毛冬青总黄酮提高大鼠脑缺血耐受作用研究

目的观察毛冬青总黄酮对脑缺血预处理大鼠的保护作用及对皮层、海马CA1区脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(Glial-derived neurotrophic factor,GDNF)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响,探讨毛冬青总黄酮提高脑缺血耐受的作用机制。方法采用阻断大鼠双侧颈总动脉血流10min做为脑缺血预处理(Cerebral ischemic preconditioning,CIP)模型,72h后阻塞大脑中动脉(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h作为脑缺血再灌注模型。Wistar大鼠随机分为5组:假手术组(Sham),脑缺血再灌注损伤组(cerebral ischemia reperfusion,I/R),脑缺血预处理组(CIP+MCAO),毛冬青总黄酮高剂量组(IPTF,200mg/kg),毛冬青总黄酮低剂量组(IPTF,100mg/kg)。采用神经缺损评分(NDS)法评价行为学改变,TTC染色法评价脑梗死体积,免疫组化法观察BDNF、GDNF、VEGF的表达变化。结果毛冬青总黄酮能明显改善脑缺血预处理大鼠神经功能缺损评分,减小脑梗死体积;增加皮层、海马CA1区BDNF、VEGF蛋白阳性表达面积和积分光密度值。结论毛冬青总黄酮提高脑缺血耐受的作用与上调BDNF、VEGF内源性保护蛋白的表达有关。

毛冬青叶中总黄酮提取工艺及其抗氧化性能研究

以毛冬青叶为原料,进行毛冬青叶总黄酮提取工艺及其抗氧化性活性的研究,建立以芦丁为标准品,分光光度法测定毛冬青叶总黄酮含量的分析方法。结果显示:以60%乙醇的水为提取溶剂,浓度为60%、料液比为1∶60(g/mL)、50℃水浴5 h条件下提取1次,毛冬青叶总黄酮提取率为15.08%。其总黄酮化合物对羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH)自由基均有较强的清除效果,最大清除率分别为45.96%和83.33%。

毛冬青有效部位中总黄酮含量测定

目的:建立毛冬青有效部位中总黄酮含量的测定方法。方法:采用紫外分光光度法,以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂,以芦丁为对照品,在510 nm波长处对毛冬青有效部位中总黄酮进行含量测定。结果:芦丁在0.99-49.50 mg/L范围内呈良好的线性关系,r=0.999 1,平均回收率为98.9%,RSD为1.52%(n=6)。结论:所建立的方法准确、简便、快速,重现性好,适用于毛冬青有效部位中总黄酮含量测定。

毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型的影响

目的探讨毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型的作用特点及其机制。方法大鼠连续灌服不同剂量毛冬青总黄酮10 d,于第10天给药物后1 h,大鼠两侧颈总动脉用微动脉夹夹闭30 min,复制脑缺血模型;取大鼠脑,一半脑组织用生理盐水制脑匀浆,测脑匀浆三磷酸腺苷(ATP)酶水平,乳酸(LD)、丙二醛(MDA)含量;另一半脑组织固定、切片,观察脑组织的病理变化。结果微动脉夹夹闭双侧颈总动脉可成功复制脑缺血模型。与模型组比较,毛冬青总黄酮可显著提高脑匀浆Na+-K+-ATP、Mg2+-ATP、Ca2+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01,P<0.05),明显降低LD含量(P<0.05),显著减少MDA的含量(P<0.01),显著减轻缺血所致的脑组织损伤。结论毛冬青总黄酮对大鼠脑缺血模型有较好的改善作用。

毛冬青总黄酮对小鼠血瘀合并脑缺血耐受模型的影响

采用小鼠连续注射地塞米松复制血瘀模型,并给予相应药物,连续灌服15 d后,阻断双侧颈总动脉血流10 min,恢复灌注5 d后,再次阻断双侧颈总动脉30 min。再灌注24 h,复制小鼠脑缺血耐受模型。取血测全血黏度;断头取脑,一半脑置于10%福尔马林溶液中固定,用于HE染色;另一半脑用生理盐水制备脑匀浆,用于测定脑组织匀浆中ATPase活力、GLU含量、脑匀浆中NOS表达;探讨毛冬青总黄酮对小鼠血瘀合并脑缺血耐受模型的保护作用机制。结果显示,与缺血耐受组(模型组)比较,高剂量毛冬青总黄酮组能够显著降低小鼠血流变高、中、低切值(P<0.01),中、低剂量毛冬青总黄酮组能够显著降低小鼠血流变低切值(P<0.01),明显减轻小鼠血流变中切值(P<0.05),中剂量毛冬青总黄酮组能够明显降低小鼠血流变高切值(P<0.05);高剂量毛冬青总黄酮能够显著升高各ATPase活力(P<0.01),中剂量毛冬青总黄酮能够显著增强Na+-K+-ATPase活力(P<0.01),低剂量毛冬青总黄酮能够明显升高Na+-K+-ATPase活力(P<0.05);高剂量毛冬青总黄酮能够显著降低Glu含量(P<0.01),其他给药剂量能够明显降低Glu含量(P<0.05);高剂量毛冬青总黄酮组可显著降低小鼠脑组织中TNOS,i NOS的水平(P<0.01),中剂量毛冬青总黄酮组可明显降低小鼠脑组织中TNOS,i NOS的水平(P<0.05),低剂量毛冬青总黄酮组可明显降低小鼠脑组织中i NOS的水平(P<0.05);各剂量毛冬青总黄酮均可改善脑组织病理改变。提示毛冬青总黄酮可从降低全血黏度、抑制炎症介质NOS的表达、降低Glu含量、升高ATPase活力、改善缺血脑部组织病理方面保护小鼠血瘀合并脑缺血耐受模型的脑损伤。

常见药用辅料对毛冬青总黄酮吸湿性的影响

目的:探讨常用制剂辅料对毛冬青总黄酮吸湿性的影响。方法:采用粉末吸湿法测定毛冬青总黄酮的吸湿率;以吸湿初速度、吸湿加速度、平衡吸湿时间、平衡吸湿量、临界相对湿度等参数为指标,考察辅料种类和用量毛冬青总黄酮吸湿性的影响。结果:毛冬青总黄酮临界相对湿度78.1%,乳糖、硬脂酸镁、滑石粉、磷酸氢钙均增大了样品的临界相对湿度。交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、淀粉和糊精均加速了样品的吸湿过程,增加了样品的平衡吸湿量,作用顺序为交联聚维酮>羧甲基淀粉钠>交联羧甲基纤维素钠>糊精>淀粉;磷酸氢钙、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁、微粉硅胶、微晶纤维素均不同程度地降低了样品的吸湿加速度和平衡吸湿量,作用顺序为磷酸氢钙>滑石粉>乳糖>硬脂酸镁>微粉硅胶>微晶纤维素。结论:合理的使用辅料能改善毛冬青总黄酮的吸湿性和稳定性。

毛冬青总皂苷提高血瘀大鼠脑缺血耐受的作用机制

目的:研究毛冬青总皂苷提高血瘀大鼠脑缺血耐受模型的作用机制,为中药毛冬青的新用提供实验依据。方法:采用大鼠连续注射地塞米松复制血瘀模型。给予相应的药物,连续灌服7d,于第7天给药后1h,阻断双侧颈总动脉血流10min,恢复灌注72h后,颈内动脉线栓法致左大脑中动脉栓塞2h,再灌注24h。复制大鼠脑缺血耐受模型。取血测全血黏度;断头取左脑,测定ATP酶、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力,HE染色观察海马区组织病理变化,免疫组化法观察Bcl-2、Bax阳性的表达情况。结果:缺血耐受组及缺血再灌注损伤组大鼠全血黏度明显升高、ATPase及T-SOD活力显著下降(P<0.01)、Bax阳性表达显著增加(P<0.01),大鼠血瘀合并脑缺血耐受模型复制成功。与缺血再灌注损伤组比较,缺血耐受组动物全血流变值升高,T-SOD及ATPase活力增强,动物脑组织的病理损伤程度明显减轻。与缺血耐受组比较,各剂量毛冬青总皂苷能显著或明显改善血瘀大鼠的全血黏度,增强ATPase、T-SOD活力及Bcl-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性表达,对脑神经细胞的损伤有明显的保护作用。结论:毛冬青总皂苷能从改善血液循环、改善能量代谢、诱导内源性抗氧化物活性增强、增强抗凋亡效应、减轻神经细胞损伤等方面实现提高脑缺血耐受的作用。

基于STAT5信号通路调控Treg免疫功能的毛冬青总皂苷抗脑缺血炎症损伤的分子机制研究

目的:探讨毛冬青总皂苷抗反复脑缺血再灌注炎症损伤的作用机制。方法:80只昆明雄性小鼠,分为假手术组,模型组,金纳多组,毛冬青总皂苷高、低剂量组(400、100mg/kg)。各组灌胃给予相应药物10d后,采用双侧颈总动脉反复阻断再灌注,造成小鼠脑缺血再灌注损伤模型(假手术组仅暴露双侧颈总动脉)。再灌注22h后,取材。ELISA检测血清白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-10,脑匀浆中NO、NOS水平;Western blot法检测小鼠脑组织STAT5、p-STAT5、Foxp3蛋白表达;HE染色法观察脑组织皮质区病理状态,免疫荧光染色检测小鼠脑组织CD_(4)^(+)CD_(25)^(+)Treg分布。结果:与模型组比较,毛冬青总皂苷可降低小鼠脑匀浆NOS、血清IL-6水平;升高血清IL-10、IL-2水平及脑匀浆NO水平;升高脑组织p-STAT5/STAT5、Foxp3蛋白表达及CD_(4)^(+)、Foxp3阳性表达;改善皮质区病理变化。结论:毛冬青总皂苷可通过调控STAT5激活Treg细胞拮抗炎症级联反应的恶性进程,改善局部脑损伤,发挥对脑缺血炎症损伤保护作用,可作为有效治疗脑缺血疾病的备选药物,进一步开发利用。