苦豆子抗内毒素效应的实验研究

目的:研究苦豆子中提取的苦豆子总碱及氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱对内毒素肺损伤小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法:以清开灵注射液作为本研究的阳性对照药物。分别连续3天腹腔注射给予ICR小鼠各个生物碱及清开灵,均末次给药后1 h腹腔注射LPS(E.coil,055∶B5)9 mg/kg造成小鼠内毒素性肺损伤,观察小鼠一般状况、白细胞数量、肺W/D比值、肺组织病理形态学改变,以及免疫组织化学法检测肺组织CD14和清道夫受体(SR-A)的表达,放免法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:预防性给予内毒素肺损伤小鼠苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱,均不同程度改善了模型鼠的一般状况,并可不同程度地升高外周血白细胞,降低肺脏W/D比值,减轻肺组织病理改变,降低模型鼠肺组织CD14表达,增加SR-A表达,降低血清中TNF-α和IL-6的水平。结论:苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱可不同程度地减轻内毒素肺损伤小鼠的病理损害,它们的抗内毒素机制可能与调节LPS的识别受体,并进而影响下游炎症因子表达有关。

几种苦豆子生物碱对小菜蛾部分生理指标的影响

四龄小菜蛾幼虫经苦豆子7种生物碱处理后，表现呼吸强度增加，完成完整呼吸次数减少，其中，苦参碱、苦豆碱和槐胺碱均显著促进试虫二氧化碳释放量和释放过程。槐果碱处理试虫体内总糖含量显符降低。所有处理试虫的生长发育均显著受到抑制。

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA4.0mg/L+NAA1.0mg/L+CH1000mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。

响应曲面法优选苦豆子总生物碱的提取工艺研究

以甘肃苦豆子为原料,利用超声波辅助提取苦豆子总生物碱,并采用Box-Behnken对超声波超声时间、乙醇浓度、料液比进行响应面优化。结果表明:最佳提取工艺参数为乙醇浓度65%,料液比1∶8 g/m L,提取时间30 min。在此条件下,总生物碱提取率为29.1 mg/g,超声提取工艺合理、可行,为苦豆子总生物碱的新药开发提供了理论参考。

大孔吸附树脂分离纯化苦豆草总生物碱的工艺研究

目的采用大孔树脂分离纯化苦豆草总生物碱,优选最佳工艺条件。方法以苦豆草总生物碱的吸附量及解吸率为评价指标,比较DF01、D101等8种型号大孔树脂对苦豆草总生物碱的分离纯化性能,选出最佳树脂并优选纯化工艺。结果 D101型大孔树脂对苦豆草总生物碱具有较好的吸附分离性能,在实验条件下对苦豆草总生物碱的吸附量和解吸率可达到9.2mg·mL-1和90%以上。结论该优选工艺可为苦豆草总生物碱纯化的产业化生产提供依据。

苦豆子生物碱对内毒素的体外灭活作用

目的观察苦豆子生物碱对内毒素(LPS)的体外灭活作用。方法利用鲎试剂显色基质法定量测定苦豆子总碱、槐果碱、槐定碱、氧化苦参碱体外灭活LPS的作用及其剂量效应关系。结果槐果碱浓度为1.25μg/ml、槐定碱5μg/ml,作用1小时即有显著灭活LPS的作用,灭活百分率分别为79.04%和79.34%;苦豆子总碱浓度为40μg/ml时灭活LPS达77.20%;氧化苦参碱浓度为125μg/ml时可减少LPS 44.68%。4种苦豆子碱对LPS的灭活率在一定范围内随药物浓度增加而提高。结论苦豆子总碱及3种单体碱具有体外直接灭活内毒素作用,并在一定范围内呈现量效关系。

苦豆子总碱对大鼠膀胱逼尿肌作用机制研究

目的:观察苦豆子总碱(total alkali sophora alopecuroids L,TASa)对大鼠膀胱离体肌条的作用及机制。方法:采用恒温灌流浴槽,记录膀胱逼尿肌收缩波的振幅、持续时间、收缩面积和频率,给予TASa(5、10、20、40、80 mg/L)观察其量效关系(r);将标本分为正常组(NS)、TASa、TASa+异搏定(10-7mg/L)、TASa+酚妥拉明(10-6mg/L)、TASa+苯海拉明(10-6mg/L)、TASa+消炎痛(10-6mg/L)和TASa+阿托品(10-6mg/L)七组探讨TASa兴奋逼尿肌的作用机制。结果:TASa能增强逼尿肌收缩的振幅、持续时间和收缩面积,并有量效依赖性(振幅r=0.95,t=5.43,P<0.05;持续时间:r=0.97,t=7.99,P<0.01;收缩面积:r=0.97,t=7.03,P<0.01),从TASa(20 mg/L)浓度开始可加快其收缩频率(P<0.01)。异搏定可抑制TASa兴奋逼尿肌的作用,而阿托品、苯海拉明、消炎痛和酚妥拉明则无影响。结论:TASa可能是激活Ca2+通道,升高胞浆内Ca2+触发逼尿肌的收缩。

反相高效液相色谱法测定苦豆子总碱中槐定碱含量

目的建立测定苦豆子总碱中槐定碱含量的反相高效液相色谱法。方法采用Kromasil100-5NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸水溶液(pH为2)-无水乙醇(80∶8∶10),检测波长205 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃。结果槐定碱进样量与峰面积的线性范围为0.02～8.3μg(r=1.000);平均加样回收率为98.85%,RSD为3.13%(n=5);苦豆子总碱中槐定碱的平均含量为42.7%。结论所建立的含量测定方法灵敏度高,专属性强,可用于苦豆子总碱中槐定碱的质量控制。

苦豆子总碱的体外抗菌活性研究

目的 :了解苦豆子总碱的体外抗菌活性。方法 :以琼脂稀释法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱的体外最低抑菌浓度 (MIC)及最低杀菌浓度 (MBC)等。结果 :苦豆子总碱体外对 10余种 2 0 6株试验菌均有抑菌作用 ,其MIC是 10～ 40mg/ml,大于 3～ 5MIC的浓度对上述试验菌有杀菌作用。苦豆子总碱在碱性环境下抑菌作用较强 ,细菌接种量可影响其MIC ,血清含量对MIC无明显影响。结论 :苦豆子总碱有广谱抗菌作用 ,但抗菌活性较弱 ,内服不可能达到有效的血清抑菌浓度。

正交试验法优化苦豆子渣总黄酮的提取工艺

[目的]优化提取苦豆子(Sophora alopecuroides L.)渣中总黄酮的提取工艺,为苦豆子渣总黄酮的分离纯化奠定基础。[方法]在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验优化苦豆子渣中总黄酮的提取工艺。[结果]苦豆子渣总黄酮的最佳提取工艺为:料液比为1∶10,提取时间为1.5 h,提取次数为3次,在最佳条件下总黄酮的得率为4.86 mg/g。[结论]优化的苦豆子渣提取工艺简便、合理,为苦豆子渣总黄酮的分离纯化及以苦豆子渣为原料的药物开发奠定了基础。

苦豆子总黄酮对乙肝病毒复制的影响

目的:观察苦豆子总黄酮提取物(KDH)在体内、外对乙肝病毒复制的影响。方法:采用乙型肝炎病毒HBV转染人肝癌细胞Hep G2的2.2.15细胞系,检测KDH对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)复制及表面抗原(HBs Ag)、e抗原(HBe Ag)分泌的影响;采用鸭乙肝病毒DHBV感染的雏鸭模型观察KDH对鸭乙型肝炎的治疗作用。结果:KDH(125-500)μg/m L浓度在2.2.15细胞培养中对HBV-DNA的复制有明显的抑制作用,其500μg/m L浓度对HBs Ag、HBe Ag的分泌有一定的抑制作用;其25mg/kg剂量口服可持续降低鸭乙肝模型血清中DHBV-DNA水平。结论:KDH可有效干预乙肝病毒的复制。

苦豆子总碱对小鼠急性毒性试验研究

采用改良寇氏法测定苦豆子总碱提取物对小鼠腹腔注射的急性毒性,评价其安全性,为临床安全用药提供依据。给试验组小鼠灌服不同浓度的苦豆子总碱提取物,观察给药后小鼠的临床表现与死亡情况,采用改良寇氏公式计算LD50及LD50的95%可信限,结果表明,苦豆子总碱经腹腔注射的LD50为559.24 mg/kg,95%可信限为471.95-663.59 mg/kg。试验结果提示,苦豆子总碱的毒性较低,临床用药安全可靠。

苦豆草总碱乳房灌注液对大鼠长期毒性研究

通过大鼠长期毒性试验研究评估苦豆草总碱乳房灌注液用于该疾病治疗的安全性。方法:采用计算机随机法将80只Wistar大鼠按雌雄随机平均分为4组:苦豆草总碱乳房灌注液高剂量组、中剂量组、低剂量组及对照组。各试验组经口灌胃分别给予不同剂量的苦豆草总碱乳房灌注液,对照组给予注射用纯净水,1次/d,共28 d。给药期间每天观察大鼠的行为表现,并测量体质量,干预结束后经尾脉采血1 m L,检测血液常规及生化等指标。结果表明,与对照组相比,不同剂量苦豆草总碱乳房注入剂干预组的大鼠体质量无明显异常变化,血液常规如白细胞、红细胞及血小板,生化指标如肝脏、肾脏功能等均无异常变化。同时,各重要脏器的大体解剖及组织学均未见明显病理变化。结果提示不同剂量的苦豆草总碱乳房灌注液对大鼠无明显的毒副作用。

TBHQ对苦豆子总碱光分解抑制的研究

[目的]研究苦豆子(Sophora alopecuroides L.)总碱光分解情况及抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)对其光分解抑制情况。[方法]将苦豆子总碱置于太阳光及紫外光下照射,研究光分解情况。[结果]苦豆子总碱属于光易分解物质,其光分解半衰期不超过1h运用抗氧化剂TBHQ能有效抑制苦豆子总碱光分解。不同浓度TBHQ对苦豆子总碱光分解的抑制效果不同,处理浓度越大,其抑制苦豆子总碱光分解的作用越强。[结论]为寻找合适的抑制苦豆子生物碱光分解的稳定剂提供依据。

苦豆子总碱GC-MS分析及幽门螺杆菌抑菌活性实验研究

目的基于气相色谱-质谱联用技术(gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析对苦豆子中的生物碱进行定性、定量分析,获得含量较高的5种苦豆子生物碱探究其与苦豆子总碱对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床耐药株的体外抑菌功效。方法采用732强酸性阳离子交换树脂法、Hydromatrix为基质的固相萃取法和有机溶剂液液萃取法制备新疆苦豆子总碱,并用GC-MS法分析总碱中生物碱的组分及相对含量。收集上消化道疾病患者胃黏膜标本,分离、鉴定出52株Hp临床菌株,应用E-试验方法检测对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药性,对32株临床耐药株进行筛选;应用液体倍比稀释法检测经GC-MS法分析中含量较高的5种苦豆子生物碱与苦豆子总碱对32株临床耐药株的体外抑菌效果。结果GC-MS法检测苦豆子含有13种已知生物碱,其中槐定碱、槐果碱、苦参碱、异槐果碱、野啶碱、lamprolobine和槐胺碱为主要生物碱,占所检出13种生物碱中的相对百分含量分别为25.82%、5.81%、13.28%、8.02%、7.34%、4.88%和3.15%。药敏实验显示,Hp对甲硝唑、克拉霉素耐药率高,对阿莫西林敏感。GC-MS法分析含量较高的5种苦豆子生物碱与苦豆子总碱对临床耐药株体外抑菌效果显著,以苦豆子总碱最为显著,其抗Hp作用较强;苦参碱与槐果碱也存在一定的抗Hp作用;槐定碱、异槐果碱、野啶碱的抑菌效果相对较弱。结论GC-MS法可快速分析苦参碱、槐定碱等生物碱,在苦豆子、苦参及其生物碱相关药物的质量控制方面具有一定的应用价值。Hp菌株对甲硝唑耐药率高,因此不选择甲硝唑作为根除Hp感染的一线药物。在多种有效成分中苦豆子总碱在体外抗Hp效果较好,可研发成为治疗Hp感染的中药单剂或复方制剂。

苦豆子总碱舒张家兔离体主动脉的研究

目的：研究苦豆子总碱（total alkaliSophora alopecuroidsL,TASa）舒张家兔离体主动脉血管的作用机制。方法：采用离体恒温灌流浴槽,以去甲肾上腺素（noradrenaline,NA）预收缩后,给予TASa（5,10,20,40 mg.L-1）观察其舒张血管的量效关系;将标本分为对照组、TASa组、TASa＋吲哚美辛（1×10-5mol.L-1）、TASa＋普萘洛尔（1×10-5mol.L-1）、TASa＋左旋硝基精氨酸（1×10-4mol.L-1）和TASa＋去内皮细胞6组探讨TASa舒张血管的机制;用TASa（40 mg.L-1）温育标本后,观察TASa对NA（1×10-8～1×10-5mol.L-1）,KC l（6.3～100 mmol.L-1）和CaC l2（1×10-5～1×10-2mol.L-1）量效收缩曲线的影响。结果：TASa能舒张主动脉血管,有量效依赖性（r=0.94,P〈0.01）;去内皮、左旋硝基精氨酸、吲哚美辛和普萘洛尔对TASa舒张血管的作用无明显影响;TASa能压低NA,KC l和CaC l2的量效收缩曲线。结论：TASa可能是抑制内质网Ca2＋释放和拮抗Ca^2＋通道，降低胞浆Ca^2＋而使血管舒张。

苦豆子总碱缓释磁性颗粒的制备及其性能检测

目的:制备苦豆子总碱缓释磁性颗粒,并研究其性能。方法:采用L9(34)正交试验确定苦豆子总碱缓释磁性颗粒最佳制备工艺。以pH6.8的磷酸盐缓冲溶液为释放介质,考察其体外释放性能,并通过振动样品磁强计测定其磁性能。结果:苦豆子总碱缓释磁性颗粒最佳制备工艺组成为A1B3C2D2,即苦豆子总碱质量为1.0g,壳聚糖浓度为2.5%,壳聚糖质量为3.0g,微晶纤维素质量为1.5 g,Fe3O4纳米粒质量为1.5 g。苦豆子总碱缓释磁性颗粒具有较好的缓释性能,其体外释药特征符合一级动力学方程,同时也具有明显的磁响应性。结论:苦豆子总碱缓释磁性颗粒处方合理、制备工艺可行,具有缓释特性和超顺磁性,适用于消化道靶向给药。

基于改进的溴甲酚绿显色法测定苦甘草总生物碱含量

改进生物碱溴甲酚绿显色定量方法,优化反应条件,采用新建方法测定苦甘草总生物碱含量。以苦参碱为对照品,对溴甲酚绿显色反应的各影响因素进行单因素梯度试验考察,充分了解显色反应条件,将氯仿层比色定量改进为水相比色定量。溴甲酚绿与苦参碱生成结合物具有pH依赖特征。其最佳显色反应条件为pH 6.0,显色溶液为0.5 mg/mL的溴甲酚绿,萃取液为二氯甲烷。苦参碱在1.03~7.69μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系(r=0.9997),苦参碱平均回收率为96.59%,RSD为1.25%(n=5)。改进的溴甲酚绿显色方法克服了传统定量方法的重复性差、稳定性不佳、回收率低的弊端。所以这种改进的方法可用于苦甘草中总生物碱的含量测定。

苦豆子总碱对大鼠神经行为和单胺类神经递质含量的影响

目的评价苦豆子总碱对大鼠神经行为功能和神经递质表达的影响。方法选用48只SD雄性大鼠，随机分为空白组、苦豆子总碱低、中、高剂量组（4、8、16mg·kg·d-1），连续灌胃给药30d后，采用自主活动实验检测各组大鼠的神经行为功能和情绪状态，采用ELISA实验方法检测大鼠血清和脑组织中单胺类神经递质色氨酸（Trp）、5-羟基色氨酸（5-HTP）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）的含量。结果自主活动实验中，水平运动次数苦豆子总碱中、高剂量组[（61．64±5．91）次、64．62±5．79）次]与空白组[（95．33±12．75）次]相比明显减少（均P〈0．05），垂直运动次数苦豆子总碱中、高剂量组[（3．05±0．09）次、3．77±0．69）次]与空白组[（4．33±0．66）次]相比明显减少（P〈0．05，P〈0．01）。排便粒数高剂量组[（3．38±0．40）粒]与空白组[（2．25±0．39）粒]相比明显增加（P〈0．05，P〈0．01），情绪紧张程度加强。同时，苦豆子总碱低、中、高剂量组均能明显提高大鼠血清及脑组织中5-HT、5-HIAA含量（P〈0．01），但对5-HT前体物质Trp、5-HTP含量无明显影响（P〉0．05），以及对儿茶酚胺神经递质NE、E和DA含量无明显影响（P〉0．05）。相关分析显示，大鼠自主活动程度与血清中5-HT、5-HIAA和DA含量呈负相关（P〈0．05，P〈0．01），大鼠情绪紧张程度与脑组织中5-HT、5-HIAA含量呈负相关（P〈0．05，P〈0．01）。结论苦豆子总碱具有减少大鼠活动程度和增加情绪紧张程度的作用，可能与血清及脑组织中5-HT及5-HIAA含量升高有关。

顶空气相色谱法测定苦豆子总碱中残留溶剂

目的:建立苦豆子总碱中三氯甲烷、甲苯、乙醇3种有机溶剂残留量的测定方法。方法:使用配置顶空进样器的毛细管气相色谱仪,采用DB-WAX聚乙二醇(PEG-20M))毛细管气相色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm);氢火焰离子化检测器;载气为氮气,流速为0.9mL·min-1;进样口温度为220℃,检测器温度为250℃;柱温采用程序升温,初始温度为60℃,保持6min,以8℃·min-1的速率升至180℃,保持5min;顶空进样,进样体积为1.0mL。结果:三氯甲烷在9.696～242.4μg(r=0.9994)、甲苯在2.875～71.88μg(r=0.9995),乙醇在82.674～2066.84μg(r=0.9993)范围内呈良好的线性关系;三氯甲烷、甲苯和乙醇的平均回收率分别为95.9%(RSD=3.8%),98.4%(RSD=4.4%),97.6%(RSD=3.8%)。结论:本方法简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,适合苦豆子总碱中有机溶剂残留量的测定。