马钱子减毒总生物碱的制备及毒性

目的制备去除大部分士的宁的马钱子减毒总生物碱,并考察马钱子总生物碱减毒前后成分及毒性的变化。方法用不同体积分数的乙醇溶解马钱子总生物碱,经磁力搅拌、离心后制备得到马钱子减毒总生物碱,HPLC法测定马钱子减毒总生物碱中马钱子碱和士的宁的量。用Q-TOF-MS技术比较鉴定了马钱子总生物碱减毒前后的主要生物碱类成分。通过小鼠口服急性毒性试验考察了马钱子总生物碱减毒前后的毒性变化情况。结果以20%乙醇为溶剂制备的马钱子减毒总生物碱去士的宁效果最好,同时不影响其他19种生物碱类含有量。小鼠口服急性毒性LD50实验表明马钱子减毒总生物碱与马钱子总生物碱的LD50分别为31.08 mg/kg、10.92 mg/kg。结论马钱子总生物碱中士的宁占38.49%,减毒后仅占14%,减毒工艺提高了马钱子总生物碱临床使用的安全性。

微波辅助提取马钱子中总生物碱工艺

采用微波辅助方法提取马钱子中总生物碱,并对其工艺条件进行优化。考察微波辐射功率、微波辐射时间、乙醇体积分数、液料比和微波前预浸泡时间等因素对提取效率的影响,并利用响应面法对其工艺条件进行优化。利用中心组合设计原理及响应面法分析建立二次回归模型,以微波辐射功率、微波辐射时间、乙醇体积分数为自变量,以士的宁、马钱子碱产率的综合指标为响应值,研究各因素及其交互作用对生物碱产率的影响。利用模型的响应曲面图及其等高线图,确定微波辅助提取马钱子中生物碱的最佳工艺参数:微波功率240W、微波辐射时间6.7min、液料比6:1(mL/g)、乙醇体积分数58.8%。在此条件下,士的宁、马钱子碱的提取量分别达到18.97、9.46mg/g,与理论预测值基本吻合。该结果可为马钱子中总生物碱的工业提取提供参考和依据。

马钱子不同提取方法的比较研究

目的:考察不同提取方法对马钱子中总生物碱含量测定结果的影响。方法:以士的宁和马钱子碱为定量指标,运用高效液相色谱(HPLC)法,比较马钱子回流提取、超声提取、浸渍提取、渗漉提取等不同提取方法的提取率。结果:回流提取法提取马钱子总生物碱,提取率最高。结论:建议选用回流提取法作为马钱子最佳提取方法,该方法简单、稳定、可行。

马钱子组分对人HaCaT细胞毒性作用的比较

目的研究马钱子生物碱及其不同组分对人永生化表皮细胞系Ha Ca T细胞的毒性作用。方法体外培养Ha Ca T细胞,加入相同质量浓度的马钱子碱、士的宁、马钱子碱与士的宁的混合物,和马钱子总生物碱作用于细胞24 h后,采用MTT比色法测定不同生物碱的细胞增殖抑制作用;流式细胞仪检测对Ha Ca T细胞的凋亡,比较马钱子生物碱不同组分对Ha Ca T细胞的毒性作用。结果士的宁对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子碱;马钱子碱和士的宁混合物组对Ha Ca T细胞的抑制率和细胞凋亡率大于马钱子总生物碱。结论马钱子生物碱组分均对Ha Ca T细胞存在细胞毒作用,呈剂量依赖关系,但马钱子碱的细胞毒性明显小于士的宁。

干姜、丁香、荜澄茄对马钱子总碱贴剂的经皮促渗作用研究

目的考察干姜、丁香、荜澄茄挥发油及其混合挥发油对马钱子总碱贴剂的经皮促渗作用。方法利用改良Franz扩散池法,以氮酮为阳性对照,不含促渗剂的马钱子总碱为阴性对照,考察含不同质量分数的(3%,5%,7%,10%)干姜、丁香、荜澄茄挥发油对模型药马钱子总碱经小鼠皮肤的促渗效果,然后将筛选出来的最好质量分数的挥发油,折半后按1∶1混合再对马钱子总碱的经皮渗透作用进行考察,采用HPLC测定马钱子总碱的含量。结果同系列中以10%干姜油、7%丁香油、5%荜澄茄油及5%干姜+5%氮酮的混合挥发油对贴剂中马钱子总碱的促渗效果最好,其8 h平均累积渗透量(Q8)分别为2.311、2.016、2.656与2.532(mg·cm-2);6h时增渗倍数分别为1.692、2.687、3.420与1.991。与阴性对照组的Q8比较,10%干姜油、5%荜澄茄油的差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论 10%干姜挥发油、7%丁香挥发油、5%荜澄茄挥发油以及5%干姜+5%氮酮的混合挥发油能明显提高马钱子总碱在贴剂中的渗透量,促渗效果好。

马钱子总碱中2种成分的平衡溶解度、油水分配系数、体外透皮特性

目的考察马钱子Strychni Semen总碱中马钱子碱和士的宁的平衡溶解度、油水分配系数、体外透皮特性。方法饱和溶解法测定2种成分在乙醇(10%、20%、30%、60%、90%、无水乙醇)、三氯甲烷、正辛醇、表面活性剂(0.5%吐温、0.5%去氧胆酸钠、0.5%油酸)中的平衡溶解度;摇瓶法测定两者在PBS(pH 2.5、4.0、5.0、5.8、6.8、7.0、7.4、9.0)中的油水分配系数;改良Franz扩散池法评价其在PBS、20%乙醇、无水乙醇中的体外透皮特性。结果马钱子碱、士的宁均在三氯甲烷中的平衡溶解度最高,表面活性剂中最低;在体积分数大于20%的乙醇或pH小于8.0的PBS中,士的宁平衡溶解度高于马钱子碱,并分别在60%乙醇和pH 2.5 PBS中达到最高。2种成分油水分配系数相近,均随pH增加而升高,在pH9.0时最高。两者分别在无水乙醇、pH9.0 PBS中的累计透皮吸收率最高。结论溶剂种类对马钱子碱和士的宁的平衡溶解度、油水分配系数、透皮吸收均有明显影响。本研究可为马钱子总碱经皮给药生物利用度的改善及相关制剂的开发提供参考。

马钱子总生物碱复合磷脂脂质体HPLC指纹图谱研究

目的采用高效液相色谱法建立马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的HPLC指纹图谱,并考察制剂工艺稳定性,为其质量控制提供新方法。方法以LicrospherC18(4.6 mm×300 mm,5μm)柱为色谱柱,流动相为乙腈(A)-水∶0.2%乙酸∶0.2%三乙胺(B),梯度洗脱,检测波长为254 nm;采用指纹图谱相似度软件进行数据分析。结果确定了马钱子总生物碱复合磷脂脂质体8个共有峰,通过方法学考察,精密度、稳定性、重现性试验RSD均小于3%,10批马钱子复合磷脂脂质体相似度均高于0.95。结论马钱子总生物碱复合磷脂脂质体制剂工艺稳定,指纹图谱技术适用于马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的质量评价。

马钱子总碱贴剂的促渗剂筛选及其镇痛作用研究

目的考察几种挥发油促渗剂对马钱子总碱贴剂的体外经皮促渗作用,并对其中渗透性最好的贴剂进行镇痛作用实验研究。方法利用改良Franz扩散池法,以氮酮为阳性对照、不含促渗剂的马钱子总碱为阴性对照,考察5%荜澄茄油、7%丁香油、10%干姜油、5%氮酮+5%干姜油4种促渗剂对模型药马钱子总碱经裸鼠皮肤的促渗效果,采用HPLC法测定马钱子总碱的含量;以小鼠醋酸扭体法和热板法两种疼痛模型观察马钱子总碱贴剂的镇痛作用。结果上述4种促渗剂对马钱子总碱12 h时的增渗倍数(ER12)分别为:1.69、1.78、2.93、2.45,与阴性对照组比较,其中10%干姜挥发油促渗效果显著(P<0.01),含该促渗剂的马钱子总碱贴剂能显著提高热板法小鼠痛阈值,降低醋酸致小鼠扭体次数(P<0.01)。结论 10%干姜挥发油能明显提高马钱子总碱在贴剂中的渗透量,促渗效果好;并具有显著的镇痛作用,药物效应强度较高,持续时间长。

正交试验法优选马钱子总生物碱提取工艺

目的优选马钱子中士的宁与马钱子碱的提取方法与工艺。方法在单因素试验的基础上,以高效液相测定的士的宁与马钱子碱总量为指标,以乙醇浓度、乙醇用量及回流时间为影响因素,采用正交试验法优选士的宁与马钱子碱提取工艺。结果优选的最佳提取工艺为50%乙醇10倍量,回流提取3次,每次2h。结论验证实验表明该工艺合理、稳定可行。

马钱子苏木有效组分配伍对RA血瘀证模型大鼠炎症和血管内皮损伤的影响

目的：在类风湿关节炎（RA）血瘀证大鼠模型建立的基础上,观察马钱子、苏木有效组分（马苏组分）配伍对模型大鼠的关节炎症和血管内皮损伤的影响。方法：通过对RA血瘀证大鼠一般情况检查,足趾肿胀度及Elisa检测等方法分析各项指标,评估马苏组分配伍对大鼠炎症和血管内皮的影响。结果：马苏组分配伍能较好的改善RA血瘀证大鼠的一般状态,显著降低其足趾肿胀度,抑制炎症反应,改善血管内皮的损伤;降低模型大鼠血清中TNF-α、IL-1α、VEGF、COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-15、VCAM-1、ICAM-1炎症因子水平,较好的逆转膝关节软骨的病理损伤改变,延缓关节软骨的退化进程。结论 ：马苏组分配伍能够有效抑制RA血瘀证模型大鼠的炎症及血管内皮损伤,延缓膝关节软骨退变,起到保护关节软骨的作用。

肉桂油对马钱子总碱中马钱子碱和士的宁透皮吸收的影响

目的探讨肉桂油对马钱子总碱透皮吸收的影响,为马钱子相关制剂的开发和减毒增效研究奠定基础。方法以体外SD大鼠皮肤为渗透屏障,Franz扩散池法考察不同浓度(0.5%、1%、3%、5%、10%)肉桂油对马钱子总碱中马钱子碱和士的宁透皮吸收的影响;采用饱和溶解度法测定马钱子总碱中马钱子碱和士的宁在不同浓度肉桂油中的平衡溶解度;采用HPLC测定马钱子总碱角质层/溶剂分配系数;采用傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术测定肉桂油对皮肤角质层的作用。结果不同浓度肉桂油促透马钱子总碱中马钱子碱的稳态渗透速率(Jss)和增渗比(ER)分别为5.84~19.65μg/(cm^2·h)、0.23~3.54,促透马钱子总碱中士的宁的Jss和ER分别为1.36~18.38μg/(cm^2·h)、0.19~2.55;马钱子总碱中马钱子碱、士的宁在不同浓度肉桂油中的平衡溶解度分别为6.10~10.97 g/L、4.10~6.58 g/L;马钱子总碱中马钱子碱和士的宁的角质层/溶剂分配系数分别为0.74~1.39、0.24~0.35。结论不同浓度肉桂油对马钱子总碱中的马钱子碱及士的宁均有一定促透作用,以1%肉桂油作用最佳,其机制可能为通过影响角质层内角蛋白改变角质层结构而促透。

马钱子总生物碱树脂微囊分散片的处方确定

目的:确定马钱子总生物碱树脂微囊分散片的最佳处方。方法:以不同处方比例制备分散片,以分散片的外观、片重、硬度、崩解时限、分散均匀性及溶出度等作为考察指标,采用正交设计法分析筛选最优处方。结果:最佳分散片处方为微晶纤维素为填充剂,交联聚乙烯吡咯烷酮和碳酸氢钠与枸橼酸为联合崩解剂,卡波姆和羧甲基纤维素钠联合应用为助悬剂,滑石粉为润滑剂。结论:马钱子总生物碱树脂微囊分散片的外观、片重差异、崩解时限、分散均匀性、含量等均符合2010年版《中国药典》要求。

Box-Behnken响应曲面法优化马钱子总碱凝胶贴膏基质处方的研究

采用马钱子总碱为原料,以初黏力和剥离强度为指标,通过单因素试验考察NP700、甘羟铝、PVP、甘油的用量,并采用Box-Behnken响应曲面试验确定凝胶贴膏的基质处方。结果表明,马钱子凝胶贴膏的最优基质处方为:NP7003.90g、甘羟铝0.80g、PVP1.10g、甘油30.20g。在此条件下制备的马钱子凝胶贴膏基质处方合理,具有较好的成型性和黏性。

马钱子生物碱类成分经口给药后在大鼠体内的药动学研究

目的比较马钱子生物碱类成分(马钱子碱、马钱子总生物碱和马钱子优化总生物碱)ig给药后在大鼠体内的药动学过程。方法大鼠ig给药后取血,以石杉碱甲为内标,HPLC法测定大鼠血浆样品中马钱子碱,DAS 1.0程序拟合房室模型并计算药动学参数。结果马钱子生物碱类成分ig给药后马钱子碱的药动学行为均符合二室模型;与马钱子碱单体给药相比,马钱子总生物碱与马钱子优化总生物碱能显著增加马钱子碱的体内吸收,其他药动学参数无显著差异。结论 ig给以马钱子生物碱类成分后,马钱子其他生物碱类成分对马钱子碱有吸收促进作用。

马钱子总碱-白芍总苷配伍凝胶剂的制备及其经皮吸收性能的考察

目的旨在制备马钱子总碱-白芍总苷配伍凝胶剂,研究配伍前后2种马钱子生物碱(马钱子碱和士的宁)体外经皮吸收的影响。方法采用改良Franz扩散池,以离体小鼠皮肤为透皮屏障,选择合适的接收液,HPLC测定配伍前后接收液和皮肤中2种马钱子生物碱的含量,计算其累积渗透量和透皮速率等渗透动力学参数。结果以20%乙醇-生理盐水做接收液,与单独马钱子总碱凝胶比较,1∶1、1∶3、1∶6马钱子总碱-白芍总苷配伍凝胶剂中马钱子碱和士的宁24h累积透过量分别下降了22.7%、48.4%、69.1%和5.93%、23.8%、80.7%。且随着配伍比例的增加,渗透速率及皮肤滞留率也逐渐降低。结论马钱子总碱配伍白芍总苷经皮给药可以减少毒性成分的透过量,有一定的"减毒"作用,效果最佳比例为1∶6。

马钱子碱、马钱子总生物碱与马钱子粉在大鼠体内药动学的比较

目的:研究马钱子碱、马钱子砂烫炮制品总生物碱与马钱子粉在大鼠体内的药动学规律,探寻单成分与整体之间的相互影响。方法:给各组大鼠分别灌胃给予马钱子碱溶液、马钱子砂烫炮制品总碱溶液及马钱子粉混悬液,采用高效液相色谱测定大鼠体内马钱子碱的血浆浓度,血药浓度-时间曲线经3P97软件包进行房室模型拟合并计算和比较各组药物动力学参数。结果:马钱子碱在大鼠体内的代谢过程符合二室模型,权重W=1/C2,方差分析结果表明,相同剂量的马钱子碱在3组不同的存在形式中,马钱子碱溶液组与马钱子砂烫炮制品总生物碱组在Cmax,MRT有显著性差异(P<0.05);马钱子碱溶液组与马钱子粉混悬液组在Cmax,AUC0-t,AUC0-∞有显著性差异(P<0.05),其中马钱子粉混悬液组值最小。结论:马钱子砂烫炮制品总生物碱组可相对延长马钱子中有效成分马钱子碱的血浆滞留时间,马钱子粉混悬液组的生物利用度较低。

3种挥发油对马钱子总碱透皮贴片体外经皮渗透的影响

目的研究砂仁、草果、白豆蔻挥发油对马钱子总碱贴片中马钱子总碱(主要含马钱子碱和士的宁)体外经皮渗透的影响。方法以小鼠离体皮肤为实验材料,采用改良Franz扩散池法,以HPLC法测定马钱子总碱贴片中马钱子总碱(马钱子碱和士的宁)的累积渗透量(Qn),考察3%、5%、7%、10%砂仁、草果、白豆蔻挥发油对马钱子总碱(马钱子碱和士的宁)的促渗效果。结果不同质量浓度挥发油中,以5%砂仁挥发油、3%草果挥发油、10%白豆蔻挥发油渗透速率(JSS)最大,分别为1.039、0.951、0.907 mg/(cm2.h);与不加促渗剂的阴性对照组相比,增渗倍数(ER)分别为1.212、1.230、1.383,其中5%砂仁油的ER大于阳性对照10%氮酮。结论 5%砂仁油、3%草果油、10%白豆蔻油均能明显促进马钱子总碱贴片中马钱子总碱(马钱子碱和士的宁)的透皮吸收。

星点设计-响应面法优选马钱子总生物碱微囊制备工艺

目的:优选马钱子总生物碱微囊的制备工艺,对马钱子总生物碱微囊的质量及毒性进行评价初步研究。方法:以壳聚糖、明胶为囊材,采用复乳化-交联法制备马钱子总生物碱微囊,通过星点设计-响应面法优选其制备工艺,并对微囊的载药量、包封率、产率、表征、粒径分布等质量评价指标进行考察。通过急性毒性试验考察马钱子总生物碱微囊的LD50值。结果:马钱子总生物碱微囊最佳工艺处方为壳聚糖质量浓度为1.5%,明胶质量浓度为11%,囊芯囊材质量比为1∶1,戊二醛用量为2m L。载药量为17.84%、包封率为70.31%、产率为91.66%。外观呈圆球形、表面较为光滑、未出现粘连现象,粒径分布较集中,平均粒径为112.47μm。马钱子总生物碱微囊LD50为236.59mg/kg,是马钱子总生物碱的2.23倍。结论:以最佳工艺处方制备马钱子总生物碱微囊工艺合理、稳定,综合质量评价结果表明该微囊质量较好,同时急性毒性试验表明,微囊的LD50较原总生物碱有一定程度的提高,安全性进一步提高,推测可能与缓释过程有关。

磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体静脉注射后马钱子碱组织分布的影响

目的：考察磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体静脉注射后马钱子碱在体内分布的影响。方法：采用硫酸铵梯度法和隐形脂质体技术制备马钱子总生物碱脂质体,除去游离药物后,利用HPLC测定马钱子碱的含量,流动相乙腈-0.01mol·L-1庚烷磺酸钠与0.02 mol·L-1磷酸二氢钾等量混合液（24∶76）,检测波长264 nm。比较马钱子总生物碱溶液和不同磷脂组成马钱子总生物碱隐形脂质体静脉注射给药后马钱子碱的组织分布情况。结果：不同磷脂组成脂质体中马钱子碱占总生物碱的质量分数在26%~31%。与大豆磷脂隐形脂质体相比,马钱子总生物碱复合磷脂隐形脂质体静脉注射给药5 min后在血液和小肠中的浓度分别增加了2.35,1.34倍;而氢化大豆磷脂隐形脂质体在血液中的浓度极显著增加,给药后5 min的浓度增加了8.52倍,并且在脾、肺、心等组织中的浓度也明显增加,在小肠中浓度显著下降。结论：磷脂组成对马钱子总生物碱隐形脂质体的体内分布有显著影响。

马钱子总生物碱致肾毒性模型建立及甘草内生菌代谢产物减毒作用对比

目的:建立马钱子总生物碱(TAS)致肾毒性模型,探究甘草及其内生菌代谢产物对TAS致肾毒性模型的减毒作用。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甘草提取物176 mg/kg组、甘草内生真菌17、33 mg/kg组、甘草内生细菌17、33 mg/kg组,每组10只,以7.50 mg/mL的TAS建立大鼠肾毒性模型,灌胃给予甘草和甘草内生菌进行干预,观察大鼠体征状况,检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量,计算脏器指数,观察组织病理学变化及损伤分数等指标,评价TAS肾毒性模型及甘草内生菌对TAS致肾毒性的减毒作用。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清BUN、Cr含量及脏器指数明显升高(P<0.05或P<0.01),肾脏组织中肾小管空泡样变形,肾小管萎缩,且肾小球肾小管损伤评分明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,甘草提取物及其内生菌代谢物各组大鼠体征状况逐渐恢复,BUN的含量显著降低(P<0.01),大鼠肾组织病理损伤减轻,肾小球与肾小管损伤评分降低(P<0.05或P<0.01);与甘草提取物176 mg/kg组比较,甘草内生细菌代谢物17 mg/kg组BUN含量显著升高(P<0.01),甘草内生真菌代谢物33 mg/kg组、甘草内生细菌代谢物33 mg/kg组肾小管损伤评分和肾小球损伤评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:7.50 mg/kg的TAS成功建立大鼠的肾毒性模型;甘草内生菌代谢物具有减毒作用,一定剂量内,甘草内生真菌代谢物呈现出优于甘草的减毒作用。