氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响

旨在研究培养基中添加不同浓度的氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞生长、κ-酪蛋白(CSN3)和糖皮质激素受体(NR3C1)基因表达及其κ-酪蛋白和总酪蛋白相对含量的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加氢化可的松1、10、100和1 000ng·mL-1,测定CSN3和NR3C1基因表达量以及κ-酪蛋白和总酪蛋白相对含量的变化。结果表明:1)培养时间<20h,1~1 000ng·mL-1氢化可的松对健康奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响差异不显著(P>0.05),但1 000ng·mL-1组细胞增殖较慢;培养时间>20h,1 000ng·mL-1的氢化可的松显著抑制了奶牛乳腺上皮细胞的增殖(P<0.05)。2)1~100ng·mL-1的氢化可的松对健康奶牛乳腺上皮细胞CSN3、NR3C1基因表达具有显著地促进作用(P<0.05),其中1~10ng·mL-1的氢化可的松能够显著增加奶牛乳腺上皮细胞κ-酪蛋白和总酪蛋白的相对含量(P<0.05)。3)氢化可的松的促进乳蛋白合成作用具有一定的剂量依赖关系,小剂量的氢化可的松(1ng·mL-1)有利于奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白的合成,随着添加剂量的增加,尤其是大于1 000ng·mL-1,它的促乳蛋白合成作用逐渐减弱,甚至抑制了奶牛乳腺细胞的增长进而抑制乳腺乳蛋白的合成。结果提示,随着氢化可的松浓度的增加,CSN3和NR3C1基因的表达量及CSN3和总酪蛋白相对含量均呈下降的趋势,其中以1ng·mL-1的添加效果最好。

基于α_s-酪蛋白特异性的牛乳总蛋白质ELISA定量检测方法的建立

本研究旨在建立牛乳中总蛋白质的ELISA定量检测方法,并评价该方法在牛乳掺假辨识中的应用效果。首先用αs-酪蛋白标准品免疫新西兰白兔,制备αs-酪蛋白特异性抗血清,并建立αs-酪蛋白的间接ELISA检测方法,结果显示血清效价为1∶640,αs-酪蛋白检测的线性范围是25-600 ng/ml,R2=0.999 5,回收率是96.6%-105.2%。再应用乳成分分析仪,凯氏定氮法和所建立的ELISA法测定8份来源不同的原料乳中总蛋白和αs-酪蛋白含量,结果显示不同牛乳中总蛋白质含量在0.029 2-0.029 8 g/ml,αs-酪蛋白含量在0.008 4-0.009 2 g/ml,占牛乳总蛋白质的比例恒定,平均为0.3,并用该系数建立牛乳中总蛋白质的定量方法。最后对5份人为兑水稀释、添加尿素、BSA和三聚氰胺的模拟掺杂牛乳样品进行检测,测定结果表明基于αs-酪蛋白的ELISA方法比乳成分分析仪法和凯氏定氮法具有更高的灵敏性和特异性,含氮添加物对测定结果无显著影响（P〉0.05）,更适合于作为原料乳及含乳产品中牛乳蛋白质的定量分析。

高通量快速检测母乳总蛋白、乳清蛋白和酪蛋白含量方法的比较研究

分别利用Lowry、BCA和Bradford三种方法对母乳中总蛋白、乳清蛋白和酪蛋白的含量进行了测定,并以凯氏定氮法为标准,对三种方法的检测结果进行了比较。结果表明Lowry和Bradford法适用于母乳中总蛋白含量的测定,Lowry法适于母乳中乳清蛋白含量的测定,Lowry、BCA和Bradford三种方法均适用于母乳中酪蛋白含量的测定。采用上述方法,只需要4 m L母乳样本,1.5 h内即可完成母乳总蛋白、乳清蛋白和酪蛋白的微量、高通量快速测定。上述方法适用于较大量母婴营养状况的调查研究,可为母乳化婴幼儿配方乳粉的研制以及促进婴幼儿生长发育提供科学依据。

藏药二十一味寒水石丸中的总鞣质、没食子酸和鞣花酸的含量测定

目的：建立二十一味寒水石丸中总鞣质、没食子酸和鞣花酸的含量测定方法.方法：以干酪素作为吸附剂,碱性条件下显色,以磷钼钨酸为氧化剂,用紫外可见分光光度法测定鞣质含量;采用HPLC法同时测定没食子酸和鞣花酸的含量.使用迪马Diamonsil-2 C18（4.6 mm×250mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.1磷酸水梯度洗脱,体积流量分别为1.0mL/min,柱温为30℃;检测波长270nm,测定.结果：以没食子酸计的鞣质含量在0.5～ 5μg·ml-1的范围内线性关系良好（r=0.9991）,平均回收率为95.77％,RSD为0.70％（n=6）;没食子酸在0.32～1.6μg范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为98.70％,RSD为1.01％（n=9）,鞣花酸在0.372～.1.86μg范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为99.63％,RSD为0.75％（n=9）.结论：本方法准确、可靠简便,具有较强专属性,可用于常用藏药二十一味寒水石丸中总鞣质、没食子酸和鞣花酸的含量测定.

酪蛋白磷酸肽、钙粉及二者复合物对高尿酸血症大鼠的影响

目的:研究酪蛋白磷酸肽(CPPs)、钙粉及二者复合物对高尿酸血症大鼠血清尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、腺苷脱氨酶(ADA)及肝脏XOD和ADA的影响。方法:用腺嘌呤(100mg/(kgbw·d))+乙胺丁醇(250mg/(kgbw·d))给大鼠灌胃3周,造成高尿酸血症模型,再在饲料中加入酪蛋白磷酸肽、钙粉以及二者复合物对其进行干预28d。结果:干预前造模大鼠的血尿酸水平高于空白组;和模型组相比,各干预组大鼠血清UA和TC水平均降低,同时各组肝脏中XOD、血清和肝脏中ADA活性均低于模型组,其中复合组的效果最为明显(P<0.05)。结论:酪蛋白磷酸肽结合钙粉可相对更好地促进尿酸降低。

采用改良磷钼钨酸-干酪素法测定闽产盐肤木根中总鞣质含量

目的:建立舒冠通糖浆原药材盐肤木根中总鞣质的含量测定方法,并对产自福建的该药材进行鞣质含量的测定。方法:以《中华人民共和国药典》2015版四部中鞣质含量测定法(磷钼钨酸-干酪素法)为基础,在显色温度、显色时间、干酪素的用量及处理方法等方面进行改良,确定了含量测定方法,并用该法测定样品中总鞣质含量。结果:通过对鞣质含量测定各环节的考察,确定了原药材鞣质含量测定方法,并进行了方法学验证,没食子酸在1.00～12.00μg/mL与吸光度呈良好的线性关系,r=0.9985,操作重复性良好,RSD=2.89%,闽产盐肤木根中鞣质含量为22.1 mg·g-1(n=6,RSD=2.39%)。结论:经方法学验证,该方法可用于测定闽产盐肤木根中总鞣质的含量。

一种细菌计数培养基的试验研究

目的:营养琼脂培养基是药典规定的细菌计数用培养基,因有反映该培养基质量不稳定,有必要研制一种更好的细菌计数培养基,载入中国药典。方法:通过10株代表菌,对3种培养基的初步筛选,研究出更适合细菌计数的培养基 PYA 后,并进一步优化;以20批样品对本培养基进行了初步考察。结果:PYA 培养基优于营养琼脂培养基。结论:PYA 培养基现在是国内细菌计数的最好培养基,与国产英、美药典的大豆胰酪胨琼脂培养基质量相当。

口服液体药用塑料瓶微生物污染状况分析及试验方法改进

目的:通过分析口服液体药用塑料瓶的微生物污染状况,评价其对口服液体制剂质量的贡献。方法:参考中国药典2010年版和美国药典36版方法,测定2013年全国评价性抽验中得到的4个品种、9种规格、43家企业的55批口服液体药用塑料瓶的微生物种类和数量。采用薄膜过滤法处理样品提取液,用胰酪大豆胨琼脂培养基进行培养,计数需氧菌总数,用胆盐乳糖增菌液培养,进行控制菌检查。结果:每批样品的细菌、霉菌和酵母菌数及大肠埃希菌均符合国家药品包装容器(材料)标准(试行)规定,58%的样品未检出污染微生物,污染有微生物的样品菌数均未超过7 cfu·瓶-1,均为环境污染菌芽孢杆菌类及球菌类,且均未检出大肠埃希菌。结论:口服液体药用塑料瓶微生物污染未超标。将细菌数、霉菌和酵母菌数统一合并为需氧菌总数测定,可在一张滤膜上同时测定样品的细菌数、霉菌和酵母菌数。改进的检验方法具有省时、方便的特点。

核桃楸叶总鞣质的大孔树脂纯化工艺考察

目的:优选核桃楸叶总鞣质的大孔树脂纯化工艺。方法:利用静态吸附-洗脱试验考察AB-8,D101,NKA-9,Daion HP-20型大孔树脂的吸附与洗脱能力,通过单因素试验考察上样量、水洗用量及洗脱溶媒对核桃楸叶总鞣质纯化工艺的影响。采用干酪素法测定核桃楸叶总鞣质含量,检测波长760 nm。结果:选用AB-8型大孔吸附树脂,最佳纯化工艺为上样液质量浓度2.672 g·L-1,上样量250 mL,洗脱流速2 BV·h-1,加水6 BV洗脱除杂,收集50%乙醇洗脱液10 BV;总鞣质洗脱率、纯度分别为73.32%,35.02%。结论:AB-8型大孔树脂对核桃楸叶总鞣质的分离性能较好,优选的纯化工艺适用于工业化生产。