聚酰胺颗粒分离纯化土茯苓总黄酮研究

目的:研究聚酰胺颗粒分离纯化土茯苓总黄酮的工艺条件。方法:以土茯苓总黄酮、落新妇苷、黄杞苷含量为指标,通过考察静态、动态吸附实验,筛选了聚酰胺颗粒分离纯化土茯苓总黄酮科学合理的工艺条件。结果:聚酰胺颗粒对土茯苓总黄酮的静态吸附2 h达到平衡,饱和吸附容量为144 mg/g;动态吸附时最佳上样量为128.125 mg/g,洗脱工艺为先以20 BV水洗脱,继以20 BV 95%乙醇洗脱,洗脱剂流速为1 BV/h,洗脱物中土茯苓总黄酮含量为71.84%,转移率为66.42%,落新妇苷含量为14.32%,转移率为75.50%,黄杞苷含量为1.08%,转移率为81.88%。结论:聚酰胺颗粒对土茯苓总黄酮吸附选择性高,操作简单,可用于土茯苓总黄酮的富集纯化。

正交试验优化土茯苓黄酮类成分提取工艺研究

目的:研究土茯苓黄酮类成分提取的工艺条件。方法:采用正交试验,考察了乙醇浓度、提取温度、固液比、提取次数等因素,采用HPLC法测定了提取溶液中落新妇苷的含量,采用比色法测定了提取溶液中总黄酮的含量,进行综合评价。结果:水浴温度和提取次数为主要影响因素,差异具有统计学意义,乙醇浓度和固液比为次要因素。结论:确定提取工艺为A2B3C1D2,即以10倍量60%的乙醇为溶媒,沸水浴回流提取2次,总黄酮提取率可达95.99%。

不同产地土茯苓中总黄酮含量定量分析

目的：测定不同产地土茯苓中总黄酮的含量。方法：以落新妇苷为标准品、采用分光光度法测定分别源于安徽亳州、广西南宁、越南三产地的土茯苓中总黄酮的含量。结果：落新妇苷在13．18-30．59μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系（R^2=0．9996）。结论：方法灵敏度高、稳定性好，可以用于土茯苓药材中总黄酮的含量测定。

正交设计法优选土茯苓中落新妇苷及总黄酮的提取工艺

目的:研究超声法提取土茯苓中落新妇苷及总黄酮的最佳工艺条件。方法:采用正交试验法研究落新妇苷和总黄酮的提取工艺,其中落新妇苷含量用HPLC法测定,总黄酮含量用紫外分光光度法测定。结果:土茯苓中落新妇苷最佳提取工艺为加入甲醇30mL,超声提取15min,超声3次。总黄酮的最佳提取工艺为料液比1∶50,加入50%乙醇,超声提取60min。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于土茯苓药材中落新妇苷及总黄酮的含量测定及其质量控制。

广西产黄杞叶不同溶媒提取物中二氢黄酮醇的定量分析

为了测定黄杞叶不同溶媒提取物中主要化学成分二氢黄酮醇的含量,以落新妇苷为标准品,采用分光光度法测定黄杞叶醇提物、水提物及醇提物的PE层、EtoAc层、H2O层和水提物的EtoAc层、H2O层中总二氢黄酮醇的含量。结果表明：落新妇苷在12.3∽28.7μg/mL范围内呈良好的线性关系（R2=0.9991）;该方法灵敏度高、稳定性好,可用于黄杞叶提取物的质量控制。

金刚藤及菝葜茎、叶的黄酮含量比较研究

目的比较金刚藤(菝葜根茎)及菝葜茎、叶中总黄酮及落新妇苷的含量差异,确定菝葜茎、叶部分的利用价值。方法采用紫外分光光度法(UV)测定金刚藤及菝葜茎、叶的总黄酮含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定金刚藤及菝葜茎、叶中落新妇苷的含量。结果金刚藤中总黄酮含量为49.87～56.33 mg/g,落新妇苷含量为4.67～5.12 mg/g;菝葜茎中总黄酮含量为40.99～48.56 mg/g,落新妇苷含量为3.67～4.14 mg/g;菝葜叶中总黄酮含量为14.85～22.34 mg/g,落新妇苷含量为0.98～1.32 mg/g。结论菝葜不同部位的总黄酮和落新妇苷含量存在较大差异,菝葜茎、叶可以用于提取分离制备总黄酮,但不可替代金刚藤使用。本试验为菝葜的开发利用提供参考数据。

黄杞叶总黄酮的提取纯化工艺优化及3种有效成分的含量测定

目的:优化黄杞叶总黄酮的提取与纯化工艺,并建立其中3种有效成分的含量测定方法。方法:以落新妇苷的提取转移率为指标,采用单因素试验对提取工艺中的提取溶剂、提取方式、渗漉溶剂乙醇的体积分数、渗漉料液比、渗漉前浸泡时间、渗漉速度和AB-8树脂纯化工艺中洗脱剂乙醇的体积分数进行考察,并采用正交试验优化提取工艺。采用高效液相色谱法对纯化后黄杞叶总黄酮中3种有效成分(落新妇苷、花旗松素、黄杞苷)进行含量测定。结果:优化后的黄杞总黄酮的提取工艺为以70%乙醇体积为提取和渗漉溶剂,采用渗漉法提取,渗漉前浸泡8 h,渗漉料液比1∶16(g/ml),渗漉速度30 ml/(min·kg);纯化工艺为取渗漉液加水稀释至0.5 g(生药)/ml,乙酸乙酯萃取,萃取液蒸干后以50%乙醇溶解,AB-8树脂上样,50%乙醇洗脱,浓缩、干燥;验证试验中落新妇苷提取转移率>80%(RSD=0.42%,n=3)。纯化后黄杞叶总黄酮中落新妇苷、花旗松素、黄杞苷的含量分别为57.94%、3.72%、2.83%,三者含量之和占总黄酮的64.00%。结论:建立的提取和纯化工艺稳定、合理、可靠;黄杞叶总黄酮中3种有效成分的含量测定方法准确、简单、重复性好。

基于多质量参数的菝葜趁鲜切制工艺优选研究

目的基于多质量参数对9种不同趁鲜切制方法所得菝葜Smilacis Chinae Rhizoma饮片进行考察,根据饮片综合质量筛选合适的趁鲜切制工艺。方法以色差值、醇溶性浸出物、水分、灰分、总黄酮、绿原酸、花旗松素、落新妇苷、黄杞苷、白藜芦醇为质量参数,结合干燥时间,用熵权法结合灰色关联度法对菝葜趁鲜切制的饮片进行质量评价。结果晒干处理的干燥时间最长,长达600 h,且外观色泽较差;不同趁鲜切制饮片的醇溶性浸出物、水分、灰分均符合《中国药典》2020年版规定;通过综合质量评价结果显示,当新鲜菝葜60℃烘至含水率为30%时切片,再以60℃烘干的饮片质量最佳。结论将新鲜菝葜烘至含水率为30%进行切制,再以60℃烘干为菝葜的最佳趁鲜切制工艺。研究结果为菝葜趁鲜切制提供基础及依据。

ZTC1+1-Ⅱ用于复方土茯苓颗粒提取液的澄清工艺

目的:确定ZTC1+1-Ⅱ天然澄清剂用于复方土茯苓颗粒提取液澄清的最佳工艺。方法:以落新妇苷保留率、总黄酮保留率为评价指标,分别考察药液浓度、澄清剂用量、加入澄清剂A组分或者B组分时药液温度、搅拌速率、保温时间及静置时间对澄清效果的影响。在单因素分析的基础上,应用正交实验设计优化澄清工艺条件。结果:在药液浓度为1∶5,ZTC1+1-Ⅱ2组分(浓度为1%)用量分别为6%(A),3%(B)的药液体积,搅拌速率为100 r·min-1,静置时间为24 h的工艺下,落新妇苷保留率为88.06%,总黄酮保留率为83.27%,综合评分为86.62。结论:ZTC1+1-Ⅱ天然澄清剂可用于复方土茯苓颗粒提取液的澄清工艺研究。

土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定方法研究

目的:建立土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定落新妇苷的含量,使用Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水-冰醋酸(18∶82∶1),流速1.0mL.min-1,检测波长290nm;采用比色法测定总黄酮的含量,以10%硝酸铝溶液为显色剂,测定波长为500nm。结果:在选定条件下,落新妇苷测定的线性范围为0.04～2.0μg(r=1.000),平均加样回收率为99.2%(n=9);总黄酮测定的线性范围为0.2～1.0mg(r=0.9998),平均加样回收率为101.8%(n=9)。结论:本文方法简便、准确,可以用于土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定。

土茯苓黄酮对高脂小鼠脂肪代谢及抗氧化水平的影响

研究了土茯苓总黄酮及主要成分落新妇苷对高脂小鼠脂肪代谢及体内抗氧化水平的影响。80只ICR小鼠随机分成8组,其中Ⅰ组为基础对照组,Ⅱ组为高脂对照组;其余6组在饮用水中分别添加1、2和4 mg/m L的落新妇苷或土茯苓总黄酮。八周后,解剖小鼠,采集腹腔脂肪和肝脏并称重,分析血清中甘油三酯(TG),总胆固醇,高密度胆固醇和葡萄糖含量。实验结果表明与高脂对照组相比,土茯苓黄酮对小鼠摄食量和饮水量无明显影响,但可显著减少小鼠体重增幅、腹腔脂肪重量及血清中TG含量。机制研究表明土茯苓黄酮能显著提升小鼠肝脏中肉碱脂酰基转移酶和脂肪酸β-氧化酶活性,但对脂肪酸合成酶活性无明显影响,说明土茯苓黄酮通过促进分解减少体内脂肪蓄积。土茯苓黄酮能显著增加肝脏中抗氧化酶活性,并减少脂质过氧化产物丙二醛的含量,说明土茯苓黄酮具有体内抗氧化活性。

Box-Behnken效应面法优化复方土茯苓颗粒提取工艺

目的:优选复方土茯苓颗粒的提取工艺条件。方法:以落新妇苷、总黄酮提取量和出膏率的总评"归一值"(OD)为因变量,通过对提取次数、提取时间、溶媒比各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用Box-Behnken效应面法优选提取工艺。采用HPLC测定落新妇苷含量,流动相乙腈-0.1%磷酸水(20∶80),检测波长290 nm。结果:最佳提取工艺为加9.8倍量水提取3次,每次1.4 h;落新妇苷提取量1.991 mg·g-1,总黄酮提取量54.436 mg·g-1,干膏得率8.558%,OD实测值与预测值相对偏差1.54%。结论:Box-Behnken效应面法用于复方土茯苓颗粒提取工艺的优选是可行的。

近红外光谱透射与透反射法测定扶正止痒方提取液中黄柏酮等定量模型的比较分析

目的:采用近红外光谱(NIRS)的透射与透反射2种方法,分别建立并比较扶正止痒方提取液中指标成分的定量校正模型,为液体样品采用NIRS测定方法的选择提供参考。方法:利用高效液相色谱(HPLC)法测定提取液中黄柏酮、落新妇苷及3个异构体(新落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷)的总量,采用NIRS的透射与透反射2种方法分别采集样品光谱,利用偏最小二乘法(PLS)和交叉验证法(CV)等化学计量学方法,尝试建立指标成分含量与近红外光谱间的定量校正模型。结果:采用透射与透反射建立的黄柏酮定量校正模型的相关系数r分别为0.9484、0.8883,验证集的r分别为0.9407、0.9210,交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.0009、0.0013,预测均方差(RMSEP)分别为0.0011、0.0011;落新妇苷及3个异构体(简称落新妇总苷)定量校正模型的r分别为0.9795、0.9372,验证集的r分别为0.9821、0.9669,RMSECV分别为0.0109、0.0188,RMSEP分别为0.0113、0.0204。采用2种方法所建模型的预测值与实测值之间具有良好的线性关系,两者无显著性差异(p>0.05),预测效果良好。结论:采用NIRS的透射与透反射所建指标成分的校正模型均能达到定量要求,但应用透反射所建模型的预测值与实测值的相关性更好,测定误差更小,预测准确度更高,预测值更接近实测值,本文可为液体样品采用NIRS测定方法的选择提供参考。

土茯苓解重金属铅毒性物质基础的初步研究

目的探究土茯苓解重金属铅毒性的活性物质。方法以"总提取物-有效萃取部位-有效部位及有效成分"顺序逐一追踪解毒活性成分的研究思路,以急/慢性铅致小鼠毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,确认土茯苓解铅毒的活性部位。依据文献及前期化学研究基础,采用高效液相色谱(HPLC)法对活性部位进行主要成分分析。结果急性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总提物组和醋酸乙酯组小鼠血液、肝和肾脏中铅含量显著降低(P<0.05);血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量有所降低(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性有不同程度提高(P<0.05);小鼠肝和肾损伤程度均有改善。慢性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组小鼠血液、肝和肾脏铅含量均有下降(P<0.05),且呈剂量相关性;小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性和肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平均有不同程度地降低(P<0.05),并以土茯苓总黄酮高剂量组最为显著;小鼠肝和肾损伤程度均有所改善,且土茯苓总黄酮高剂量组组织结构趋近正常。新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物为总黄酮部位的主要成分,占总黄酮的58.89%。结论土茯苓醋酸乙酯部位对铅致小鼠急性毒性有显著解毒作用,且醋酸乙酯部位优于总提物,提示醋酸乙酯部位为土茯苓解铅毒的有效萃取部位;土茯苓总黄酮具有较好的排铅作用,对铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用,且呈剂量相关性,提示总黄酮为土茯苓解重金属铅毒的活性部位。土茯苓总黄酮主要由新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物组成,提示上述化合物可能为土茯苓解铅毒的活性成分。