利用种子红色荧光标记鉴定转基因番茄后代

转基因技术有助于番茄基因功能研究和遗传改良,其中转基因后代的筛选是一个非常重要但工作量大的环节。本研究基于番茄油体蛋白基因家族序列分析和番茄基因表达数据库SGN-TEA搜索结果,克隆了一个种子特异且高水平表达的油体蛋白基因SlOLE1(Solyc06g034040)。利用无缝克隆的方法将红色荧光蛋白基因TagRFP的编码区序列插入到SlOLE1基因的终止密码子前,形成一个嵌合基因SlOLE1-TagRFP。将嵌合基因插入到pBI121双元载体,构建植物表达载体pSlOLE1-TagRFP,利用农杆菌介导法转化番茄品种‘Money Maker’,T_(0)代植株的自交种子在荧光显微镜下呈现出明亮红色荧光或无荧光。PCR分子标记进一步验证发现,红色荧光种子萌发的幼苗均存在TagRFP序列,表明在种子阶段检测红色荧光筛选转基因番茄后代的准确率为100%。由此,本研究建立了一种利用SlOLE1-TagRFP嵌合基因,可以通过种子红色荧光可视化分析,简单快速、低成本地鉴定转基因番茄后代的方法。

采用微射流处理改变番茄籽分离蛋白的理化性质及结构

碱溶酸沉法所制备的番茄籽分离蛋白,其溶解性等功能性质较差。以番茄籽分离蛋白为原料,研究微射流均质对其功能性质及结构的影响。结果表明:微射流均质过程中番茄籽分离蛋白的结构变化与其功能性质的改变存在关联。微射流均质提高了番茄籽分离蛋白的溶解性、乳化性及乳化稳定性;均质后的番茄籽蛋白粒径更小,分布更均匀;暴露巯基和总巯基含量减少;分子内部疏水基团暴露,表面疏水性提高;蛋白晶体结构变化不大;蛋白质的二级结构发生了变化,α-螺旋、无规卷曲、β-转角均减少,而β-折叠增加。这些变化说明,微射流均质处理使蛋白分子发生了伸展或折叠,从而改变其功能性质。

番茄籽蛋白的提取工艺

经脱油的番茄籽采用碱提酸沉工艺,通过正交和优化试验提取番茄籽蛋白,得到了番茄籽蛋白提取的最佳工艺:pH8.5,50℃,搅拌时间30min,料液比1:50(w/v)下碱提番茄籽蛋白,经pH4.5盐酸沉淀,再复溶至pH8.5进行冷冻干燥,番茄籽蛋白总提取率为43.31%,纯度为82.06%。

番茄籽蛋白的功能和结构

蛋白经加水溶解(5%W/V)和加热至50℃,氮溶指数NSI最高为30.02%。对可溶性番茄籽蛋白功能性质的测定表明,当乳化温度由30℃上升至50℃时,其乳化能力和乳化稳定性均随之上升,而当乳化温度上升至60℃时,乳化能力和乳化稳定性均显著下降;其起泡性略优于大豆分离蛋白,而泡沫稳定性不如大豆分离蛋白。对番茄籽蛋白的氨基酸组成分析表明,番茄籽蛋白氨基酸种类齐全,可以作为强化赖氨酸的蛋白源。SDS-PAGE电泳图显示,可溶性番茄籽蛋白中70%为盐溶性蛋白,水溶性蛋白相对分子质量分别为39.2、30.1和15.8kDa;盐溶性蛋白相对分子质量分别为66.1、28.1和16.8kDa;醇溶性蛋白相对分子质量分别为30.3和17.8kDa。

番茄籽蛋白酶解产物的功能特性研究

以番茄籽蛋白为原料,研究不同蛋白酶对番茄籽蛋白水解物功能性质的影响并与原蛋白的功能性质进行比较。结果表明:不同蛋白酶水解番茄籽蛋白的规律相似,水解度随时间增加而提高,但在相同时间内,不同水解物的水解度不同,说明不同的蛋白酶对番茄籽蛋白的水解效率不同,其中碱性蛋白酶水解效率最高14.48%;木瓜蛋白酶可较高效地回收番茄籽蛋白,蛋白回收率高达81.12%;番茄籽分离蛋白经酶解改性后其表面疏水性降低,但溶解性和乳化性均有不同程度的提高,其中胰蛋白酶水解物的溶解性最好;木瓜蛋白酶水解物的乳化性能最优。因此,酶法水解可改善番茄籽蛋白的功能性质,且不同蛋白酶对蛋白的功能性质的影响不同,可根据实际需要选择蛋白酶。

叶霉粗毒素对番茄幼苗CAT酶及保护性物质的影响

以番茄叶片为材料,研究了番茄不同抗、感品种于苗期经叶霉病菌粗毒素处理后,叶部细胞CAT酶及保护性物质的动态变化。结果表明,经叶霉病菌毒素处理后,抗、感品种叶部细胞内CAT酶活性均降低,抗病品种(中杂8号)下降比率大于感病品种(823番茄),但抗病品种的CAT酶活性高于感病品种;从平均水平上看,两品种处理的可溶性糖含量均较对照增加,而Vc含量和可溶性蛋白含量均较对照下降;处理后,抗病品种的可溶性糖含量和可溶性蛋白含量均高于感病品种,Vc含量二者相当。

番茄皮渣组成与利用价值研究

番茄皮渣是生产番茄酱（汁）后的废弃物，主要由种子和果皮组成。作者分析了种子和果皮的主要成分，矿质元素含量，蛋白质氨基酸组成、测定结果表明，种子含脂肪２４．５５％，可用以开发番茄籽油；脱脂种籽蛋白质含量达到３７．５７％，富含谷氨酸、天门冬氨酸、赖氨酸等。番茄皮渣富含钙、镁、磷、钾、钠等矿质元素。番茄种籽是开发高钙。高赖氨酸蛋白质的理想原料，对各类食物具有双重强化作用；番茄果皮的膳食纤维含量６９．７９％，是开发高钙型膳食纤维的潜在原料．

高温胁迫对番茄种子萌发的影响

当温度高于 2 5℃时 ,随温度上升 ,番茄种子活力下降 ;33℃时 ,种子的萌发在前 6d受到抑制 ,7d后萌发率上升 ;在35℃时 ,种子萌发几乎完全被抑制。在 30℃萌发的种子中 SOD和 POD活性较高 ,33℃萌发种子中的蛋白质含量较 2

蕃茄加工废弃物的综合利用(2)──速溶蛋白营养精的研制

速溶蛋白营养精是以蕃茄加工废弃物-蕃茄籽为主要原料，以甜味剂、营养强化剂、品质改良剂等为辅料，经过调等电点提取蛋白、混合配料、泡沫真空干燥等多道工序加工而成的新型植物蛋白饮料．本文就研制速溶蛋白营养精的工艺流程、加工原理加以介绍．

三种新型肥料对番茄种子萌发的影响

为探讨不同新型肥料对番茄种子萌发的影响,以番茄种子(YUAN335)为试材,测定三种新型肥料(甲壳素、鱼蛋白、三十烷醇)对番茄种子发芽相关生理指标的影响。结果表明,与CK相比,0.01~1 mg/L浓度甲壳素处理的种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均高于CK,1 mg/L时效果最佳,高于1 mg/L时则抑制种子萌发,但在发芽后期能显著促进根和根毛的生长,说明甲壳素在一定浓度范围内能促进种子萌发;当鱼蛋白浓度为1~7 g/L时,发芽率和发芽势都随浓度的升高而升高;当鱼蛋白浓度为1~3 g/L时,促进根伸长,但鱼蛋白处理组所有浓度都抑制根毛生长;三十烷醇处理对根长和根毛生长存在抑制作用,随着浓度的增加抑制作用增强。综上,甲壳素和鱼蛋白在适宜浓度均可促进番茄种子的萌发,其中甲壳素在促进种子萌发和根系生长效果方面最为显著,三十烷醇对番茄种子萌发没有促进作用。

AOT(Tween 80)/异辛烷反胶束体系在萃取番茄籽蛋白中的应用研究

利用AOT(Tween 80)/异辛烷反胶束体系萃取番茄籽蛋白,考察了原料的蛋白含量,讨论了温度、W0、助表面活性剂吐温80用量、浓度、pH值、加料量对蛋白萃取率的影响。实验结果表明较好的工艺条件为:在40℃的超声振荡下,AOT浓度为0.08g/mL、W0为20时,助表面活性剂吐温80和异辛烷的体积比为1∶100、KCl浓度为0.1mol/L、pH值在8.0、加料量为0.02g/mL时蛋白萃取率达到47%。