广东番茄曲叶病毒G3分离物基因组DNA-A的分子特征

从采集于广东花都的番茄曲叶病病株上分离到病毒分离物ToLCGDV-[G3],序列分析结果表明,其DNA-A为单链环状,全长2744 nt,共有6个ORFs,其中病毒链上编码AV1(CP)、AV2,互补链上编码AC1、AC2、AC3和AC4.BLAST结果显示,与ToLCGDV-[G3]基因组有同源关系的均属双生病毒科菜豆金色花叶病毒属.进一步比较结果表明,ToLCGDV-[G3]与有同源性的菜豆金色花叶病毒属病毒的DNA-A全序列同源率最高为87.9%.其中IR的同源率为59.0%～85.3%,而AW、AV2、AC1、AC2、AC3和AC4这6个ORFs同源率分别为73.6%～95.2%、64.0%～95.4%、71.7%～87.7%、69.6%～93.9%、67.7%～95.1%和64.1%～94.2%,它们各自编码的氨基酸序列同源率分别为76.3%～99.2%、52.6%～95.7%、69.7%～88.1%、51.9%～88.9%、63.4%～92.5%和33.0%～90.7%.系统进化关系分析结果显示,ToLCGDV-[G3]与ToLCGDV-[G2]亲缘关系最近,二者组成一个独立的分支,与其它40种菜豆金色花叶病毒属病毒的亲缘关系均较远.因此,ToLCGDV-[G3]可能是一个先前未报道的双生病毒科菜豆金色花叶病毒属新种.

广东番茄黄化曲叶病毒AC2基因的原核表达及抗血清制备

利用PCR方法从广东番茄黄化曲叶病毒分离物G3(Tomato yellow leaf curl Guang dong virus-[G3],TYLCGuV-[G3])全长序列的重组质粒上扩增该病毒的AC2基因,将其构建至原核表达载体pET-28b(+)上,经IPTG诱导,在大肠埃希菌Rosetta(DE3)Ⅲ中高效表达.SDS-PAGE电泳结果显示,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为19 500.以诱导的融合蛋白为抗原,免疫注射新西兰大耳白兔制备抗血清,间接ELISA测定抗血清效价为1∶16 384.Western-blotting检测结果表明,制备的抗血清有较好的抗原-抗体识别反应,为专化性抗血清.

广东番茄曲叶病毒G2分离物基因组DNA-A的分子特征

从采集于广东的番茄曲叶病病株上分离到病毒分离物G2 ,序列分析结果表明 ,其DNA_A为单链环状 ,全长2 74 4nt,共有 6个ORF ,其中病毒链上编码AV1(CP)、AV2 ,互补链上编码AC1、AC2、AC3和AC4。BLAST结果显示 ,与G2基因组有同源关系的病毒均属双生病毒科菜豆金色花叶病毒属。序列比较结果显示 ,G2与菜豆金色花叶病毒属病毒的DNA_A序列同源率均不超过 83% ,其中同源率最高的是PaLCuCNV_[G10 ](82 8% )。进一步比较发现 ,它们的基因间隔区 (IR)变异最大 (同源率为 30 9%～ 81 8% ) ;CP氨基酸序列的同源率较高 (77 6 %～ 99 2 % ) ,AC4蛋白氨基酸序列的同源率较低 (4 3 5 %～ 78 8% )。系统进化关系分析结果也显示 ,G2与已报道的菜豆金色花叶病毒属病毒的亲缘关系均较远。因此 ,G2可能是双生病毒科菜豆金色花叶病毒属中一个未报道的新种 ,命名为广东番茄曲叶病毒 (TomatoleafcurlGuangdongVirus ,ToLCGDV)