Isolation of exogenous fungi from Notoginseng Radix et Rhizoma and preliminary analysis of toxigenic fungi

Notoginseng Radix et Rhizoma(Sanqi in Chinese)is a precious traditional Chinese herbal medicine.It has the effect of dispersing blood stasis and stopping bleeding,reducing swelling and fixing pain.However,it tends to contaminate with harmful fungi during storage,which may make it much less effective.In order to understand the fungal contamination of Notoginseng Radix et Rhizoma and master its composition of the exogenous fungi.The surface fungi of Notoginseng Radix et Rhizoma samples collected from six Chinese provinces and districts were investigated by using dilution plate method.Detection of aflatoxins by UPLC-MS/MS.The results showed that Penicillium citrinum was dominantly isolated from Notoginseng Radix et Rhizoma samples from No.1 to No.4.Aspergillus flavus,which produces aflatoxin,was dominantly isolated from Notoginseng Radix et Rhizoma samples from No.5 and No.6.In addition,kinds of mycotoxin were assayed which were produced by three of those identified A.flavus.All three fungi strains produced aflatoxin B1(AFB1)and one strain HBSQ1-5 additionally produced other three kinds of mycotoxin,AFB2,AFG1 and AFG2.It is the results implied that it will be very important to take serious cautions when using Notoginseng Radix et Rhizoma.As well as,understanding the composition of the exogenous fungi of Notoginseng Radix et Rhizoma and the strains of toxin-producing fungi,which can play an important role in guiding the storage of Notoginseng Radix et Rhizoma.

Advances in Researches of Extraction Processes of Total Saponins of Pnanx Notoginseng

Traditional extraction methods of total saponins of Panax notoginseng include cold soaking method,water decoction method,alcohol reflux method,percolation method,macroporous resin adsorption method,and accelerated solvent extraction( ASE) method. Modern extraction methods include ultrasonic extraction,microwave assisted extraction,supercritical CO_2 extraction,microbial fermentation assisted extraction,neural network model optimized extraction method,and multi-stage countercurrent extraction method. This paper discussed principles of these methods and compared their advantages and disadvantages.

Box-Behnken响应面法优化复合益生菌发酵三七药渣工艺及体外抗氧化活性研究

目的以三七药渣为原料,通过益生菌发酵比较不同益生菌以及复合益生菌对各指标成分影响的差异,探究最佳发酵工艺。方法采用单因素、Box-Behnken响应面法优化发酵工艺,并通过体外抗氧化实验评价发酵产物的抗氧化能力。结果最佳发酵工艺为有氧发酵48 h、厌氧发酵36 h,嗜热链球菌、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的比例为2∶3∶1,料液比0.14 g·mL^(-1),接菌量5%,温度33℃。在最佳发酵工艺条件下,三七药渣中性多糖、酸性多糖、总黄酮的含量分别提高了105.64%、96.98%、123.83%,相较于单菌发酵均显著升高。发酵产物清除DPPH、ABTS自由基的IC 50值分别为1.774、3.065 mg·mL^(-1),还原Fe^(3+)的能力为0.138 mmol FeSO_(4)·g^(-1),较未发酵药渣显著增强。结论最佳发酵工艺能显著提高三七药渣中各指标成分含量,显著增强其抗氧化能力,相较单菌发酵各指标成分含量均显著提高,提示上述益生菌之间没有明显的拮抗作用。研究结果为三七药渣的资源化利用提供了科学依据和数据支撑。

三七药对的研究进展

三七作为临床常用中药,在临床应用中有多种药对形式。围绕近年来基于网络药理学的三七药对、传统三七药对及三七药对配伍前后化学成分变化的实验研究进行归纳和总结,系统阐释三七药对在临床应用的作用机制和科学内涵,为进一步研究三七药对使用规律、配伍理论、临床应用等方面提供新的思路。

红三七炮制工艺优化及其补血活性研究

目的优化红三七炮制工艺,并评价其补血活性。方法在单因素试验基础上,以蒸制温度、蒸制时间、烘干温度、烘干时间为影响因素,三七皂苷R1,人参皂苷Rg_(1)、Rb_(1)、Rk_(3)、Rh_(4),20(R)-人参皂苷Rg_(3)总含量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化炮制工艺。建立乙酰苯肼(APH)-环磷酰胺(CTX)联合诱导的小鼠贫血模型,比较红三七、熟三七补血活性差异。结果最佳条件为蒸制温度130℃,蒸制时间4 h,烘干温度60℃,烘干时间48 h,总皂苷含量为8.326%,RSD为0.087%。药理活性表明,不同炮制工艺对三七补血活性有影响,红三七的补血活性优于熟三七。结论该方法稳定可行,可用于红三七的规范生产。

冠心生脉丸质量标准提升

目的提升冠心生脉丸质量标准。方法TLC法定性鉴别人参和三七,分析采用硅胶G薄层板,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂。HPLC法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量,分析采用Thermo Accucore-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,2.6μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温20℃;检测波长203 nm。结果TLC斑点清晰,阴性无干扰。4种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9999),平均加样回收率91.21%~106.86%,RSD 0.68%~1.43%。结论该方法专属性、重复性良好,可为冠心生脉丸质量控制提供参考。

三七皂苷成分及临床药理作用研究进展

三七作为传统中草药现已受到医药界的共同认可和关注,现代植物化学研究表明三七皂苷是三七的主要化学成分。现代药理研究及临床应用发现,其具有抗癌、抗氧化及治疗心血管疾病等作用。综述三七主要化学成分和药理作用的研究进展,以期为三七的临床应用及后期研究提供帮助。

三七治疗动脉粥样硬化药理机制研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是引发心脑血管系统疾病的主要原因之一,是动脉内膜异常沉积日久所致的慢性炎症性疾病,病机复杂、治疗周期长久,是临床需要重点解决的重点疾病之一。其病理机制涉及血管平滑肌细胞增殖、内皮损伤、血管内血栓形成、炎症反应、脂质代谢异常、氧化应激加剧、自噬稳态失衡等,而当前对中药三七有效成分是近年来研究的热点和重点,其富含多种皂苷类和非皂苷类有效化学成分,能够综合调理多方面的通路、分子机制,达到减轻炎症反应和内皮损伤,恢复正常脂质代谢、重新调整自噬稳态等的平衡,抑制血管内血栓形成、血管平滑肌细胞增殖,并最终达到预防和治疗AS的目的。鉴于三七在抗AS中的重要作用,该文就三七及其有效成分对AS保护作用的体内外等研究进行综述,为中医药新产品研究开发及临床应用辨证治疗用药提供参考和依据。

试论三七补血

三七首载于《跌损妙方》,《本草纲目》云三七主治“吐血、咳血不止”“无名痈肿,疼痛不止”,后世本草多奉《本草纲目》所载为圭臬,言三七散瘀止血,消肿定痛,为活血化瘀之神药,直至《滇南本草》载三七“生用破血,炙用补血”,三七始有补血之说。现代研究发现熟三七的补血功效优于生三七,可以缓解血虚患者的临床症状,改善外周血象指标,通过保护造血器官、促进造血干/祖细胞的增殖、提高造血相关因子水平、改善造血微环境及代谢等作用发挥补血的作用。通过对三七的文献记载和现代研究的系统梳理,可为今后三七补血功效的临床应用及现代研究提供理论依据与参考。

基于网络药理学和分子对接探讨三七-骨碎补治疗股骨头坏死的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接探究“三七-骨碎补”药对治疗股骨头坏死的作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对“三七-骨碎补”药对的活性成分及成分靶点进行采集、筛选,通过CNKI、PubMed数据库对其进行补充,并利用UNIPORT数据库对靶点进行转换;通过GeneCards、TTD和OMIM数据库收集股骨头坏死的作用靶点,取得交集靶点后导入STRING数据库,生成PPI网络,并通过Cytoscape 3.9.0软件构建中药-活性成分-靶点网络;通过DAVID数据库对核心靶点进行GO功能富集分析与KEGG通路富集分析。结果 共得到“三七-骨碎补”药对的20个活性成分和229个潜在靶点,1386个股骨头坏死的靶点。GO富集分析主要包括炎症反应、凋亡过程、调节血管生成、与雌性激素响应等功能;KEGG富集分析主要包括脂质与动脉硬化、白细胞介素-17信号通路、类风湿性关节炎等信号通路。结论 “三七-骨碎补”药对治疗股骨头坏死具有成分多、靶点广、通路复杂的特点,可能通过IL6、TNF、TP53等靶点以及脂质代谢、白细胞介素-17等信号通路共同发挥治疗股骨头坏死的作用。

蜘蛛香中总环烯醚萜及2个指标性成分baldrinal和11-ethoxyviburtinal含量测定

目的 建立蜘蛛香药材中总环烯醚萜类成分及2 种环烯醚萜类成分baldrinal（缬草醛）和11-ethoxyviburtinal（环戊烷-吡喃-7-甲醛,4-乙氧基甲基）的含量测定方法,并测定3 个产地蜘蛛香药材中的成分含量.方法 采用紫外分光光度法,以11-ethoxyviburtinal 为对照品,在波长288 nm 处测定总环烯醚萜的含量;采用高效液相色谱法测定baldrinal 和11-ethoxyviburtinal 的含量,采用Phenomenex Luna C18 色谱柱,以乙腈-磷酸水为流动相,流速为0.95 mL/min,检测波长为288 nm,柱温为30 ℃.结果 蜘蛛香中总环烯醚萜类成分的浓度在2.088～14.616 μg/μL范围内线性关系良好,baldrinal、11-ethoxyviburtinal 分别在74.88～224.64 μg、41.6～249.60 μg 范围内线性关系良好,方法精密度、重复性、稳定性、加样回收率均良好.结论 本方法准确、简便、快速,可用于蜘蛛香药材的质量控制.

基于VOSviewer和CiteSpace的三七总皂苷研究热点及发展趋势

目的分析三七总皂苷相关研究文献,掌握其发展历程、研究热点和发展趋势。方法检索中国知网、维普网、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献和Web of Science核心合集数据库从建库至2024年4月收录的所有三七总皂苷相关中英文文献,通过VOSviewer 1.6.20、CiteSpace 6.3.R1、Pajek 645.18和NoteExpress 3.8对发文量、期刊来源、作者、研究机构、关键词进行分析。结果最终纳入2010篇中文文献,其中1703篇为期刊论文,307篇为学位论文,280篇英文文献,年度发文量总体呈波动上升趋势。中文文献主要发表于《中国中药杂志》《中国实验方剂学杂志》《中草药》等,英文文献主要发表于《Acta Pharmacologica Sinica》《Journal of Ethnopharmacology》等。中文文献作者共有4410名,英文文献有1476名,中英文发文量最多的分别是邓常清和ZHANG W。北京中医药大学中英文发文量均居于榜首,与多家机构合作,形成跨区域、有重要影响力的科研学术团体。中英文文献关键词分析结果显示,细胞凋亡、氧化应激、脑出血和再灌注损伤是三七总皂苷的热门方向。结论三七总皂苷的研究内容广泛,属于学科热门关注点,很多学者仍在深度挖掘其治疗疾病的价值和作用机制,分子机制上主要聚焦于细胞凋亡、氧化应激的作用途径,疾病治疗中脑出血、再灌注损伤是当前热点研究内容。

基于熵权法联合灰色关联度分析法的三七药材质量评价

目的评价不同产地三七药材的质量。方法选取云南省5个州/市的44批三七药材为样品,按2020年版《中国药典(四部)》通则项下方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量,采用高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb1含量,并计算此3种皂苷(合称总皂苷)含量。采用熵权法计算各指标权重,采用灰色关联度分析法评价药材样品质量。结果44批药材样品中上述8个指标的含量依次为5.13%~8.84%、2.11%~4.96%、0.10%~1.89%、20.18%~28.69%、0.80%~1.58%、2.82%~5.20%、2.79%~5.00%、6.54%~11.44%。醇溶性浸出物、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg_(1)及总皂苷的权重较大。44批药材样品的相对关联度为0.1637~0.7739。等级为Ⅰ级至Ⅴ级的药材样品分别有11批、14批、8批、8批、3批;红河哈尼族彝族自治州样品5种等级均有,文山壮族苗族自治州、昆明市和曲靖市样品均无Ⅴ级,楚雄彝族自治州样品无Ⅰ级。结论所建立的质量评价方法能客观地评价不同产地三七药材的质量,为其质量研究提供了参考。

正交试验法优选大黄丁产地趁鲜加工工艺

为了优选大黄丁产地趁鲜加工工艺,采用正交试验法考察圆片厚度、初干温度、干燥程度、复干温度4个因素对大黄丁水分、游离蒽醌、总蒽醌、干燥时长的影响。结果表明,4个因素对大黄丁总蒽醌含量的影响均不显著;圆片厚度、初干温度对大黄丁游离蒽醌含量影响显著;干燥程度对大黄丁水分影响极显著;各因素对大黄丁总干燥时长影响显著或极显著。大黄丁产地趁鲜加工最佳工艺为将处理好的鲜大黄根茎横切为厚12 mm的圆片,于60℃干燥至含水量60%,再将圆片按长宽各12 mm切丁,然后70℃干燥至含水量13%以下。以该加工工艺生产大黄丁,游离蒽醌含量较高,干燥用时较短,总蒽醌含量无显著下降。

三七药材中262种农药多残留筛查及风险评估

目的:对三七中农药多残留进行筛查研究,初步了解其农药残留状况,并评估高检出农药的健康风险,为现有标准最大残留限量值的制(修)订提供科学依据。方法:以乙腈为溶媒,对收集的16批三七进行高速匀浆法提取处理;针对拟定的检测指标,分别采用气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)和高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)、多反应监测(MRM)模式进行检测,以不少于2组特征离子对进行定性,并采用校准曲线法对检出农药进行定量检测;结合本课题组前期建立的风险评估方法,对检出率较高的高风险农药进行暴露评估,计算其急性和慢性摄入风险。结果:所建方法共有262个农药指标(总计271个化合物),在线性范围内线性关系良好,灵敏度、回收率均符合痕量多残留分析技术要求。16批三七样品中共检出50种农药,农药检出率较高,多数检出农药处于痕量水平,仅百菌清、毒死蜱、三氟氯氰菊酯、异菌脲、五氯硝基苯、甲基硫菌灵超出团体标准《无公害三七药材及饮片农药与重金属及有害元素的最大残留限量》(T/CATCM 003—2017)的最大残留限量(MRL)。水洗可明显降低部分检出农药的残留量。对超出限量标准,以及无相关限量标准但检出率较高的农药品种进行风险评估,结果显示,9种农药的短期危害指数(HIa)为0.0002~0.1418、长期危害指数(HIc)为0.0004~0.0090,其中五氯硝基苯的HIa和HIc较高,但风险可接受。结论:建立了三七中262种农药多残留筛查方法,并采用暴露评估方法中的点评估模式对其进行健康风险评估,可为三七相关农药残留限量标准的制修订提供参考。

UHPLC-MS/MS法同时测定三七中16个皂苷类成分在大鼠体内的含量及药代动力学研究

目的:建立UHPLC-MS/MS法同时测定三七中16个皂苷类成分(人参皂苷Rf、Rg_(1)、Rg_(2)、Re、Rd、Rb_(1)、Rb_(2)、Rb_(3)、Rc、Fa、Rk_(1)、Rg_(5)、Rg_(3)、F_(2)及三七皂苷R_(1)、Fc)在大鼠血浆中的含量,并探讨其药代动力学特征。方法:血浆样品经甲醇-乙腈(4∶1)沉淀蛋白处理后,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱;以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;采用电喷雾离子源(ESI);以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,利用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果:16个皂苷类成分在相应的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r>0.9900);日内、日间精密度的RSD为0.88%~14.41%,准确度为89.60%~114.00%;提取回收率为84.67%~111.87%,基质效应为77.04%~117.64%。结论:该研究建立的UHPLC-MS/MS分析方法准确、灵敏,可用于三七中16个皂苷类成分在大鼠体内的含量测定及药代动力学研究。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱鉴定三七极细粉中化合物及其口服吸收代谢成分

目的 建立UHPLC Q-Exactive HRMS法鉴定三七极细粉中化合物及其口服吸收后血浆与尿液中的成分。方法 采用Waters BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分析三七极细粉醇提物及口服给药后血浆与尿液的成分;流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱;流速0.3 ml/min;柱温35℃;电喷雾离子源(ESI),负离子模式。结果 在三七极细粉醇提物中共鉴定出41个化合物,其中38个为皂苷类成分,另3个为黄酮苷类物质。健康男性单剂量(2 g)给予三七极细粉后,血浆及尿液样本中均未检出相应的原型化合物与代谢产物。结论 该法快速、准确,可为三七极细粉质量控制及临床开发提供科学依据。

Inhibitory effect of the combination of notoginseng total saponins and safflower total flavonoids on UDP-glucuronosyltransferases 1A1, 1A4, and 2B7 in human liver microsomes

In the present study, the potential inhibition behaviors of notoginseng total saponins(NS), safflower total flavonoids(SF), and their combination(CNS) towards three major isoforms of UDP-glucuronosyltransferases(UGTs) in human liver microsomes(HLMs) were investigated to study the mechanism of the synergistic effect of CNS.Etoposide, trifluoperazine and azidothymidine were selected as the probe drugs to elucidate the activities of UGT1A1, 1A4 and 2B7 by UPLC-MS/MS method, respectively.The results showed that CNS, NS and SF significantly inhibited the activities of UGT1A1, 1A4 and 2B7(P<0.05) with the IC_(50) values less than 30 mg/mL.Furthermore, the inhibitory effects of CNS towards UGT1A1, 1A4 and 2B7 were stronger than those of NS and SF(P<0.05).In conclusion, the combination of NS and SF could increase their inhibitory effects on UGT1A1, 1A4 and 2B7 activities in HLMs and might be conducive to reduce the phase II metabolism of the effective constituents in CNS.The potential herb-drug interactions of CNS based on UGT enzymes provided a useful experimental basis for its further research and development.

炮制对三七不同消化性淀粉成分含量的影响

目的参照美国分析化学家协会(Association of Official Analytical Chemists,AOAC)Method 2017.16建立三七不同消化性淀粉含量测定方法,研究炮制前后不同消化性淀粉的含量变化对三七生熟异用的影响。方法将鲜三七蒸法炮制,冷冻干燥。取炮制前后样品用α-淀粉酶与淀粉葡萄糖苷酶(amyloglucosidase,AMG)混合酶对三七中淀粉酶解,用GOPOD试剂显色,紫外分光光度计测定吸光度,根据公式计算含量。结果所测淀粉成分含量在各自浓度范围内线性关系良好(R2=0.999),重复性RSD分别为2.70%、2.80%、1.40%、2.47%,均小于3%。三批三七药材中,生三七快消化淀粉(rapidly digested starch,RDS)含量为(10.05±0.54)~(10.65±1.86)g/100 g,炮制后熟三七RDS为(40.94±1.97)~(43.06±3.94)g/100 g,生三七慢消化淀粉(slowly digested starch,SDS)含量为(13.66±0.97)~(16.46±2.81)g/100 g,炮制后为(0.35±0.36)~(1.14±0.94)g/100 g,生三七抗性淀粉(resistant starch,RS)含量为(5.04±0.43)~(6.28±0.80)g/100 g,炮制后为(1.76±0.14)~(2.07±0.23)g/100g。三七经过炮制后,RDS含量显著增加,SDS与RS含量减少。结论首次建立了测定三七不同消化性淀粉含量的方法,此方法重复性、精密度良好,稳定,可为研究炮制对三七不同消化性淀粉含量的影响提供依据。该研究对三七的临床应用具有潜在价值,可为解释三七生熟异用的炮制机制提供一种新的思路。

复方血竭跌打膏的制剂工艺、指纹图谱及含量测定研究

目的制备复方血竭跌打膏,建立高效液相色谱(HPLC)指纹图谱并对其主要成分进行定量分析。方法制备O/W型乳膏剂,结合星点设计-效应面法(CCD-RSM)优化药膏基质处方,并进行中试放大验证;采用HPLC建立指纹图谱并检测三七、续断指标成分含量。结果优选出最佳基质处方为:硬脂酸10.7 g、单硬脂酸甘油酯6.0 g、十二烷基硫酸钠1.0 g、羊毛脂3.3 g;并基于此进行了中试放大验证实验,相对误差为2.66%,结果显示上述基质处方科学合理,稳定可行。HPLC指纹图谱显示11批样品中有19个共有峰,相似度>0.9;建立了三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb1及川续断皂苷Ⅵ含量测定方法。结论用优选得到的基质处方制备出的软膏均匀细腻、稳定性好,高效液相色谱方法检测结果可靠,可用于质量标准的研究。