇褐斑病病原菌的鉴定

本文将从平菇(Pleurotus ostreatus)褐斑病中分离纯化的240多个菌株中,选出使平菇褐斑病发病快且病情严重的菌株PG1702,对其进行致病性试验,结果表明菌株PG1702为引起平菇细菌性褐斑病的病原菌;显微形态的观察和扩增出的16S rDNA序列与GenBank比对结果表明菌株PG1702为托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii Paine)。

金针菇工厂化生产中黑腐病病原菌的分离与鉴定

从山东省金针菇(Flammulina velutipes)工厂化生产中发现一种新病害,将其病原菌进行分离纯化,并经柯赫氏法则验证,该病原菌为致病菌。根据病原菌的形态特征、培养性状、生理生化及16SrDNA序列分析,鉴定其为托拉氏假单胞菌(Pseudomonas tolaasii)。

精制竹醋液防治平菇细菌性褐斑病药效试验

测定不同浓度的精制竹醋液对平菇细菌性褐斑病菌的抑制作用以及对平菇菌丝生长的影响以及田间验证。结果表明10%精制竹醋液不仅具有明显的抑菌效果而且能促进平菇菌丝的生长。研究结果为精制竹醋液作为平菇细菌性褐斑病的防治药剂研发奠定基础。

平菇细菌性褐斑病诱抗菌株筛选及诱抗效果

从平菇(Pleurotus spp.)上分离到细菌性褐斑病弱致病力菌株和非病原菌株共126株,采用离体平菇法筛选模型,筛选出了3株可以诱导糙皮侧耳(P.ostreatus)对托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii)产生抗病作用的诱抗菌株。通过田间验证,最终得到1株诱导抗病效果好的诱抗菌株,诱导抗病效果为66.73%。在供试接种浓度范围内,诱抗菌株的诱导效果随接种浓度增大而增强。

金针菇黑腐病病原菌的分离与分子鉴定

为了明确山东省金针菇(Flammulina velutipes)工厂化厂房内发现的细菌性病害的种类,从感病子实体组织分离获得病原菌菌株,通过提取其基因组总DNA并分别扩增病原菌的16S rDNA和gyrB基因,序列分析结果表明该病原菌为托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)。

壳聚糖对平菇褐斑病病原菌的抑制作用及机理

为探究壳聚糖对平菇褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌的抑制作用,通过倍比稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并对壳聚糖作用前后托拉斯假单胞杆菌细胞壁及细胞膜的完整性、胞内物质泄漏、膜脂过氧化程度进行了检测。结果表明,壳聚糖对托拉斯假单胞杆菌生长具有较好的抑制作用,MIC值和MBC值分别为0.25 g·mL^-1和1.00 g·mL^-1,并且经过不同浓度的壳聚糖溶液作用后,细菌培养液在260 nm和280 nm处的吸光值、碱性磷酸酶活性、蛋白质及丙二醛(MDA)含量均显著提高,说明壳聚糖通过加剧托拉斯假单胞杆菌膜脂过氧化、损坏细胞壁完整性、增加细胞膜通透性、使胞内物质发生泄漏等,实现对托拉斯假单胞杆菌的抑制作用。

中生菌素可湿性粉剂对糙皮侧耳细菌性褐斑病药效试验

以硫酸链霉素为对照药剂,通过平皿抑菌试验和活体药效试验,对3%中生菌素用于防治糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)细菌性褐斑病的效果进行评价。结果表明,3%中生菌素(37.57、5.0 mg/L)与硫酸链霉素(250 mg/L)对托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii,细菌性褐斑病病原菌)的平皿抑制率均为100%;活体药效试验中,3%中生菌素(37.5 mg/L)与硫酸链霉素(250 mg/L)对糙皮侧耳细菌性褐斑病的预防效果均在80%以上,显著优于接种后施药处理的治疗效果。

Application of Pyroligneous Acid in the Prevention and Control of Brown Blotch Disease in Pleurotus ostreatus

In the present study, agar diffusion test and field trials were carried out using a mushroom （Pleurotus ostreatus） culti- var Shouyanping as the experimental material to determine the antibacterial activity of refined pyroligneous acid prepared from almond shell against Pseudomonas tolaasfi and its effects on mycelial growth of mushroom. The results revealed that 1.25%, 2.50% and 5.00% of refined pyroligneous acid obviously inhibited the occurrence of brown blotch disease in mushroom, but also greatly promoted mushroom mycelial growth. Therefore, 1.25% and 2.50% of refined pyroligneous acid can be used in fields to prevent brown blotch disease, and 5.00% refined pyroligneous acid can be used to control the incidence of brown blotch disease when it widely occurs in fields.

环境因素对平菇褐斑病致病性的影响

以平菇菌株韩CB100为试验材料,接种托拉斯假单胞杆菌后,将子实体置于不同温度、不同湿度、不同CO_2浓度的环境中培养,观察记录发病情况并计算病情指数,研究不同环境条件对褐斑病致病情况的影响。结果表明:不同温度条件下病情指数存在显著性差异,18℃、20℃条件下,子实体发病较重,23℃时发病较轻;70%~80%和90%~100%两个不同湿度条件的褐斑病发病率差异不显著;CO_2含量0.6‰~0.9‰时较0.3‰~0.6‰时褐斑病发生严重,两者差异显著。

平菇细菌性黄斑病发病因素分析

以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)、白黄侧耳(P.cornucopiae)和肺形侧耳(P.pulmonarius)3个种20个菌株为材料,研究温度、空气相对湿度等环境因素以及培养料配方和菇潮等对细菌性黄斑病发病的影响。结果表明:糙皮侧耳、白黄侧耳和肺形侧耳种间对细菌性黄斑病的抗性无显著性差异,种内不同菌株间存在显著性差异;不同出菇温度条件下,病情指数存在显著性差异;在20℃时病情指数最高,25℃和30℃时病情指数相对较低;80%～85%和95%～100%两个不同湿度条件下,没有显著性差异;在试验范围内,随着培养料中玉米粉含量的增加,子实体的病情指数显著降低;与第一潮相比,第二潮的病情指数显著升高。

高寒特境中甸黄芪植物根际微生物物种多样性及其抗生物膜活性成分

滇西北高寒地区分布着丰富的黄芪属植物资源,该属植物“根际效应”明显,其根际微生物极具抗菌药用资源研究价值。【目的】认知滇西北高寒特境中甸黄芪根际微生物的物种多样性,探究其可培养菌株次生代谢产物的化学多样性及抗菌、抗生物膜活性。【方法】采用宏基因组和微生物纯培养方法对中甸黄芪植物根际微生物进行物种多样性分析,同时采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)、超高效液相色谱-质谱联用法(ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)结合“微量肉汤稀释法”“孔板法”等多级联合筛选策略综合评估可培养菌株的抗菌活性药源研究价值。【结果】对中甸黄芪根际土壤样本的微生物分类操作单元(operational taxonomic units,OTU)进行分类注释,得到22门54纲105目187科316属856种微生物,其中优势菌群为慢生根瘤菌属。纯培养共获得27属54种95株可培养菌株,包括20属33种54株细菌和7属21种41株真菌,优势属分别为芽孢杆菌属和青霉属。其中,1株细菌Pseudomonas tolaasii ZTB4和3株真菌Aspergillus tabacinus ZNF17、Lecanicillium aphanocladii ZNF15、Umbelopsis nana ZTF31的次生代谢产物具有广谱抗菌活性。同时,菌株ZTB4和ZNF17的次生代谢产物也显示出优秀的抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜活性,并已验证这2株菌株的主要活性成分分别为环脂肽类与黄酮类。【结论】中甸黄芪植物根际微生物物种多样性较为丰富,其可培养菌株次生代谢产物有较好的化学多样性和抗菌、抗生物膜活性。研究结果为我国特境特色微生物药用资源的开发利用提供理论依据。

平菇和双孢蘑菇细菌性褐斑病研究进展

目前我国平菇和双孢蘑菇的年产量分别为248.8万t和133.0万t,在我国食用菌产业中居第一和第三位。随着周年生产的实行和栽培规模的日益扩大,平菇和双孢蘑菇的细菌性褐斑病也日益严重。子实体被感染后,菌盖表面出现圆形或椭圆形褐色凹陷斑,在潮湿条件下,尤其是菌盖表面有水膜时,该病最容易发生。细菌性褐斑病的病原菌是托拉氏假单胞菌Pseudomonas tolaasii,主要致病因子是托拉氏毒素(tolaasin)。该文作者从病原菌研究、致病机制和防治等几个方面对平菇和双孢蘑菇褐斑病进行了综述。

托拉斯假单胞杆菌弱毒菌株诱导平菇抗细菌性褐斑病的研究

为了明确平菇细菌性褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)弱毒菌株JPG250303的诱导抗病作用、弱致病性及诱导抗病作用的遗传稳定性,通过对其诱导抗病性表达、诱导接种浓度及诱导间隔期的研究,明确该弱毒菌株具有较好的诱导抗病效果。利用形态学及分子生物学技术,鉴定出该弱毒菌株为托拉斯假单胞杆菌(P.tolaasii),将弱毒菌株经平菇子实体连续5代培养后均具有弱致病性,说明其弱致病性可以稳定遗传;同时对5代菌株分别进行了诱导抗病活性的验证,5代菌株对平菇细菌性褐斑病诱导抗病效果分别为67.2%、66.3%、69.1%、68.6%和65.0%,说明该弱毒菌株诱导抗病活性也具有稳定性,这一研究为该弱毒菌株作为生防菌株防治平菇细菌性褐斑病的应用提供了理论基础。

平菇细菌性褐斑病病原菌RT-PCR检测方法的建立及其应用

平菇细菌性褐斑病是一种严重危害平菇生产的病害,早期监测和防治是关键。采用平菇细菌性褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)毒素基因的特异性引物(Pt-1A)/(Pt-1D1),通过扩增条件优化,建立了该菌的实时荧光定量 PCR(Real-time fluorescence quantitative Polymerase ChainReaction)检测及富集方法,并利用该方法完成了该菌在平菇表层的动态监测。试验结果表明,实时荧光定量 PCR 对托拉斯假单胞杆菌的检测范围为 102～ 109cfu · mL-1,在经过选择性培养基富集后,检测灵敏度进一步提高了 100 倍。利用选择性培养基富集及荧光定量 PCR 检测方法,可在病害症状未显现之前检测到病原菌,为平菇细菌性褐斑病的流行监测和早期防治奠定了技术支持。

精制山杏壳木醋液防治平菇细菌性褐斑病药效试验

以"寿研平"平菇(Pleurotus ostreatus)为试材,托拉斯假单胞杆菌为试用菌,采用平板扩散法和田间防效法测定不同浓度的精制山杏壳木醋液对平菇细菌性褐斑病菌的抑菌活性及对平菇菌丝生长的影响。结果表明:筛选得到1.25%、2.50%、5.00%精制山杏壳木醋液均可有效抑制平菇细菌性褐斑病的发生,且可以促进平菇菌丝的生长;在田间施用过程中,可选用1.25%、2.50%精制山杏壳木醋液进行预防,在平菇细菌性褐斑病大面积发生时可用5.00%精制山杏壳木醋液进行控制。