老瓜头生物总碱镇痛、抗炎作用的实验研究

目的研究老瓜头生物碱的急性毒性及镇痛、抗炎作用。方法应用扭体法、热板法观察老瓜头生物碱对小鼠的镇痛作用;应用蛋清致大鼠足趾肿、大鼠棉球肉芽肿及对大鼠足趾炎症组织内前列腺素E2(PGE2)的影响,观察老瓜头生物碱的镇痛、抗炎作用。结果老瓜头生物碱对小鼠扭体次数,热板法对小鼠舔足时间有明显的抑制作用;对蛋清致大鼠足趾肿、大鼠棉球肉芽肿及对大鼠足趾炎症组织内PGE2的含量,均有明显的抑制作用。结论老瓜头生物碱具有镇痛、抗炎作用,此作用与抑制炎症组织内的PGE2有关,此作用的强度与吲哚美辛、氢化可的松相似或略强。

老瓜头生物总碱抗炎作用机制的实验研究

目的研究老瓜头生物总碱对气囊滑膜炎大鼠的抗炎作用机制。方法采用角叉菜胶(Car)25mg/kg制备大鼠气囊滑膜炎模型,分别观察老瓜头生物总碱2、4、8 mg／kg对气囊灌洗液中白细胞数、蛋白含量、肿瘤坏死因子(TNF)及白细胞介素-6(IL-6)含量的影响。结果腹腔注射老瓜头生物总碱后,灌洗液中白细胞数、蛋白含量显著低于致炎组(P<0．01),并且灌洗液中TNF及IL-6的含量也低于致炎组(P<0．05)。结论老瓜头生物总碱抗炎作用的机制与降低TNF及IL-6的含量有关。

老瓜头生物总碱对气囊滑膜炎大梭的抗炎和抗氧化作用

目的研究老瓜头生物总碱对气囊滑膜炎大鼠的抗炎和抗氧化作用。方法采用大鼠角叉菜胶气囊滑膜炎模型,分别观察老瓜头生物总碱2、4、8 mg/kg对气囊渗出液量、气囊灌洗液中白细胞数、蛋白含量、一氧化氮(NO)及血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)含量的影响。结果与模型组相比,老瓜头生物总碱各剂量组均能降低气囊渗出液量、灌洗液中白细胞数、蛋白含量及NO含量(P<0.01),并能降低血清中MDA含量(P<0.05);老瓜头生物总碱4 mg/kg和8 mg/kg还能升高SOD活力和T-AOC(P<0.05,P<0.01)。结论老瓜头生物总碱对气囊滑膜炎大鼠具有抗炎作用,其机制与其提高大鼠体内抗氧化物质的含量有关。

老瓜头生物总碱对大鼠佐剂性关节炎继发性炎症的影响

目的观察老瓜头生物总碱对大鼠佐剂性关节炎(AA)继发性炎症的影响。方法采用弗氏完全佐剂(CFA)制备大鼠佐剂性关节炎模型,观察老瓜头生物总碱对AA大鼠体重增长率、免疫器官系数、非致炎足足容积及全身关节病变程度的影响。结果致炎第24天CK总碱20.0、10.0mg/kg剂量组能够减轻AA大鼠的全身关节病变程度(P<0.05),其10.0、5.0mg/kg剂量组大鼠体重增长率与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);致炎第27天,CK总碱各剂量组免疫器官系数较模型组减小(P<0.01);CK总碱20.0、10.0mg/kg剂量组分别在致炎第24、27天降低AA大鼠非致炎足足容积(P<0.05)。结论老瓜头生物总碱对大鼠佐剂性关节炎的继发性炎症有抑制作用。

老瓜头生物总碱抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及促凋亡作用的研究

目的研究老瓜头生物总碱对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制与促进凋亡的作用。方法采用小鼠黑色素瘤B16细胞,MTT法检测老瓜头生物总碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、Caspase-3和Caspase-8活性检测,观察老瓜头生物总碱诱导细胞凋亡的作用和机制。结果 MTT检测显示老瓜头生物总碱抑制B16细胞的增殖,呈现时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72h的IC50分别为0.97、0.98、0.16mg·L^(-1);选用浓度0.25、0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h,经DNA Ladder检测出现阶梯状DNA Ladder,片段100~200bp,呈现细胞凋亡裂解;0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h后Rhodamine 123染色与空白对照组相比显示荧光降低,且随浓度增加,荧光降低增加;凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8活性增强,0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱药物组与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论老瓜头生物总碱可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡,可通过增强凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8活性诱导凋亡。

老瓜头生物总碱的体外抗氧化活性研究

目的研究老瓜头生物总碱的体外抗氧化活性。方法用紫外分光光度计测定老瓜头生物总碱与K3Fe(CN)6作用后吸光度的变化,反应还原力的大小,用Elisa测定老瓜头生物总碱对双氧水诱导的羟自由基的清除能力,用紫外分光光度计测定老瓜头生物总碱对双氧水诱导小鼠红细胞溶血的保护作用,用Elisa测定老瓜头生物总碱对双氧水诱导的肝脂质过氧化产物MDA的清除能力,观察老瓜头生物总碱的抗氧化活性。结果老瓜头生物总碱0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1浓度组与相应浓度维生素C相比,还原力均较弱(P<0.01);在0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1浓度组老瓜头生物总碱与维生素C相比,对羟自由基的清除能力强(P<0.01);老瓜头生物总碱浓度为0.2、0.4mg·mL-1时对红细胞膜的抑制作用与维生素C相比有统计学差异(P<0.05);质量浓度为0.8、1.6mg·mL-1老瓜头生物总碱对小鼠肝匀浆自发氧化生成MDA有抑制作用,其效应强于相应浓度维生素C(P<0.01)。结论老瓜头生物总碱还原力较相应浓度维生素C弱但有较强的清除自由基的能力。

老瓜头生物总碱对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究老瓜头生物总碱(TACKI)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7在COX-2酶活性、基因表达及蛋白表达的影响。方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞作为炎症模型,以非甾体抗炎药选择性COX-2酶抑制剂塞来昔布作为阳性对照。MTT比色法分析TACKI对RAW264.7生长活性的影响,LPS长时间刺激RAW264.7,ELISA检测细胞上清液中前列腺素-E2(PGE2)活性,以PGE2的活性反映COX-2的酶活性,半定量RT-PCR检测RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的表达,免疫荧光观察RAW264.7细胞中COX-2的表达,Western blotting法检测COX-2蛋白表达。结果:与LPS组比较,TACKI 0.1,1μg·L-1能减弱COX-2酶活性(P<0.05),TACKI 0.01,0.1,1μg·L-1可下调COX-2 mRNA的表达(P<0.05),TACKI 0.1,1μg·L-1能减少COX-2蛋白表达(P<0.05)。结论:TACKI减弱LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性,对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2基因表达及蛋白表达抑制作用明显。