基于Caspase-3/PARP通路探究龟鹿二仙胶及拆方对IL-1β诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 基于半胱氨酸蛋白酶3/多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Caspase-3/PARP)通路探究龟鹿二仙胶及拆方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的退变软骨细胞凋亡及细胞外基质(ECM)的影响。方法 采用SD大鼠制备空白血清、龟鹿二仙胶含药血清、龟甲胶含药血清及鹿角胶含药血清,采用酶消法体外培养C57BL/6小鼠软骨细胞。将软骨细胞分为5组,空白组加入空白血清培养,模型组加入IL-1β和空白血清培养,龟鹿组加入IL-1β和龟鹿二仙胶含药血清培养,龟板组加入IL-1β和龟甲胶含药血清培养,鹿角组加入IL-1β和鹿角胶含药血清培养,干预24 h后,采用CCK-8法检测软骨细胞活性,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况,采用免疫荧光染色法检测Caspase-3、PARP-1表达情况,分别采用Western blot和qRT-PCR法检测细胞中Caspase-3、PARP-1、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白及mRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性明显降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,龟鹿组、龟板组及鹿角组软骨细胞活性均明显升高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与龟板组、鹿角组比较,龟鹿组软骨细胞活性更高(P均<0.05),软骨细胞凋亡率更低(P均<0.05);细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度和Caspase-3、PARP-1、MMP-13蛋白及mRNA相对表达量均更低(P均<0.05),细胞中Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。与龟板组比较,鹿角组软骨细胞活性,软骨细胞凋亡率,细胞中Caspase-3、PARP-1平均荧光强度,细胞中Caspase-3、PARP-1、MMP-13、Aggrecan蛋白及mRNA相对表达量高均更高(P均<0.05)。结论 龟板胶可抑制软骨细胞凋亡及ECM降解,鹿角胶可促进软骨细胞增殖和ECM合成代谢,龟鹿二仙胶作用效果优于龟板胶及鹿角胶,作用机制可能与激活Caspase-3/PARP信号通路有关。

龟板固本方对肺癌骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期及凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究龟板固本方对肺癌骨髓抑制小鼠骨髓细胞DNA周期和凋亡相关蛋白的影响,探讨其促进骨髓抑制肺癌小鼠造血功能恢复的分子机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、龟板固本方组、粒细胞刺激因子组,每组15只。除空白组外,其他3组接种Lewis肺癌细胞建立肺癌模型,然后腹腔注射环磷酰胺制备肺癌骨髓抑制模型。造模完成后24 h开始给药,龟板固本方组给予龟板固本方悬液0.4 mL灌胃,空白组和模型组给等量生理盐水灌胃,粒细胞刺激因子组皮下注射重组人粒细胞刺激因子注射液5 ng/g,均1次/d,连续7 d。处死小鼠,采用流式细胞仪检测骨髓细胞周期,免疫组化法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。结果与模型组比较,龟板固本方组和粒细胞刺激因子组G_(0)/G_(1)期细胞比例和骨髓细胞中Bax蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),S期细胞比例、G_(2)/M期细胞比例和骨髓细胞中Bcl-2蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);与粒细胞刺激因子组比较,龟板固本方组S期细胞比例和骨髓细胞中Bcl-2蛋白表达量均较低(P均<0.05)。结论龟板固本方可通过上调骨髓细胞中Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达,抑制骨髓细胞凋亡,使骨髓细胞进入S期和G_(2)/M增殖周期,促进骨髓细胞增殖,从而改善骨髓抑制。

中药材龟甲及原动物的高特异性PCR鉴定研究

目的:建立一种简便、实用的龟甲药材DNA 分子鉴定方法。方法:根据22 种亚洲产龟类的线粒体12SrRNA 基因片段序列,设计一对专用于鉴定中药材龟甲原动物乌龟的鉴别引物,用该对引物扩增从乌龟和其他18 种龟共48 个样品的DNA 模板。结果:在72℃的复性温度下进行PCR,4 个乌龟的模板DNA 均得到约180 bp 的阳性扩增带,而其他各龟的模板DNA,在同样条件下无扩增产物,用这对鉴别引物经一次PCR 反应便可准确地鉴定受试原动物是否为乌龟。同法对江苏省药品检验所提供的17 块样品龟甲进行了鉴定,结果表明只有4 块样品为正品,其余皆为伪品,与性状鉴定和DNA序列分析鉴定结果完全一致。结论:所设计的鉴别引物对乌龟有高度特异性。

中药龟鳖甲的商品鉴定

目的 :鉴定鳖甲、龟甲类商品药材。方法 :形态鉴定及差热分析法。结果 :发现鳖甲伪品 2种 ,龟甲伪品 3种 ,并提出鳖甲、龟甲类药材的形态和差热鉴定特征。结论 :目前市售的海鳖甲系伪品鳖甲 ,其原动物为产于南亚地区的缘板鳖及鼋 ,花龟、海龟及太平洋丽龟甲为伪品龟甲 ;利用形态及差热分析特征可将鳖甲、龟甲与其伪品准确区分开。

补肾法诱导间充质干细胞向神经方向分化研究

目的 在干细胞具先天之精属性新理论指导下 ,探讨补肾中药龟板对间充质干细胞的体外诱导作用。方法 体外分离培养间充质干细胞 ,以龟板水煎液对其进行体外诱导 ,免疫组化鉴定NSE、Nestin、GFAP等标志。结果 龟板可体外诱导间充质干细胞转分化为神经干细胞 ,但还没有被诱导为神经元样细胞与星形胶质细胞。结论 补肾法可促进干细胞之间的相互转换 ,初步验证了干细胞具先天之精属性新理论。

龟板中脂肪酸的GC-MS分析

目的： 采用ＧＣ－ ＭＳ法对乌龟板和黄喉拟水龟板中的脂肪酸进行分析。方法： 分别对２ 种龟板提取的甲酯化样品进行ＧＣ－ ＭＳ 分析， 质谱图用ＮＢＳ 谱库检索， 鉴定各种脂肪酸， 并用色谱峰面积归一化测定其相对百分含量。结果： 发现乌龟板中含有３２ 种脂肪酸， 其中不饱和脂肪酸相对含量占４９ ％ 。黄喉拟水龟板中有２８ 种脂肪酸， 其中不饱和脂肪酸相对含量占６６ ％ 。１０ － 十八碳烯酸是二者中所含的相对含量最高的脂肪酸。结论： 该法简便、快速。

龟甲“滋阴补肾”药效相关研究概况

目的从现代药理学角度来阐述龟甲"滋阴补肾"功效的药性理论。方法通过分析中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、万方数据库和维普全文数据库中1988～2008年对龟板的功效与药理相关文献,对龟甲"滋阴补肾"功效的药理作用进展汇总。结果与龟甲"滋阴"功效相关的药效主要有调节能量代谢、增强免疫、补血、抗衰老等,而与"补肾"功效相关的药效主要有健骨、促进发育、护神经系统等。结论龟甲"滋阴补肾"功效具有多种药理作用,其"性、味结合归经"与现代药理作用有吻合之处,但还有待于完善,从而为龟甲的临床应用提供现代科学依据。

强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响

目的:观察强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响。方法:使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液与龟板混合血清组和空白血清对照组,免疫组化染色鉴定肌凝蛋白(myosin)、结蛋白(desmin)的表达。结果:诱导后第3、13天,强肌健力口服液与龟板混合血清组部分细胞出现desmin和myosin阳性表达。结论:强肌健力口服液与龟板混合血清能诱导MSCs向成肌细胞定向分化,为中医脾肾相关理论提供依据。

龟板胶酶解优化条件的研究

采用胰蛋白酶和中性蛋白酶复合水解龟板胶,同时以水解度为考察指标,用正交实验考查了影响酶解的四个主要因素(pH值、酶水解温度、底物浓度,酶水解时间)。研究表明,此法能有效降低龟板胶的分子量,增加多肽量,减少浑浊度及沉淀物,其最佳工艺为:酶解温度50℃、pH值为8.5、底物浓度8%、酶解时间8h。

基于网络药理学方法分析“龟板-鹿角”药对活性成分治疗骨质疏松症的分子机制

背景:“龟板-鹿角”药对是治疗骨质疏松症的经典中药配伍方式,临床被广泛应用,但其药理学分子作用机制目前尚不明确。目的:基于网络药理学方法,探讨经典补肾中药药对“龟板-鹿角”治疗骨质疏松症的分子作用机制。方法:从BATMAN-TCM、TCM-MESH、化学专业数据库及手工检索文献获取“龟板-鹿角”药对的活性成分及治疗作用靶点。从毒理组学比较数据库、人类基因数据库获取药物治疗骨质疏松症作用靶点,与“龟板-鹿角”作用靶点取交集确定治疗作用靶标基因。通过STRING网站构建靶标基因间蛋白互作网络关系;采用Cytoscape软件构建药对-活性成分-靶标基因网络、核心靶标基因互作网络;借助DAVID、KOBAS等在线工具对靶标基因进行基因本体论及通路富集分析,筛选具有统计学差异的过程或通路(P<0.05);通过SwissDock进行核心基因与活性成分分子对接验证。结果与结论:①检索筛选得到“龟板-鹿角”药对含天冬氨酸、苯丙氨酸等21个有效活性成分,对应183个骨质疏松症治疗靶标基因,药对、活性成分、靶标基因形成紧密联系的互作网络关系;②筛选出INS、ALB、TNF等10个核心基因,靶标基因主要富集于衰老、药物反应等66个基因本体论过程,缺氧诱导因子1、卵巢类固醇生成等27个信号通路;③靶标基因INS与丙氨酸、雄激素,ALB与丙氨酸等获得了较高的分子对接评分,亲和力较好;④结果表明,“龟板-鹿角”药对的活性成分及其治疗骨质疏松症作用靶标基因存在复杂网络关系,靶标基因富集于多个联系密切且复杂的信号通路,涉及细胞增殖分化凋亡、炎症反应、性激素调控等多层次以调节骨修复重建的动态平衡,值得继续深入研究发展。

甲骨学若干术语的英译探讨

甲骨学上“甲骨学”、“兆(兆璺、兆纹)”、“兆侧刻辞(兆语、兆辞)”、“卜辞界划(界线)”、“(兽类的)肩胛骨”、“龟腹甲”等六个术语的英译非常混乱,有必要进行重新探讨。

仝小林运用鹿茸片、败龟板、牛脊髓治疗老年痴呆症经验

老年痴呆症是临床常见的一种渐进性神经系统退行性疾病,以记忆、认知能力衰退,社交障碍、行为异常及性格改变等为主要特征。本病病位在脑与肾,致病因素分虚、痰、瘀三个方面,虚为本,痰、瘀为标。因年老肾衰、脑髓失养致神志不明,选药以补益为主,治疗以“补肾益精填髓”为基本原则,常用鹿茸片3 g、败龟板15 g、牛脊髓1条煮汤服,用以填髓补脑,改善脑肾功能,长期服用后可明显提高生活质量,且安全性良好,为临床中药治疗老年痴呆症提供了可行性。

龟板联合阿伦磷酸钠预防糖皮质激素性骨质疏松症的实验研究

目的观察龟板联合阿伦磷酸钠对糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨密度、骨微结构及骨生物力学的影响。方法将36只SD雌性大鼠随机分为基础组、对照组、模型组、龟板组、阿伦磷酸钠组、联合组,每组6只。基础组在实验开始称量体重后即处死取材,模型组、龟板组、阿伦磷酸钠组、联合组采用地塞米松注射液进行造模,连续5周。自造模开始,龟板组同时给予龟板溶液3.15 g/(kg·d)灌胃;阿伦磷酸钠组每周第1天给予阿伦磷酸钠水溶液7.35 mg/kg灌胃,其余6 d给予等体积生理盐水灌胃;联合组每周第1天给予阿伦磷酸钠水溶液7.35 mg/kg灌胃,其余6 d给予龟板溶液3.15 g/(kg·d)灌胃;对照组与模型组每天给予等体积生理盐水灌胃。造模结束后采用双能X射线骨密度测量仪检测骨密度,Micro-CT检测骨微结构[骨面积体积比(BS/TV)、相对骨体积(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁模式因子(Tb.Pf)、结构模型指数(SMI)]并进行三维重建,压缩试验检测腰椎骨生物力学参数。结果与模型组比较,龟板组、阿伦磷酸钠组及联合组大鼠全身骨矿盐含量、骨面积、骨密度、BS/TV、BV/TV、Tb.N(龟板组除外)、Tb.Th、最大载荷、压缩位移、压缩刚度及能量吸收值均明显升高(P均<0.05),Tb.Sp、Tb.Pf、SMI均明显降低(P均<0.05);与龟板组及阿伦磷酸钠组比较,联合组大鼠全身骨矿盐含量、骨密度均明显高于龟板组(P均<0.05),联合组大鼠全身骨矿盐含量、骨密度、最大载荷均明显升高(P均<0.05),SMI明显降低(P均<0.05)。结论龟板联合阿伦磷酸钠可明显改善GIOP大鼠骨密度、骨微结构及骨生物力学性能,对GIOP有预防性治疗作用,二者联合使用有协同增效作用。

龟象膏大鼠皮肤长期毒性实验研究

目的观察和测定龟象膏长期连续经皮肤给药对SD大鼠的长期毒性作用。方法将154只SD大鼠随机分为7组,即空白对照组,完整皮肤高、中、低剂量组及破损皮肤高、中、低剂量组,每组各22只,雌雄各半。完整皮肤、破损皮肤高、中、低剂量组分别在剃毛区涂龟象膏20、10、5 g/(只.d),空白对照组涂乳膏赋形剂凡士林10 g/(只.d)。涂药后用胶布固定,每日1次,连续90 d(每周停药1 d)。观察大鼠一般性状,计算给药前后体质量增减率。心脏采血,检测血常规及血液生化指标,随后做系统尸检及病理检查。结果完整皮肤、破损皮肤高、中、低剂量组大鼠外观、行为体征、活动、精神状态均无明显异常;饮食、粪便及尿液正常,体质量正常增加,体质量增减率之间比较差异均无统计学意义(P>0.05);无大鼠死亡情况发生,亦无中毒反应;主要血液学指标、生化指标、主要脏器系数与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);解剖完整皮肤高剂量组、破损皮肤高剂量组及空白对照组大鼠主要脏器未见病理性改变。结论龟象膏长期连续经皮肤给药对实验大鼠无毒性反应,可以在临床安全使用。

商代龜腹甲首部錯磨現象及其對甲骨文書法空間布局的影響

龜腹甲作爲商代甲骨文的主要載體之一,其首部的錯磨現象在甲骨學界鮮有關注。這種錯磨現象具有一定的規律性與普遍性,當是殷人有意而爲。論文認爲,錯磨現象可以追溯到新石器時代出現的龜甲磨痕、八角星紋,至商代龜腹甲首部錯磨,其原始功用與巫史文化中所蕴含的宇宙觀亦有直接或間接的聯繫。龜腹甲的特性及其首部不同形狀的錯磨,客觀上對龜腹甲首部的文字布局及其表現效果産生了一定影響。

龟板联合阿伦磷酸钠对激素性骨质疏松大鼠腰椎Runx2、CTSK表达的影响

目的:观察龟板联合阿伦磷酸钠(ALN)对激素性骨质疏松(GIOP)大鼠腰椎Runx2、CTSK表达的影响。方法:40只3月龄雌性SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、ALN组、龟板联合ALN组(联合组)。模型组、ALN组及联合组皮下注射地塞米松造模,成功后分别用0.9%氯化钠溶液、ALN和龟板联合ALN进行灌胃。12周后取大鼠腰椎进行:micro-CT检测腰椎骨微细结构、HE染色观察骨组织形态学,qPCR及Western blot分别检测腰椎Runx2、CTSK mRNA和蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组Tb.N、Tb.Th明显下降(P<0.01),Tb.Sp、CTSK mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),Runx2 mRNA和蛋白表达呈下调趋势;与模型组比较,ALN组和联合组BS/TV、Tb.N、Tb.Th、Runx2蛋白表达明显升高(P<0.01),Tb.Sp、CTSK mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论:龟板联合阿伦磷酸钠抗大鼠腰椎GIOP的协同机制可能与调节Runx2、CTSK的表达密切相关。

中药乙醇提取物对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖抑制作用的研究

目的:筛选对人卵巢癌SK-OV-3细胞具有增殖抑制作用的中药以指导临床治疗。方法:体外培养人卵巢癌细胞SK-OV-3,加入不同浓度的中药提取物,48 h后用MTT法检测其增殖活性,计算各提取物的半数抑制浓度及不同浓度下9种中药对人卵巢癌SK-OV-3细胞的抑制率,分析药物浓度与抑制率的关系。结果:9种中药不同浓度的提取物均能抑制SK-OV-3细胞增殖,抑制率随着浓度的增大而逐渐增强,并呈剂量依赖关系。结论:筛选对人卵巢癌SK-OV-3细胞具有抑制作用的中药能够有效地指导临床用药。

热泡法净制龟板的初步研究

Beiling water vesicie method is more simple than traditional mixing methods and water vapour method to purify tortoise plastron. The chromatogtams of amino acids obtsined were similar. The water extract or 50% alcohol exact by boiling water vesle method is more than those by mixing method and is similar to those by water vapour method.

中药诱导骨髓间充质干细胞的研究进展

通过查阅相关论著及最新文献，对中药在诱导骨髓间充质干细胞中的运用及研究进展进行归纳，重点介绍丹参、三七、龟板、鹿茸、人参、黄芪等中药在骨髓间充质干细胞诱导与增殖领域的研究成果及相关实验结果。

龟腹甲新拼合六例

龟腹甲前甲、后甲残片极易从腋凹或胯凹处断裂,这些残片上大多有残字、盾纹或兆边,这些特征为甲骨缀合提供了重要线索。笔者留心于此类残片,新拼合甲骨六例。