苦豆子抗内毒素效应的实验研究

目的:研究苦豆子中提取的苦豆子总碱及氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱对内毒素肺损伤小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法:以清开灵注射液作为本研究的阳性对照药物。分别连续3天腹腔注射给予ICR小鼠各个生物碱及清开灵,均末次给药后1 h腹腔注射LPS(E.coil,055∶B5)9 mg/kg造成小鼠内毒素性肺损伤,观察小鼠一般状况、白细胞数量、肺W/D比值、肺组织病理形态学改变,以及免疫组织化学法检测肺组织CD14和清道夫受体(SR-A)的表达,放免法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:预防性给予内毒素肺损伤小鼠苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱,均不同程度改善了模型鼠的一般状况,并可不同程度地升高外周血白细胞,降低肺脏W/D比值,减轻肺组织病理改变,降低模型鼠肺组织CD14表达,增加SR-A表达,降低血清中TNF-α和IL-6的水平。结论:苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱可不同程度地减轻内毒素肺损伤小鼠的病理损害,它们的抗内毒素机制可能与调节LPS的识别受体,并进而影响下游炎症因子表达有关。

几种苦豆子生物碱对小菜蛾部分生理指标的影响

四龄小菜蛾幼虫经苦豆子7种生物碱处理后，表现呼吸强度增加，完成完整呼吸次数减少，其中，苦参碱、苦豆碱和槐胺碱均显著促进试虫二氧化碳释放量和释放过程。槐果碱处理试虫体内总糖含量显符降低。所有处理试虫的生长发育均显著受到抑制。

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA4.0mg/L+NAA1.0mg/L+CH1000mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。

响应曲面法优选苦豆子总生物碱的提取工艺研究

以甘肃苦豆子为原料,利用超声波辅助提取苦豆子总生物碱,并采用Box-Behnken对超声波超声时间、乙醇浓度、料液比进行响应面优化。结果表明:最佳提取工艺参数为乙醇浓度65%,料液比1∶8 g/m L,提取时间30 min。在此条件下,总生物碱提取率为29.1 mg/g,超声提取工艺合理、可行,为苦豆子总生物碱的新药开发提供了理论参考。

苦豆子总碱对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响

目的:探讨苦豆子总碱(total alkali sophora alopecuroids L,TASa)对大鼠离体子宫平滑肌自发收缩的影响及机制。方法:将大鼠离体子宫平滑肌置于恒温灌流肌槽中,累积加入不同浓度TASa溶液,记录肌肉收缩活动的变化,并观察其量效关系(r);分为正常组、缩宫素、TASa、TASa+异搏定、TASa+酚妥拉明、TASa+苯海拉明、TASa+消炎痛和TASa+阿托品8组以探讨其作用机制。结果:TASa能增强子宫平滑肌的收缩幅度、收缩时程和收缩面积,并有量效依赖性(幅度:r=0.99,t=21.54,P<0.01;时程:r=0.93,t=11.98,P<0.01;收缩面积:r=0.94,t=11.24,P<0.01),但对收缩频率(次/5 min)无影响(正常组:3.93±0.12,TASa:3.92±0.08,P>0.05);TASa增强子宫平滑肌收缩时程和收缩面积的效应强于缩宫素;异搏定和酚妥拉明可减弱TASa收缩平滑肌的效应,而阿托品、苯海拉明和消炎痛则无影响。结论:TASa能增强子宫平滑肌的收缩作用,其机制可能是通过L-钙通道和α受体升高胞浆内Ca2+有关。

大孔吸附树脂分离纯化苦豆草总生物碱的工艺研究

目的采用大孔树脂分离纯化苦豆草总生物碱,优选最佳工艺条件。方法以苦豆草总生物碱的吸附量及解吸率为评价指标,比较DF01、D101等8种型号大孔树脂对苦豆草总生物碱的分离纯化性能,选出最佳树脂并优选纯化工艺。结果 D101型大孔树脂对苦豆草总生物碱具有较好的吸附分离性能,在实验条件下对苦豆草总生物碱的吸附量和解吸率可达到9.2mg·mL-1和90%以上。结论该优选工艺可为苦豆草总生物碱纯化的产业化生产提供依据。

苦豆子总碱对大鼠膀胱逼尿肌作用机制研究

目的:观察苦豆子总碱(total alkali sophora alopecuroids L,TASa)对大鼠膀胱离体肌条的作用及机制。方法:采用恒温灌流浴槽,记录膀胱逼尿肌收缩波的振幅、持续时间、收缩面积和频率,给予TASa(5、10、20、40、80 mg/L)观察其量效关系(r);将标本分为正常组(NS)、TASa、TASa+异搏定(10-7mg/L)、TASa+酚妥拉明(10-6mg/L)、TASa+苯海拉明(10-6mg/L)、TASa+消炎痛(10-6mg/L)和TASa+阿托品(10-6mg/L)七组探讨TASa兴奋逼尿肌的作用机制。结果:TASa能增强逼尿肌收缩的振幅、持续时间和收缩面积,并有量效依赖性(振幅r=0.95,t=5.43,P<0.05;持续时间:r=0.97,t=7.99,P<0.01;收缩面积:r=0.97,t=7.03,P<0.01),从TASa(20 mg/L)浓度开始可加快其收缩频率(P<0.01)。异搏定可抑制TASa兴奋逼尿肌的作用,而阿托品、苯海拉明、消炎痛和酚妥拉明则无影响。结论:TASa可能是激活Ca2+通道,升高胞浆内Ca2+触发逼尿肌的收缩。

苦豆子生物碱对内毒素的体外灭活作用

目的观察苦豆子生物碱对内毒素(LPS)的体外灭活作用。方法利用鲎试剂显色基质法定量测定苦豆子总碱、槐果碱、槐定碱、氧化苦参碱体外灭活LPS的作用及其剂量效应关系。结果槐果碱浓度为1.25μg/ml、槐定碱5μg/ml,作用1小时即有显著灭活LPS的作用,灭活百分率分别为79.04%和79.34%;苦豆子总碱浓度为40μg/ml时灭活LPS达77.20%;氧化苦参碱浓度为125μg/ml时可减少LPS 44.68%。4种苦豆子碱对LPS的灭活率在一定范围内随药物浓度增加而提高。结论苦豆子总碱及3种单体碱具有体外直接灭活内毒素作用,并在一定范围内呈现量效关系。

苦豆子总碱对自发性高血压大鼠动脉血压影响

目的 :探讨苦豆子总碱(total alkaloid of Sophora alopecuroides,TASA)降低自发性高血压大鼠(SHR)动脉血压的机制。方法 :(1)将42只16周龄的SHR随机分为SHR模型对照组、TASA组和5组拮抗剂(左旋硝基精氨酸、甲烯蓝、维拉帕米、普萘洛尔和吲哚美辛)组;另取8只同周龄Wistar大鼠作为正常对照组。TASA组:股静脉注射TASA(2、4和8 mg·kg^(-1));拮抗剂组:先分别注射对血压无影响的阻滞剂后,再给TASA(8 mg·kg^(-1));SHR组和正常组注射等量生理盐水。经颈总动脉插管记录各组给药前后的动脉血压。(2)颈动脉血压记录30 min以后,抽取正常组、SHR组和TASA组大鼠的血液2 mL,提取血清,以酶联免疫法测定各组NO、ET-1和AngⅡ的含量。结果 :(1)TASA能显著降低SHR的血压,并具有量效依赖性(SBP:r=0.83,t=56.52,P<0.01;DBP:r=0.78,t=45.92,P<0.01;MAP:r=0.83,t=54.43,P<0.01)。维拉帕米、左旋硝基精氨酸和甲烯蓝可明显抑制TASA(8 mg/kg)的降压效应(P<0.01);而吲哚美辛、普萘洛尔对TASA的作用无影响。(2)SHR组的ET-1和AngⅡ明显高于正常组,而NO低于正常组(P<0.05);TASA组的ET-1和AngⅡ显著低于SHR组,而NO则高于SHR组(P<0.05)。结论 :TASA降低SHR血压与其恢复血管内皮细胞功能释放NO的增多和减少细胞钙内流有关。

反相高效液相色谱法测定苦豆子总碱中槐定碱含量

目的建立测定苦豆子总碱中槐定碱含量的反相高效液相色谱法。方法采用Kromasil100-5NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸水溶液(pH为2)-无水乙醇(80∶8∶10),检测波长205 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃。结果槐定碱进样量与峰面积的线性范围为0.02～8.3μg(r=1.000);平均加样回收率为98.85%,RSD为3.13%(n=5);苦豆子总碱中槐定碱的平均含量为42.7%。结论所建立的含量测定方法灵敏度高,专属性强,可用于苦豆子总碱中槐定碱的质量控制。

正交试验法优化苦豆子渣总黄酮的提取工艺

[目的]优化提取苦豆子(Sophora alopecuroides L.)渣中总黄酮的提取工艺,为苦豆子渣总黄酮的分离纯化奠定基础。[方法]在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验优化苦豆子渣中总黄酮的提取工艺。[结果]苦豆子渣总黄酮的最佳提取工艺为:料液比为1∶10,提取时间为1.5 h,提取次数为3次,在最佳条件下总黄酮的得率为4.86 mg/g。[结论]优化的苦豆子渣提取工艺简便、合理,为苦豆子渣总黄酮的分离纯化及以苦豆子渣为原料的药物开发奠定了基础。

苦豆子总碱对大鼠胃窦环形平滑肌作用机制的研究

目的:观察苦豆子总碱(total alkali sophora alopecuroids L,TASa)对大鼠胃窦环形肌条的作用及机制。方法:采用离体恒温灌流浴槽,记录胃窦环形肌条收缩波的振幅、持续时间、收缩面积和频率,给予TASa(5、10、20、40、80mg/L)观察其量效关系(r);将标本分为对照组(NS)、TASa、TASa+阿托品(10-6mg/L)、TASa+酚妥拉明(10-6 mg/L)、TASa+苯海拉明(10-6 mg/L)、TASa+消炎痛(10-6 mg/L)和TASa+异搏定(10-7 mg/L)七组探讨TA-Sa收缩肌条的作用机制。结果:TASa能增强肌条收缩的振幅、持续时间和收缩面积,并有量效依赖性(振幅:r=0.96,t=23.72,P<0.01;持续时间:r=0.95,t=32.55,P<0.01;收缩面积:r=0.98,t=23.68,P<0.01),但对其收缩频率(NS:3.58±0.15,TASa:3.72±0.21,P>0.05)无影响;异搏定能明显抑制TASa收缩肌条的作用,而阿托品、酚妥拉明、苯海拉明和消炎痛无影响。结论:TASa可能是通过激活Ca2+通道,升高胞浆内Ca2+而加强肌条的收缩。

苦豆子总碱的体外抗菌活性研究

目的 :了解苦豆子总碱的体外抗菌活性。方法 :以琼脂稀释法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱的体外最低抑菌浓度 (MIC)及最低杀菌浓度 (MBC)等。结果 :苦豆子总碱体外对 10余种 2 0 6株试验菌均有抑菌作用 ,其MIC是 10～ 40mg/ml,大于 3～ 5MIC的浓度对上述试验菌有杀菌作用。苦豆子总碱在碱性环境下抑菌作用较强 ,细菌接种量可影响其MIC ,血清含量对MIC无明显影响。结论 :苦豆子总碱有广谱抗菌作用 ,但抗菌活性较弱 ,内服不可能达到有效的血清抑菌浓度。

盐碱地苦豆子栽培技术规程

通过对苦豆子栽培环境特征和生长发育特性的研究,结合田间生产实践,制定了一套适合河套灌区盐碱地的苦豆子生产技术规程。

苦豆子总黄酮对乙肝病毒复制的影响

目的:观察苦豆子总黄酮提取物(KDH)在体内、外对乙肝病毒复制的影响。方法:采用乙型肝炎病毒HBV转染人肝癌细胞Hep G2的2.2.15细胞系,检测KDH对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)复制及表面抗原(HBs Ag)、e抗原(HBe Ag)分泌的影响;采用鸭乙肝病毒DHBV感染的雏鸭模型观察KDH对鸭乙型肝炎的治疗作用。结果:KDH(125-500)μg/m L浓度在2.2.15细胞培养中对HBV-DNA的复制有明显的抑制作用,其500μg/m L浓度对HBs Ag、HBe Ag的分泌有一定的抑制作用;其25mg/kg剂量口服可持续降低鸭乙肝模型血清中DHBV-DNA水平。结论:KDH可有效干预乙肝病毒的复制。

苦豆子减压提取工艺研究

目的 :优选苦豆子中生物碱减压动态提取工艺。方法:以苦豆子总碱、氧化苦参碱的含量作为评价指标,采用正交优化试验,考察加水量、提取时间、提取次数3个因素的影响,结合综合评分的方法优选苦豆子生物碱减压提取工艺,并与较为常用的常压回流法、煎煮法提取效果相比较。结果:最佳提取工艺为加12倍量水,在温度为60℃条件下动态沸腾减压提取3次,每次1 h。结论:优化的苦豆子生物碱减压提取工艺中总碱及氧化苦参碱的含量均优于常压回流法和煎煮法,且工艺稳定、可行。

苦豆子总碱对小鼠急性毒性试验研究

采用改良寇氏法测定苦豆子总碱提取物对小鼠腹腔注射的急性毒性,评价其安全性,为临床安全用药提供依据。给试验组小鼠灌服不同浓度的苦豆子总碱提取物,观察给药后小鼠的临床表现与死亡情况,采用改良寇氏公式计算LD50及LD50的95%可信限,结果表明,苦豆子总碱经腹腔注射的LD50为559.24 mg/kg,95%可信限为471.95-663.59 mg/kg。试验结果提示,苦豆子总碱的毒性较低,临床用药安全可靠。

苦豆草总碱乳房灌注液对大鼠长期毒性研究

通过大鼠长期毒性试验研究评估苦豆草总碱乳房灌注液用于该疾病治疗的安全性。方法:采用计算机随机法将80只Wistar大鼠按雌雄随机平均分为4组:苦豆草总碱乳房灌注液高剂量组、中剂量组、低剂量组及对照组。各试验组经口灌胃分别给予不同剂量的苦豆草总碱乳房灌注液,对照组给予注射用纯净水,1次/d,共28 d。给药期间每天观察大鼠的行为表现,并测量体质量,干预结束后经尾脉采血1 m L,检测血液常规及生化等指标。结果表明,与对照组相比,不同剂量苦豆草总碱乳房注入剂干预组的大鼠体质量无明显异常变化,血液常规如白细胞、红细胞及血小板,生化指标如肝脏、肾脏功能等均无异常变化。同时,各重要脏器的大体解剖及组织学均未见明显病理变化。结果提示不同剂量的苦豆草总碱乳房灌注液对大鼠无明显的毒副作用。

TBHQ对苦豆子总碱光分解抑制的研究

[目的]研究苦豆子(Sophora alopecuroides L.)总碱光分解情况及抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)对其光分解抑制情况。[方法]将苦豆子总碱置于太阳光及紫外光下照射,研究光分解情况。[结果]苦豆子总碱属于光易分解物质,其光分解半衰期不超过1h运用抗氧化剂TBHQ能有效抑制苦豆子总碱光分解。不同浓度TBHQ对苦豆子总碱光分解的抑制效果不同,处理浓度越大,其抑制苦豆子总碱光分解的作用越强。[结论]为寻找合适的抑制苦豆子生物碱光分解的稳定剂提供依据。

光照和温度对苦豆子总碱和苦参碱制剂颜色和pH值的影响

将苦豆子总碱和苦参碱制剂在不同光照和温度下放置3个月,并观察药物的颜色及pH值变化,考察药物对光和热的敏感性以及药物产生的物理变化,通过不同条件的贮存,初步为确定药物的贮存条件提供依据。