TFHL对慢性脑缺血大鼠海马Caspase-3、TNF-α、IL-1β的影响

目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对慢性脑缺血大鼠海马Caspase-3、TNF-α和IL-1β的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TFHL组和银杏叶片组,采用永久性双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑缺血模型。免疫组化法检测大鼠海马Caspase-3蛋白的表达,ELISA法检测海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的含量。结果:与模型组比较,TFHL组大鼠海马Caspase-3蛋白的表达和TNF-α、IL-1β的含量明显降低(P<0.05)。结论:TFHL对慢性脑缺血大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与TFHL减轻炎症反应、下调Caspase-3蛋白表达有关。

大孔吸附树脂分离纯化山楂叶总黄酮的研究

比较了6种大孔吸附树脂ADS-5、ADS-8、ADS-17、NKA-9、D-101和AB-8对山楂叶总黄酮的吸附及脱附性能。在研究静态吸附的基础上，筛选出效果较好的树脂进行动态实验研究。实验结果表明：最佳分离纯化山楂叶总黄酮的树脂为D-101。该树脂室温下对山楂叶总黄酮动态吸附一脱附较优的工艺参数为：上柱液pH值4、5～5、5；上柱速度2BV／h，溶液处理量6Bv／次：洗脱剂为70％乙醇，脱附剂的流速1BV／h，脱附剂用量2BV／次。

山楂叶不同采收期多种有效成分含量的比较

目的探索山楂叶最佳采收期。方法 HPLC条件:金丝桃苷检测采用Shim-pack C18(150mm×4.6mm,5μm);乙腈-甲醇-四氢呋喃-5 mL·L^(-1)醋酸溶液(1∶1∶19.4∶78.6)为流动相,检测波长为363nm。牡荆素鼠李糖苷检测采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm);四氢呋喃-甲醇-乙腈-乙酸-水(38∶3∶3∶4∶152)为流动相;检测波长为330nm。总黄酮检测利用可见分光光度法,以芦丁对照品为对照,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系作显色剂,在500nm波长处测定总黄酮含量。结果金丝桃苷进样量在0.080 5~0.402 4μg范围内,质量浓度与峰面积线性关系良好(r=0.999 3);牡荆素鼠李糖苷进样量在0.418~2.090μg范围内,质量浓度与峰面积线性关系良好(r=0.999 1)。结论 5月采收的山楂叶中牡荆素鼠李糖苷含量最高;8~11月采收的山楂叶中金丝桃苷及总黄酮的含量较高。

HPLC法同时测定口服山楂叶总黄酮提取物后大鼠血浆中3种黄酮的含量及药动学研究

目的建立能同时测定口服山楂叶总黄酮提取物(TFHLE)后大鼠血浆中牡荆素-4″-O-葡萄糖苷(VG)、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷(VR)和金丝桃苷(HP)含量的HPLC法。方法口服TFHLE后,采集不同时间点大鼠血浆样品,以黄芩苷为内标,甲醇沉淀蛋白。色谱柱为Phenomsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-四氢呋喃-4 mL·L^-1醋酸水溶液(6∶1.5∶18.5∶74),检测波长为332 nm。结果VG、VR和HP的线性范围分别为2.5~500,0.2~25和0.25~12.5μg·mL^-1;日内精密度RSD值均在1.2%~13.2%范围内;日间精密度RSD值均在1.5%~12.3%范围内;3种成分和内标物的回收率均不低于87.59%±0.97%。VG、VR和HP的药动学参数AUC0→t与剂量呈正比,t1/2与剂量无相关性,提示VG、VR和HP呈线性动力学特征。结论该方法简便、快速、专属性强,可用于大鼠血浆中VG、VR和HP的含量测定及其药动学研究。

miR-19b参与山楂叶总黄酮调控缺氧复氧PC12细胞损伤和缺血性大鼠脑损伤的研究

目的研究miR-19b参与山楂叶总黄酮对氧化损伤途径的作用机制研究。方法构建缺氧复氧(H/R)PC12细胞模型,给予山楂叶总黄酮处理,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达,试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-19b表达水平。在PC12细胞中转染miR-19b inhibitor,给予缺氧复氧和山楂叶总黄酮处理,同样检测细胞增殖、凋亡和LDH、MDA、ROS、SOD水平。同时,构建脑缺血性模型大鼠,用不同剂量山楂叶总黄酮处理,连续4周后,对各组大鼠的神经功能缺损进行评估,并对各组大鼠海马组织CA1区锥体细胞层进行染色,在光学显微镜下观察其细胞学形态。再通过qRT-PCR检测各组大鼠脑细胞海马组织中miR-19b的表达。结果缺氧复氧处理以后的PC12细胞增殖能力下降,LDH漏出率升高,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,MDA、ROS水平升高,SOD水平降低,miR-19b表达水平减少。山楂叶总黄酮处理后的缺氧复氧PC12细胞增殖能力升高,LDH漏出率降低,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,MDA、ROS水平降低,SOD水平升高,miR-19b表达水平升高。转染miR-19b inhibitor可以逆转山楂叶总黄酮对缺氧复氧PC12细胞增殖、凋亡和LDH、MDA、ROS、SOD水平影响。脑缺血模型大鼠实验结果发现,山楂叶总黄酮能够明显改善脑缺血模型大鼠的神经功能缺损症状,减轻脑神经元海马组织的细胞损伤,qRT-PCR检测各组大鼠脑组织中miR-19b表达,结果与PC12细胞中一致。结论miR-19b参与山楂叶总黄酮对氧化损伤途径的作用。

山楂叶总黄酮制备工艺参数的研究

目的:对山楂叶总黄酮的制备工艺进行研究,并以山楂叶总黄酮的收率为指标,筛选出最佳的工艺。方法:采取渗漉的方法对山楂叶中总黄酮进行提取。结果:山楂叶渗漉收集乙醇10倍量,渗漉速度为5ml/min·kg,醋酸乙酯每次用量为0.7倍时山楂叶总黄酮的收率最好。结论:采用该工艺可达到对山楂叶总黄酮提取的目的。

超声波辅助提取山楂叶中总黄酮工艺研究

[目的]研究超声波辅助方法提取山楂叶中总黄酮的工艺条件。[方法]试验以一定浓度的乙醇为溶剂,采用超声波辅助方法对山楂叶中总黄酮进行提取,并对影响山楂叶总黄酮提取率的因素进行单因素试验和正交试验分析,优选最佳提取工艺条件。[结果]优选的山楂叶总黄酮的最佳提取条件为:乙醇浓度50%,料液比1∶24(g/ml),提取温度60℃,提取时间30 min,提取次数为2次;在优化的条件下,总黄酮的得率可高达2.43%。[结论]超声波辅助提取山楂叶总黄酮的提取时间短、提取效果较好。

Box-Behnken设计优化山楂叶总黄酮提取纯化工艺及其抑菌活性研究

利用Box-Behnken设计优化山楂叶总黄酮的提取及纯化工艺,优化实验表明,提取工艺参数:提取剂乙醇体积分数65%、提取温度(67±1)℃、提取时间80 min,山楂叶总黄酮提取率可达92.2%;纯化工艺参数:洗脱剂乙醇体积分数60%、洗脱剂用量4.4倍柱床体积(BV)、洗脱流速3.7 BV/h,提取物中山楂叶总黄酮平均质量分数可达86.8%.此为最佳提取工艺和最佳纯化工艺参数.体外抑菌试验表明,山楂叶提取物对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均具有良好的抑菌功效.

逆境胁迫处理后山楂叶总黄酮含量变化及对心肌缺血性大鼠分子机制的研究

探讨不同品种山楂叶总黄酮含量变化及其作用于心肌缺血性大鼠的分子机制。选取长势良好,大小一致的不同品种山楂树幼苗,通过有机溶剂萃取法提取山楂叶总黄酮,使用HPLC及紫外分光光度计法测定其含量。通过紫外分光光度计测定其抗氧化能力;再将山楂叶总黄酮作用于心肌缺血性模型大鼠,通过心电图法、生化指标检测以及Real-Time PCR技术确定其作用分子机制。结果显示:“大金星”山楂叶总黄酮含量及其抗氧化能力显著高于其它品种;山楂叶总黄酮能够显著改善急性心肌缺血性大鼠的心电图ST段状态、生化指标以及血流动力学参数等;其能够显著影响心肌缺血性大鼠心肌CaSR、c-fos以及Cyt-C基因的表达。4种山楂叶品种中,“大金星”山楂叶总黄酮含量及抗氧化能力显著高于其它组,且能够显著改善心肌缺血性大鼠的状态,为将来遴选优质生药来源提供了理论基础和实践基础。

山楂叶总黄酮对FXR及其相关基因调控治疗NAFLD模型大鼠的机制研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的治疗作用及其机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组,模型组,TFHL高、中、低剂量组,共5组,高脂膳食建立NAFLD大鼠模型。HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化;生化仪检测血清血脂等;RT-PCR法检测肝组织FXR、PPAR-α、PGC1α、CYP7A1等的mRNA表达。Western Blot检测肝脏上述各项基因的蛋白表达。结果:与模型组比较,应用TFHL干预后,肝组织TG、CHOL含量显著降低,同时能增强肝脏FXR、PPAR-α、PGC1αmRNA和蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:TFHL可调节NAFLD大鼠肝脏的脂质代谢,改善炎性反应状态,其机制可能与调控FXR相关基因有关。

山楂叶总黄酮对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马AChE,ChAT活性的影响

目的:探讨山楂叶总黄酮(total flavone of Hawthorn leaf,TFHL)对血管性痴呆大鼠空间学习记忆障碍的治疗作用及机制。方法:健康雄性SD大鼠64只,随机分为假手术组(sham control group)、模型组(model group)、TFHL 70,140 mg·kg-1及银杏叶片组(3.5 mg·kg-1),每组16只。采用永久性双侧颈总动脉结扎法制备血管性痴呆大鼠模型,TFHL 70,140 mg·kg-1组连续给药36 d。采用Morris水迷宫评价大鼠的空间学习学习记忆能力,分光光度比色法检测大鼠海马乙酰胆碱酯酶(AChE)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性。结果:与假手术组比较,血管性痴呆模型组大鼠学习记忆能力显著降低,大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台区次数显著减少(P<0.05),平台象限游泳距离百分比显著降低(P<0.05);ChAT活性明显降低(P<0.05),AChE活性显著增强(P<0.05)。TFHL及银杏叶片能改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力,缩短大鼠逃避潜伏期(P<0.05),增加大鼠穿越平台次数及平台象限游泳距离百分比(P<0.05),增强ChAT活性(P<0.05),降低AChE活性(P<0.05)。结论:TFHL可通过提高海马ChAT活性、降低AChE活性改善血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经系统的功能,从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆功能。