桑白皮提取物抑制高迁移率族蛋白/Toll样受体4通路对肺炎支原体肺炎大鼠的保护机制

目的:探究桑白皮提取物对肺炎支原体(MP)肺炎大鼠的药效,以及对高迁移率族蛋白(HMGB-1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为对照组、MP肺炎模型组、阿奇霉素(阳性对照)组及桑白皮提取物低、中、高剂量组[2、4、8 g/(kg·d)],每组各12只。除对照组外,其余大鼠构建MP肺炎大鼠模型,并给予相应剂量的药物处理。显微镜下计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中炎性细胞因子水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;Western blotting法和免疫组化检测肺组织HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:对照组大鼠肺组织细胞排列正常,无病变;MP肺炎模型组大鼠肺组织异常,大量炎性细胞浸润;经桑白皮提取物给药后,大鼠肺组织损伤明显减轻,炎性细胞浸润明显减少。与对照组相比,MP肺炎模型组大鼠肺系数、BALF中炎性细胞计数、血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺组织中HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白水平升高,IL-10水平降低(P<0.05)。与模型组相比,桑白皮提取物各剂量组和阿奇霉素组大鼠上述指标趋势相反(P<0.05)。结论:桑白皮提取物可能通过抑制HMGB-1/TLR4信号通路,减轻炎症反应,发挥对MP肺炎大鼠的保护作用。

Toll样受体4信号通路在心力衰竭中的应用价值

心力衰竭是全球发病率最高的疾病之一,在心力衰竭及其合并症的发生和发展过程中炎症机制起着至关重要的作用。大量研究表明Toll样受体4信号通路可通过介导不同的炎症因子,对心肌造成损害。因此近期发现Toll样受体4信号通路可用于预测心力衰竭及其合并症病情的严重程度及预后,同时也可作为许多新型抗心力衰竭药物的靶点,改善症状,使心力衰竭患者获益。现就Toll样受体4信号通路在心力衰竭中上述两方面的应用价值做一综述。

Toll样受体4激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及其作用机制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制。方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只。构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次。然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理。处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关。

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

背景:炎症反应是诱发脑缺血再灌注损伤的重要因素之一。研究表明电针可有效降低缺血性脑卒中后炎症反应,改善神经功能缺损症状,但机制尚未明确。目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠Toll样受体4/核因子κB信号通路及炎性因子表达的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组16只,采用大脑中动脉线栓阻断法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型。造模24 h后对电针组大鼠行电针干预,每天1次,每次20 min,共5 d;假手术组和模型组不做任何干预。干预5 d后根据Longa法评定各组大鼠神经功能损伤程度;TTC染色和苏木精-伊红染色分别观察大鼠脑梗死体积及脑组织病理形态,荧光定量PCR和Western blot分别检测大脑皮质中Toll样受体4、核因子κB mRNA和蛋白表达;酶联免疫法检测血清中炎性因子白细胞介素6、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:①与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α水平、大脑皮质Toll样受体4、核因子κB mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分、大脑皮质Toll样受体4、核因子κB mRNA及蛋白表达,血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α水平明显降低(P<0.05,P<0.01);②与假手术组比较,模型组大鼠脑梗死体积明显增加(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠脑梗死体积减小(P<0.05);③模型组神经元排列紊乱,部分神经细胞消失,胞核固缩,结构不完整;电针组大脑皮质神经元变性及神经细胞数量丢失程度均有不同程度减轻;④结果表明,电针能明显改善脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经行为学,减轻脑组织损伤,有效降低血清炎性因子水平,其机制可能与抑制Toll样受体4/核因子κB信号通路有关。

Toll样受体4/核因子-κB p65通路对轮状病毒肠炎患儿肝损害的影响

目的探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p56通路对肝损害的影响。方法选取50例RV肠炎患儿为RV组,另选取同期50例RV感染阴性的肠炎患儿为对照组。采用全自动生化分析仪检测患儿肝功能指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。采用聚合酶链式反应(PCR)检测外周血单核细胞(PMBC)的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65蛋白表达水平。比较2组患儿血清AST、ALT水平和肝损害发生率。比较2组患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达。比较RV组中伴肝损害患儿和无肝损害患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析RV肠炎患儿肝功能与TLR4/NF-κB p65通路的相关性。结果RV组患儿血清AST、ALT水平及肝损伤发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组中,伴肝损害患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于无肝损害患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。RV肠炎患儿血清AST、ALT与TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论RV肠炎患儿肝损害发生率较高,且与TLR4/NF-κB p65通路相关。TLR4/NF-κB p65通路过度激活可能是RV肠炎患儿发生肝损害的原因之一。

铁皮石斛多糖与Toll样受体4互作机制的计算模拟

为研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)具有免疫活性片段的结构特征及与Toll样受体4(Toll⁃like receptor 4,TLR4)的相互作用机制,基于对TLR4结合腔的亲疏水性分析,将DOP寡糖的分为疏水片段筛选和亲水片段筛选,通过分子对接和分子动力学模拟,分析作用最强的DOP片段的结构特征及与TLR4的相互作用机制。结果表明,找到作用最强的DOP七糖片段,具有与经典底物脂多糖相似的结合模式,其中疏水性四糖片段结合在疏水结合腔,亲水性三糖片段结合在电正性区域。具有潜在免疫活性的铁皮石斛多糖可以由乙酰基修饰的疏水四糖片段和没有乙酰基修饰的亲水三糖片段组成,主要通过氢键和疏水作用与TLR4进行相互作用,发挥免疫活性。

金雀异黄酮通过Toll样受体4信号通路改善急性心肌梗死大鼠左心室功能的研究

目的基于Toll样受体4(TLR4)信号通路探讨金雀异黄酮(GEN)对急性心肌梗死(AMI)大鼠左心室功能的影响及潜在机制。方法100只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GEN(GEN,40 mg/kg)组、GEN+TAK242(TLR4抑制剂,10 mg/kg)组和GEN+LPS(TLR4激动剂,5 mg/kg)组,每组20只。采用结扎冠状动脉左前降支的方法构建AMI大鼠模型,经1次/d给药治疗4周后,通过心脏超声检测大鼠左心室功能;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、基质裂解素2(ST2)、脑利钠肽(BNP)水平;计算左心室质量指数(LVMI);苏木精-伊红(HE)染色法观察左心室心肌组织病理学改变;马森(Masson)染色法观察左心室心肌组织纤维化状况并计算胶原容积分数(CVF);ELISA法检测左心室心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;蛋白免疫印迹法检测TLR4、核因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果与模型组比较,GEN组左心室功能改善,左心室收缩末期内径(LVIDs)和左心室舒张末期内径(LVIDd)降低,左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)升高;血清AngⅡ、ST2、BNP水平和LVMI降低;左心室心肌组织病理性改变和纤维化状况均改善,CVF降低;心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低;TLR4、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。TAK242能够增强GEN对AMI大鼠上述指标的调控作用;LPS则能够阻断GEN对AMI大鼠各指标的调控作用。结论GEN具有抑制AMI大鼠心室重构,改善左心室功能的作用,其机制可能与抑制TLR4信号通路,减轻炎症反应,减少细胞外基质生成有关。

微小RNA-145-5p靶向Toll样受体4参与动脉粥样硬化泡沫细胞炎症和氧化应激反应

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对动脉粥样硬化细胞模型中炎性反应和氧化应激过程的调控作用。方法 体外构建人单核细胞白血病细胞源性泡沫细胞,分为模型组和对照组,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞内miR-145-5p相对表达。采用TargetScan数据库预测miR-145-5p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系。将293T细胞分为野生型+模拟物(mimic)组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物)、野生型+mimic NC组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照)、突变型+mimic组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物)、突变型+mimic NC组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照),采用双荧光素酶实验验证miR-145-5p与TLR4的靶向关系。体外诱导泡沫细胞,分为mimic组(转染miR-145-5p模拟物)、mimic NC组(转染模拟物阴性对照)、抑制物(inhibitor)组(转染miR-145-5p抑制物)、inhibitor NC组(转染抑制物阴性对照),采用qRT-PCR、Western blot检测TLR4 mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-6表达,生化相关试剂盒测定活性氧、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组比较,模型组miR-145-5p表达明显降低(0.29±0.01 vs 1.00±0.08,t=11.180,P<0.01)。双荧光素酶实验显示,miR-145-5p mimic组荧光素酶活性较mimic NC组显著降低,差异有统计学意义(t=8.612,P<0.01)。与mimic NC组比较,mimic组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显降低,miR-145-5p表达、SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01)。与inhibitor NC组比较,inhibitor组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显升高,miR-145-5p表达、SOD活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 miR-145-5p通过靶向TLR4抑制动脉粥样硬化细胞模型中的炎症和氧化应激反应。

敷和汤对特应性皮炎小鼠Toll样受体4/核因子-κB通路调控辅助性T细胞1/辅助性T细胞2的作用及机制研究

目的基于Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨敷和汤对特应性皮炎(AD)小鼠模型的作用及辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)免疫平衡的机制。方法将40只BALB/c小鼠采用随机数字表法分为四组:对照组、模型组、地氯雷他定组、敷和汤组,每组10只,除正常组外,其余各组均用2,4-二硝基氟苯(DNFB)刺激。在DNFB刺激后的第14天各组给予相应药物治疗14 d。治疗后观察各组小鼠皮损变化;记录10 min内小鼠搔抓次数;测量胸腺、脾脏指数;苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织病理形态学改变;免疫组化检测TLR4阳性蛋白;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测小鼠皮肤组织中核因子-κB P65(NF-κB P65)、TLR4、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)的mRNA水平变化。结果与正常组相比,模型组小鼠皮损严重、表皮明显增生、角化过度、大量炎性细胞浸润;小鼠搔抓次数(12.80±1.32)次/10分钟和皮损评分(4.00±0.67)分、脾脏和胸腺指数分别为42.53±2.04和35.76±2.01,免疫组化检测TLR4阳性蛋白为97.20±12.19;血清IgE、IL-4、IL-6和TNF-α水平分别为(302.39±46.60)μg/L、(239.54±29.23)ng/L、(249.94±33.62)ng/L、(310.01±50.09)ng/L,皮损NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达分别为(6.70±0.38、7.45±0.30、4.03±0.57、3.35±0.35、5.31±0.12、41.21±1.17)显著升高(均P<0.05);敷和汤组给药14 d后小鼠搔抓次数(4.30±0.67)次/10分钟和皮损评分(1.40±0.52)分、脾脏和胸腺指数分别为29.11±1.61和22.02±1.15,免疫组化检测TLR4阳性蛋白为70.85±7.76;血清IgE、IL-4、IL-6和TNF-α水平分别含量为(183.89±11.74)μg/L、(112.67±9.233)ng/L、(121.88±10.84)ng/L、(153.24±12.78)ng/L,皮损NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达分别为(2.87±0.15、2.23±0.31、2.57±0.46、2.39±0.19、2.35±0.21、23.27±2.44)低于模型组(均P<0.05);地氯雷他定组给药14 d后小鼠搔抓次数(5.30±0.67)次/10分钟和皮损评分(1.80±0.63)分、脾脏和胸腺指数分别为27.23±1.19和20.10±1.20,免疫组化检测TLR4阳性蛋白为77.28±5.77;血清IgE、IL-4、IL-6和TNF-α水平含量分别为(175.97±13.12)μg/L、(116.07±9.48)ng/L、(112.11±8.89)ng/L、(143.90±10.83)ng/L,皮损NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达分别为(2.53±0.08、3.46±0.28、2.03±0.11、1.52±0.22、2.15±0.19、23.52±1.24)低于敷和汤组(均P<0.05)。结论敷和汤通过NF-κB通路的激活抑制相关炎症因子反应以及调节Th1/Th2发挥免疫稳定的作用,促进皮损修复,从而达到治疗的作用。

C-X-C趋化因子受体4增强Toll样受体2在肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化病变形成中的作用

[目的]探究C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在肺炎衣原体(C.pn)感染促进动脉粥样硬化(As)病变形成中的作用。[方法]以高脂饮食为基础,建立C.pn感染诱导ApoE^(-/-)、ApoE^(-/-)+Toll样受体2(TLR2)^(-/-)、ApoE^(-/-)+TLR2^(-/-)+AMD3100小鼠As模型,ELISA检测ApoE^(-/-)小鼠血清C.pn IgG、IgM抗体水平,PCR检测肺组织C.pn特异性DNA,油红O染色和HE染色观察主动脉及主动脉根部脂质沉积和As病变面积,比色法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平,ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量。[结果]ApoE^(-/-)小鼠C.pn感染模型成功建立。与对照组相比,C.pn感染后ApoE^(-/-)小鼠主动脉及主动脉根部脂质沉积量增加89.08%和71.83%,As病变面积增加34.12%(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少46.16%和75.73%,As病变面积减少63.37%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少26.19%和56.94%,As病变面积则减少22.24%(均P<0.05)。与对照组相比,C.pn感染后血清TC、TG和LDLC水平分别升高0.62倍、1.43倍和1.34倍,血清IL-1β和IL-6含量分别增加4.10倍和6.00倍(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低56.96%、50.41%和66.64%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少66.72%和69.54%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低52.18%、58.56%和60.61%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少28.84%和43.18%(均P<0.05)。[结论]CXCR4可增强TLR2在升高血脂水平及炎症因子含量中的作用,进而参与C.pn感染诱导的As病变形成。

Toll样受体4基因单核苷酸多态性与白内障发病的相关性研究

目的研究Toll样受体4(TLR4)基因单核苷酸多态性(SNPs)与白内障发病的相关性。方法收集皖南医学院第二附属医院2021年1—12月100例年龄相关性白内障(ARC)病例为观察组,86例年龄、性别相匹配的无亲属关系的健康志愿者为对照组,采用单碱基延伸法(SNaPshot)对TLR4两个SNPs位点rs4986790及rs4986791进行基因分型,检验两组2个SNPs基因型与等位基因频率,分离被研究对象外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附法(ELISA)检测其PBMC上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,分析其与ARC病人TLR4基因SNPs之间的关系。结果Hardy-Weinberg平衡试验结果提示,两组病人TLR4基因rs7986790位点及rs4986791位点的基因型频率分布实际值与理论值符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05);观察组与对照组TLR4基因rs7986790位点基因型及其等位基因占比比较,差异有统计学意义(P<0.05)。rs7986790基因分型为GA及GG者PBMC上清液中TNF-α及IL-6水平[(22.36±4.15)μg/L、(846.69±179.68)ng/L]均高于基因型为AA者[(17.02±2.36)μg/L、(613.45±163.59)ng/L](P<0.05)。结论ARC病人TLR4基因rs7986790位点基因型分布与正常者间存在差异,rs7986790位点等位基因G可能通过促进炎症反应,增加ARC患病风险。

加味芍药甘草汤基于Toll样受体4/核因子κB信号通路对多囊卵巢综合征大鼠妊娠结局及免疫机制的影响

目的观察加味芍药甘草汤基于Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠妊娠结局及免疫机制的影响。方法将80只大鼠按照随机数字表法分为2组,空白组10只和造模组70只。造模组制备PCOS大鼠模型,将造模成功的70只大鼠按照随机数字表法分为7组,模型组10只予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,加味芍药甘草汤低、中、高剂量组各10只,分别予加味芍药甘草汤12.5、25.0、50.0 g/kg灌胃,炔雌醇环丙孕酮片组10只予炔雌醇环丙孕酮片0.2035 g/kg灌胃,抑制剂组10只经尾静脉注射TAK-24210 mg/kg,联合组10只予加味芍药甘草汤50 g/kg灌胃同时尾静脉注射TAK-24210 mg/kg。空白组大鼠予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。检测各组大鼠体质量和卵巢质量;检测各组大鼠T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+);观察各组大鼠卵巢组织中TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;比较各组大鼠妊娠率和各组孕鼠胚泡着床数。结果与空白组比较,模型组体质量和卵巢质量均升高(P<0.05),CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低(P<0.05),CD8^(+)升高(P<0.05),TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数均降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠体质量和卵巢质量均降低(P<0.05),各给药组大鼠CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,CD8^(+)均降低(P<0.05),卵巢组织中TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数均升高(P<0.05);加味芍药甘草汤低、中、高剂量组体质量和卵巢质量、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达、妊娠率和胚泡着床数组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);加味芍药甘草汤高剂量组、炔雌醇环丙孕酮片组和抑制剂组大鼠体质量和卵巢质量、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达、妊娠率和胚泡着床数比较差异均无统计学意义(P>0.05);与加味芍药甘草汤高剂量组比较,联合组大鼠体质量和卵巢质量均降低(P<0.05),CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高(P<0.05),CD8^(+)降低(P<0.05),TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数升高(P<0.05)。结论加味芍药甘草汤可调节PCOS大鼠免疫功能,增加PCOS大鼠妊娠率和胚泡着床率,抑制卵巢组织中TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达。

输尿管镜碎石术后发热性尿路感染危险因素及血清β防御素2高迁移率族蛋白B1 Toll样受体4早期预测价值

目的 探讨泌尿结石疾病采取输尿管镜碎石术治疗术后发生发热性尿路感染的相关危险因素,观察血清β防御素2、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)以及Toll样受体4(TLR4)对早期预测尿路感染的价值。方法 回顾性分析122例行输尿管镜碎石术治疗者的临床资料,根据术后是否发生发热性尿路感染分成感染组与未感染组,记录患者资料,分析危险因素,此外采集2组血液分离血清,测定血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平。结果 术后35例(28.7%)发生发热性尿路感染,多因素分析显示年龄≥60岁、手术时间≥60 min、泌尿道手术史、合并糖尿病、导尿管留置时间≥72 h、住院时间≥7 d均是输尿管镜碎石术患者术后发热性尿路感染独立危险因素(P=0.023、0.014、0.016、0.019、0.008、0.011,OR值=2.154、3.021、2.451、2.331、2.025、2.415);感染组血清β防御素2、HMGB1、TLR4检测水平高于未感染组(t=10.48、28.47、22.86,P<0.05)。结论 输尿管镜碎石术,年龄、手术时间、泌尿手术室、合并糖尿管、导尿管留置与住院时间为术后发热性尿路感染的相关危险因素,需加强防范,术后通过检测血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平对早期预测感染价值突出,值得推广。

Toll样受体4、降钙素原、高迁移率族蛋白B1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、降钙素原(PCT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。方法根据颅内肿瘤切除术后是否并发重症肺炎将65例颅内肿瘤患儿分为观察组(n=30,并发重症肺炎)和对照组(n=35,未并发重症肺炎)。收集两组患儿的临床资料,采用Logistic回归模型分析颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析TLR4、PCT、HMGB1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。结果单因素分析结果显示,观察组中术前格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、重症监护室(ICU)住院时间≥7天的患儿比例及TLR4、PCT、HMGB1水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,术前GCS评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、ICU住院时间≥7天及TLR4、PCT、HMGB1升高均是颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,TLR4、PCT、HMGB1预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的AUC分别为0.838、0.955、0.827。结论TLR4、PCT、HMGB1可作为预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的重要指标。

Relationship of Toll-Like Receptors 2 and 4 Gene Polymorphisms with Essential Hypertension in Chinese Han Population

Objective: There are numerous studies suggesting that genetic polymor-phisms of inflammation factors Toll-like receptors 2 and 4 (TLR2, TLR4) might play a role in the pathophysiological process of hypertension. In this study, we evaluated the association in a sample of members of the Chinese Han population. Method: We selected four single nucleotide polymor-phisms (SNP) of TLR2 (rs3804099, rs3804100, rs7656411) and TLR4 (rs1927906) genes, and measured the distributions of genotypic and allelic frequencies in 1063 participants, including 391 essential hypertension pa-tients and 672 controls. Result: No significant differences in the genotypic and allelic frequencies of the four SNPs were detected between cases and controls. However, three haplotypes, CCG, TTG and TTT of TLR2, were significantly associated with a decrease in the risk of essential hyperten-sion (OR: 0.512, 95% CI: 0.397 - 0.660, P P = 0.0038;OR: 0.797, 95% CI: 0.667 - 0.952, P = 0.0122, respectively). Inversely, the risk of essential hypertension increased sig-nificantly in patients with the CTG, TCG or TCT haplotypes (OR: 2.924, 95% CI: 2.157 - 3.963, P P P Conclusion: Our study suggested that haplotypes (CCG, TTG, TTT, CTG, TCG and TCT) of TLR2 might have profound effects on the development of essential hypertension in the Chinese Han population.

尖锐湿疣患者皮损组织中Toll样受体4、核因子κB p65蛋白表达及临床意义

目的探讨尖锐湿疣患者皮损组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及临床意义。方法选取2020年1月至2022年8月在江苏省南通市第三人民医院(以下简称“我院”)治疗的尖锐湿疣患者92例作为观察组,另选取同期于我院行包皮环切术的成年男性55例及外阴整形术的成年女性37例作为对照组,采用免疫组织化学染色检测观察组的皮损组织及对照组的皮肤组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达,比较两组TLR4、NF-κB p65蛋白表达的差异,并进一步分析观察组不同临床特征患者TLR4、NF-κB p65蛋白表达的差异。结果观察组TLR4、NF-κB p65蛋白表达阳性率高于对照组(P<0.05)。病程≥3个月、疣体数目≥10个、疣体最大直径≥10 mm患者的TLR4蛋白表达阳性率高于病程<3个月、疣体数目<10个、疣体最大直径<10 mm患者(P<0.05)。疣体数目≥10个、疣体最大直径≥10 mm患者NF-κB p65蛋白表达阳性率高于疣体数目<10个、疣体最大直径<10 mm患者(P<0.05)。结论尖锐湿疣患者皮损组织中TLR4、NF-B p65蛋白呈高表达,可能与疣体数目、疣体最大直径及病程有关。

高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

粉防己碱调节Toll样受体4/核因子-kB通路在子痫前期大鼠模型中的影响

目的探究粉防己碱(Tet)调节Toll样受体4(TLR4)/核因子(NF)-κB通路对子痫前期(PE)大鼠模型的影响。方法20只SPF级Wistar雄性大鼠,40只雌性大鼠,进行PE大鼠建模,将20只妊娠大鼠随机分为两组,即A组与B组,每组10只;A组分为PE-1组与PE+Tet-1组,每组5只;B组分为PE-2组与PE+Tet-2组,每组5只。比较PE+Tet-1组与PE-1组、PE+Tet-2组与PE-2组妊娠各时间点血压、尿蛋白及胎盘重量、胎鼠重量、炎症因子、TLR4和NF-κB蛋白表达。结果妊娠第10天,PE+Tet-1组与PE-1组血压比较差异无统计学意义;妊娠第15、20天,PE+Tet-1组血压均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10、15天,PE+Tet-2组与PE-2组血压比较差异无统计学意义;妊娠第20天,PE+Tet-2组血压低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10天,PE+Tet-1组与PE-1组24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义;妊娠第15、20天,PE+Tet-1组24 h尿蛋白水平均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10、15、20天,PE+Tet-2组与PE-2组24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义。PE+Tet-1组胎盘和胎鼠重量均大于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组胎盘和胎鼠重量均大于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。PE+Tet-1组IL-6、TNF-α水平均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组IL-6和TNF-α水平均低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。PE+Tet-1组TLR4和NF-κB蛋白水平均明显低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组TLR4和NF-κB蛋白水平均明显低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Tet调节TLR4/NF-κB通路对PE大鼠模型,可降低PE模型大鼠的血压,减少24 h尿蛋白,增加胎盘和胎鼠质量,促进胎鼠发育,抑制炎症因子的表达。

白术内酯Ⅰ对病毒性心肌炎小鼠Toll样受体4的调控作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)对病毒性心肌炎(VM)小鼠的治疗作用及其对Toll样受体4(TLR4)的影响。方法:通过对C57BL/6小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导VM小鼠模型,并随机分为5组:Control组、VM组、VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组,每组12只。Control组小鼠为正常饲养的小鼠,其他组小鼠为VM建模小鼠。VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组小鼠分别灌胃0.5 ml 60、120和240 mg/kg的ATR-Ⅰ溶液;Control组和VM组小鼠分别灌胃0.5 ml 0.5%羧甲基纤维素钠溶液。各组小鼠均灌胃7 d。使用超声仪器检测各组小鼠的舒张期内径(LVIDd)、左心室收缩期内径(LVIDs)、左心室短轴缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)。ELISA和qRT-PCR检测血清和心肌组织中IL-1β、IL-6及TNF-α水平。然后对小鼠心肌组织进行HE染色和Masson三色染色。qRT-PCR或Western blot检测心肌组织中TLR4、NF-κB p65及p-NF-κB p65的mRNA或蛋白水平。结果:与VM组相比,VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组中LVIDd和LVIDs降低,FS和LVEF升高(P<0.05);与VM组相比,VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组血清和心肌组织IL-1β、IL-6及TNF-α水平降低(P<0.05)。心肌损伤程度均呈剂量依赖性减轻。各组小鼠心肌组织中NF-κB p65蛋白水平差异无统计学意义(F=0.219,P=0.927)。与VM组相比,VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组心肌组织TLR4mRNA和蛋白水平及p-NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论:在CVB3诱导的VM小鼠模型中,ATR-Ⅰ可剂量依赖性地抑制心肌炎症,减轻心肌损伤并改善心功能,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

高血压脑出血患者血清微小RNA-93、Toll样受体4表达及其与患者短期预后的相关性

目的探讨高血压脑出血患者血清微小RNA-93(miR-93)、Toll样受体4(TLR4)表达水平与短期预后的相关性。方法选取2019年12月至2020年12月榆林市第一医院接收的104例高血压脑出血患者为观察组,根据入院时格拉斯哥昏迷评分将患者分为轻度亚组、中度亚组、重度亚组,治疗4个月后根据格拉斯哥预后量表(GOS)评分将患者分为预后良好组69例和预后不良组35例;同期对照组选本院98例健康体检者。收集观察组及对照组性别、年龄、合并症等一般资料,检测血清miR-93、TLR4水平;分析高血压脑出血患者血清miR-93与TLR4水平相关性;分析影响高血压脑出血患者预后的因素。结果重度亚组血清TLR4水平高于中度亚组、轻度亚组和对照组,miR-93水平低于中度亚组、轻度亚组和对照组(F=712.900、105.700,P<0.01);中度亚组血清TLR4水平高于轻度亚组和对照组,miR-93水平低于轻度亚组和对照组(P<0.01);轻度亚组血清TLR4水平高于对照组,miR-93水平低于对照组(P<0.01)。轻度亚组、中度亚组和重度亚组高血压脑出血患者血清miR-93与TLR4水平均呈负相关(r=-0.530、-0.502、-0.447,P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清TLR4水平、出血量、合并高脂血症、合并感染、合并消化道出血、出血破入脑室患者比例较高,血清miR-93水平降低(t/χ^(2)=36.216、9.999、4.757、12.671、10.668、7.597、14.599,P<0.05)。TLR4是高血压脑出血患者预后不良的危险因素[OR(95%CI)=2.714(1.712~4.302),P<0.01],miR-93是高血压脑出血患者预后不良的保护因素[OR(95%CI)=0.879(0.839~0.921),P<0.01]。结论高血压脑出血患者血清miR-93水平较低、TLR4水平较高,且两者对患者病情评估及预后评估可能有一定价值。