紫皮石斛花总黄酮提取工艺优化及抗氧化活性研究

以紫皮石斛花为原料,采用超声波辅助法提取紫皮石斛花总黄酮。以乙醇体积分数、料液比、提取温度及提取时间为影响因素,总黄酮提取率为考查指标,在单因素试验基础上,采用响应面法优化紫皮石斛花总黄酮提取工艺条件。通过测定紫皮石斛花总黄酮对超氧阴离子、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基及羟自由基的清除率,评价其抗氧化活性。结果表明,紫皮石斛花总黄酮最佳提取工艺条件为乙醇体积分数60%,料液比1∶35(mg∶mL),提取温度70℃,提取时间29 min,在此条件下,总黄酮提取率为3.54%±0.013%,与预测值3.41%接近。紫皮石斛花总黄酮对超氧阴离子、DPPH自由基、羟自由基的半数抑制质量浓度分别为0.32,0.17,0.42 mg/mL,表明紫皮石斛花总黄酮具有一定的抗氧化作用。

不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱及总黄酮含量的差异

采用苯酚硫酸法、酸性染料比色法以及硝酸铝比色法分别测定并比较不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱及总黄酮的含量差异,为铁皮石斛资源的充分合理利用提供科学依据。结果表明,不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱、总黄酮的含量均有显著差异,其中总多糖主要集中于茎,总生物碱和总黄酮主要集中于叶;总多糖含量以2年龄茎最高,为35.32%,总生物碱含量以1年龄叶最高,为0.036%,总黄酮含量以半年生叶最佳,为0.104%;总多糖含量随着生长龄的增加而逐渐减少;3年龄以内的总生物碱和总黄酮含量明显较高,且不同龄之间含量差异较小,而当植株生长至4、5年龄时,其总生物碱及总黄酮的含量明显较低。铁皮石斛茎与叶中各含有较高的不同有效成分,茎和叶均可作为药用资源加以充分利用;为获取最佳效益,综合考虑生长周期、生物量及药用成分含量等因素,人工栽培的铁皮石斛以3年龄内采收为宜,不宜栽种4年以上。

不同花期石斛花主要营养成分分析与品质比较

为了确定铁皮石斛(Dendrobium officinale)、杂交石斛(Dendrobium officinale×Dendrobium nobile)、球花石斛(Dendrobium thyrsiflorum)及鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum)花的最佳采收期,测量3个不同花期(花苞期、微花期、盛花期)的多糖、总黄酮和水溶性浸出物含量,并进一步测定最佳采收期的石斛花中氨基酸及矿物质元素含量等营养成分。结果表明:盛花期的铁皮石斛、杂交石斛、球花石斛及微花期的鼓槌石斛花的多糖、总黄酮和水溶性浸出物含量总体上较其他2个时期高;铁皮石斛盛花、杂交石斛盛花、球花石斛盛花、鼓槌石斛微花中必需氨基酸种类齐全,药效氨基酸占总氨基酸的比例为63.8%~66.7%,氨基酸比值系数分(SRC)分别为66.4、65.9、63.1、66.0,第一限制氨基酸均为蛋氨酸+半胱氨酸;4种石斛花中K含量最高(≥2.52×10~6 mg/kg),铁皮石斛盛花中Fe(177.33 mg/kg)、鼓槌石斛微花中Cu(107.00 mg/kg)含量较高。这表明石斛花具有较高的营养价值,为石斛花资源的开发提供了一定的理论依据。

铁皮石斛花总黄酮提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

[目的]确定铁皮石斛花中总黄酮超声辅助提取最佳工艺条件,并对其抗氧化活性进行评价。[方法]采用正交试验方法,以总黄酮提取率为考察指标,对铁皮石斛花总黄酮提取方法的影响因素进行探讨,并对铁皮石斛花总黄酮提取工艺进行优化。以羟自由基清除率、DPPH和ABTS自由基清除率为指标,对铁皮石斛花总黄酮的体外抗氧化活性进行评价。[结果]铁皮石斛花总黄酮的最佳提取条件:乙醇体积分数80%,料液比1:50,提取温度55℃,提取次数2次,在以上条件下,总黄酮提取率达1.99%。铁皮石斛花总黄酮对羟自由基、DPPH和ABTS自由基有较强的清除作用,且羟自由基抗氧化活性与总黄酮含量呈正相关。[结论]利用正交法分析结果可靠,得到了铁皮石斛花总黄酮超声提取的最佳工艺条件,且实验结果还表明铁皮石斛花具有较强的抗氧化活性。

超声-乙醇法提取铁皮石斛花总黄酮及其体外抗氧化性的研究

以铁皮石斛花为材料,通过单因素和正交试验对超声-乙醇法提取铁皮石斛花总黄酮的工艺进行研究。结果表明,超声波乙醇法提取铁皮石斛花总黄酮的最佳工艺为乙醇体积分数80%,料液比1∶35(g∶m L),超声温度40℃,超声时间50 min,在此条件下石斛花总黄酮提取率最高,为2.31%。对超声-乙醇法提取的铁皮石斛花总黄酮进行抗氧化的活性测定,试验结果显示铁皮石斛花总黄酮对DPPH·、·OH有明显的清除作用,当质量浓度达10 mg/m L时,其清除率分别为89.77%和80.01%。

霍山石斛花的热风干燥特性、品质及其护色应用研究

为研究热风干燥温度和护色剂的应用对霍山石斛花干制品品质特性的影响,通过改变热风干燥温度(50、60、70、80℃),对比不同温度下霍山石斛花的干燥速率、失水特性、主要生物活性成分(多糖、总酚、黄酮)含量,并探讨不同护色剂的应用效果,最终确定干燥工艺。结果显示:50℃的样品干燥时间最长,70℃的样品总酚含量、80℃的样品黄酮类化合物含量最低。综合考虑干燥效率和生物活性成分含量,最终选择60℃作为霍山石斛花的干燥温度。此条件下,干燥时间为4. 5 h,干制品的黄酮、多糖和总酚含量分别为(10. 94±0. 10)、(16. 80±2. 69)和(28. 06±0. 14) mg/g。进一步采用0. 5 g/L异抗坏血酸钠在干燥前作护色处理可提升霍山石斛花干制品色泽品质。利用0. 5 g/L异抗坏血酸钠对霍山石斛花护色预处理,在60℃条件下热风干燥4. 5 h,所得干制品的外观色泽良好,生物活性成分最佳。

基于网络药理学分析铁皮石斛花总黄酮抑制结肠癌作用机制及体外实验验证

目的运用网络药理学和体外生物学实验对铁皮石斛花总黄酮治疗结肠癌的活性成分、潜在作用靶点和信号通路进行研究,探索其治疗结肠癌的可能作用机制。方法利用LC-MS/MS对铁皮石斛花黄酮类代谢物进行成分分析。通过TCMSP筛选出铁皮石斛总黄酮的活性成分及靶点基因,GeneCards数据库及DisGeNET数据库筛选出结肠癌的疾病靶点基因,构建“药物-有效成分-靶基因-疾病”调控网络图,STRING数据库构建蛋白互作网络图(PPI),对关键靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。采用MTT法检测铁皮石斛花总黄酮对HCT116细胞的增殖抑制活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验观察铁皮石斛花总黄酮对HCT116细胞迁移能力的影响;Western blot检测相关凋亡蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3)和基质蛋白(MMP-12、MMP-3)的表达。结果代谢组分析获得52个黄酮类化合物,经过筛选得到27个活性成分,通过相关数据库平台预测得到作用靶点178个,PPI网络核心蛋白为丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、肿瘤蛋白P53(TP53)、转录因子AP-1(JUN)、肿瘤坏死因子(TNF)、雷帕霉素靶蛋白(MTOR)等;GO富集分析显示铁皮石斛花总黄酮会影响信号转导、细胞凋亡和增殖调控等;KEGG通路富集分析显示铁皮石斛花总黄酮在细胞增殖、凋亡、PI3K-Akt及肿瘤等信号通路中发挥作用。实验结果表明,铁皮石斛花总黄酮能抑制HCT116细胞的增殖,促进细胞的凋亡,抑制细胞的迁移;还能上调Bax/Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白的表达,诱导细胞凋亡。结论铁皮石斛花总黄酮可通过多靶点、多途径发挥抗结肠癌的作用,其作用机制可能与影响凋亡基因Bax及Bcl-2的表达有关。

铁皮石斛花总黄酮的绿色提取工艺优化

目的:为充分利用铁皮石斛花中的黄酮类物质,开发了一种绿色高效的总黄酮提取工艺。方法:以铁皮石斛花总黄酮得率为指标,使用新型低共熔溶剂,基于单因素实验结合响应面法(Response surface methodology,RSM)优化总黄酮提取工艺参数,并使用大孔吸附树脂考察溶剂的循环利用能力。结果:氯化胆碱、乙二醇(摩尔比1:4)组成的低共熔溶剂(Deep eutectic solvents,DESs)得率最高;最佳提取条件下(DESs含水量18.9%,温度88.2℃,液固比23.3:1 mL/g,时间38.0 min),得率达到22.457 mg/g;大孔吸附树脂ADS-8对总黄酮吸附率、解吸率分别为78.32%、83.55%,回收后的DESs重复利用率达95.47%。结论:低共熔溶剂是一种高效绿色的提取方法,可循环利用铁皮石斛花中总黄酮的提取。

响应面法优化铁皮石斛花总黄酮的提取工艺

利用响应面分析法优化铁皮石斛花总黄酮提取制备工艺,考察单因素试验对乙醇提取浓度、物料比,超声时间对总黄酮提取率的影响,在单因素试验结果的基础上建立响应面回归模型,优化其总黄酮提取工艺。获得最佳工艺条件为:乙醇提取浓度为70%,物料比为52∶1(mL·g^(-1)),超声时间为34 min,在此最佳条件下总黄酮实际提取率为19.50 mg·g^(-1),与预测结果相符,优化的提取工艺理论可行。

鼓槌石斛花总黄酮及挥发性成分研究

研究了滇产鼓槌石斛花中的总黄酮及挥发性成分。分别用超声波法和热回流法提取鼓槌石斛花总黄酮,以芦丁作为标准品,采用紫外可见分光光度法对石斛花中的总黄酮含量进行测定;采用水蒸气蒸馏法提取鼓槌石斛花中的挥发性成分,采用GC-MS技术结合人工解析分析挥发油的化学组成。结果显示,总黄酮在10.08~100.8 mg/L浓度范围内呈现良好线性关系（R2=0.9994）,方法在60 min内呈现良好稳定性（RSD=0.19%）;2种方法提取的总黄酮含量分别为0.89%和0.27%,高效液相色谱分析显示2种提取方法所得黄酮的组成近似、含量不同,整体而言超声波法提取效率更高;挥发油经GC-MS分析共检出115个峰,鉴定了其中的42个,占挥发油总量的59.1%。

不同干燥方法对铁皮石斛花黄酮含量和抗氧化活性的影响

目的研究铁皮石斛花的不同干燥方法对其黄酮含量及抗氧化活性的影响,旨在找出铁皮石斛花的最佳干燥方法,为铁皮石斛花的综合开发利用提供科学依据。方法采用晒干、阴干、热风干燥(60℃、80℃、100℃)、红外干燥、微波干燥、冷冻干燥等6种方法对铁皮石斛花进行干燥处理;利用分光光度法测定不同干燥方法得到的铁皮石斛花的黄酮含量,选取DPPH清除率、羟自由基清除率和总还原能力评价其抗氧化活性。结果冷冻干燥法所得的铁皮石斛花的黄酮含量为15.66mg·g-1,显著大于其他干燥方法所得样品的黄酮含量;且冷冻干燥后的铁皮石斛花提取液的DPPH、羟自由基以及还原能力均表明其具有较高的抗氧化活性。结论不同干燥方法对铁皮石斛花清除自由基活性及活性成分的影响较大,冷冻干燥法是目前较优的铁皮石斛花干燥方法。