傅里叶变换红外光谱-排序法鉴别土茯苓真伪的研究

目的建立中成药土茯苓饮片的质量分析方法。方法采用水平衰减全反射傅里叶变换红外光谱(HATR-FTIR)法直接测定法获得样品的FTIR,以样品粉末作为比较标准,分别选取31组具有代表性吸收峰的吸光度数据为基础,以样品为分析对象进行主成分分析。应用主成分析法比较了正伪品之间的差异程度。结果FTIR的主成分分析在反映同属不同种及不同属或科植物化学组成差异程度上具有应用价值。结论采用FTIR直接测定法并结合主成分分析应用于土茯苓的质量分析,简便、快速、准确,而且不需制备样品。

β-环糊精-淀粉树脂分离纯化土茯苓中的总黄酮

本文以环糊精(α-、β-、或γ-)和淀粉为原料,通过环氧氯丙烷合成水不溶性的环糊精-淀粉树脂(CDP)。比较了三种环糊精-淀粉树脂对落新妇苷的吸附性能,筛选出效果最佳的β-CDP。考察了β-CDP的等温吸附特性,结果表明β-CDP对落新妇苷的吸附量随平衡浓度的升高而增加;吸附过程是一个放热过程,温度升高不利于吸附。4℃条件下,落新妇苷平衡浓度为360μg/mL时,β-CDP的吸附量为49.52 mg/g。该等温吸附可以用Freundlich方程进行拟合,说明β-CDP对落新妇苷的吸附是一个非均匀的多层吸附。比较了不同溶剂对被吸附落新妇苷的解析效果,结果表明60%乙醇为最佳洗脱溶剂,超声处理10 min后解析率为91.97%。将β-CDP用于土茯苓总黄酮的分离纯化,总黄酮得率为2.28%。经HPLC分析产物中落新妇苷含量为51.71%,总黄酮含量为76.63%。

正交试验优选菝葜提取工艺

目的优选菝葜的最佳提取工艺。方法以总黄酮和总皂苷提取率为评价指标,采用正交试验法考察乙醇百分数、料液比、提取时间和提取温度4因素对总黄酮和总皂苷提取率的影响,优选菝葜的超声提取工艺。结果最佳提取条件为乙醇体积分数70%,料液比1:20,提取时间40 min,提取温度30℃。结论该工艺简单可行,成本低廉,安全可靠,可用于菝葜制剂工业化生产。

土茯苓乙酸乙酯有效部位的化学成分

目的:研究土茯苓乙酸乙酯有效部位的化学成分。方法:采用正反相硅胶、凝胶柱色谱、薄层色谱等手段分离,波谱法进行结构鉴定。结果:从土茯苓乙酸乙酯有效部位中分离得到20个化合物,分别鉴定为:3,5,7-三羟基色原酮(1)、3-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)丙烷(2)、二氢槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷(3)、5-O-咖啡酰莽草酸(4)、黄杞苷(5)、阿魏酸(6)、二氢山柰酚(7)、土茯苓苷(8)、槲皮素(9)、丁香酸(10)、5-O-咖啡酰莽草酸甲酯(11)、淫羊藿醇A2(12)、(+)-lyoniresinol(13)、莽草酸乙酯(14)、花旗松素(15)、4′-dihydrophaseic acid(16)、莽草酸甲酯(17)、原儿茶酸(18)、对羟基苯甲酸(19)、落新妇苷(20)。结论:其中,化合物1~3、11、14、16、17为首次从该属植物中分离得到,化合物12、19为首次从该植物中分离得到。

泌感合剂的质量标准提高研究

目的提高泌感合剂的质量标准。方法通过薄层色谱法鉴别地榆和土茯苓;通过AlCl_3络合法,采用紫外分光光度法测定泌感合剂中总黄酮的含量。结果总黄酮在0.044 4~0.133 3 mg范围内具有良好的线性关系,线性方程为Y=46.57X-0.001,r=0.999 8,平均回收率为92.85%,RSD为1.77%(n=6)。结论该方法简单、准确、数据可靠,可作为泌感合剂的质量控制方法。

土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定方法研究

目的:建立土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定落新妇苷的含量,使用Shim-pack VP-ODS(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水-冰醋酸(18∶82∶1),流速1.0mL.min-1,检测波长290nm;采用比色法测定总黄酮的含量,以10%硝酸铝溶液为显色剂,测定波长为500nm。结果:在选定条件下,落新妇苷测定的线性范围为0.04～2.0μg(r=1.000),平均加样回收率为99.2%(n=9);总黄酮测定的线性范围为0.2～1.0mg(r=0.9998),平均加样回收率为101.8%(n=9)。结论:本文方法简便、准确,可以用于土茯苓药材中落新妇苷和总黄酮的含量测定。

土茯苓黄酮对高脂小鼠脂肪代谢及抗氧化水平的影响

研究了土茯苓总黄酮及主要成分落新妇苷对高脂小鼠脂肪代谢及体内抗氧化水平的影响。80只ICR小鼠随机分成8组,其中Ⅰ组为基础对照组,Ⅱ组为高脂对照组;其余6组在饮用水中分别添加1、2和4 mg/m L的落新妇苷或土茯苓总黄酮。八周后,解剖小鼠,采集腹腔脂肪和肝脏并称重,分析血清中甘油三酯(TG),总胆固醇,高密度胆固醇和葡萄糖含量。实验结果表明与高脂对照组相比,土茯苓黄酮对小鼠摄食量和饮水量无明显影响,但可显著减少小鼠体重增幅、腹腔脂肪重量及血清中TG含量。机制研究表明土茯苓黄酮能显著提升小鼠肝脏中肉碱脂酰基转移酶和脂肪酸β-氧化酶活性,但对脂肪酸合成酶活性无明显影响,说明土茯苓黄酮通过促进分解减少体内脂肪蓄积。土茯苓黄酮能显著增加肝脏中抗氧化酶活性,并减少脂质过氧化产物丙二醛的含量,说明土茯苓黄酮具有体内抗氧化活性。

不同采集地土茯苓中(切面红色、白色)总糖及多糖含量分析与体外抗氧化作用

目的：分析测定26个不同采集地土茯苓中（切面红色、白色）总多糖及多糖的含量并探讨其体外抗氧化活性。方法：采用蒽酮-硫酸比色法,比较分析不同产地及不同切面颜色土茯苓中总糖及多糖含量;同时,以抗坏血酸为阳性对照,通过DPPH自由基（1,1-二苯基-2-苦肼基自由基）清除法来评价该药材中总糖与多糖的抗氧化能力。结果：切面红色土茯苓中总糖的质量分数为1.897 3%~11.680 9%,多糖为0.048 0%~1.863 4%;切面白色土茯苓中总糖的质量分数为7.957 5%~81.681 0%,多糖为0.413 2%~7.963 9%,两者含量差异较大;抗氧化结果表明,总糖及多糖均有清除自由基活性,其IC50依次为抗坏血酸（0.033 4 g·L-1）〈切面红色多糖（0.176 7 g·L-1）〈切面白色多糖（0.294 9 g·L-1）〈切面红色总糖（0.354 8 g·L-1）〈切面白色总糖（0.769 5 g·L-1）。结论：不同切面颜色及不同产地土茯苓药材中总糖及多糖的含量存在显著性差异,其多糖的含量高低与抗氧化作用的强弱不呈正相关。

基于 NLRP3 炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P〈0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P〈0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P〈0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P〈0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P〈0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。

土茯苓中总黄酮的含量测定方法研究

目的:建立土茯苓总黄酮的含量测定方法。方法:采用70%乙醇超声提取工艺和可见分光光度法测定土茯苓中总黄酮的含量,以芦丁为对照品,在500 nm波长处测量。结果:芦丁在0.008～0.048 mg.mL-1范围内线性关系良好(r=1.000),平均加样回收率(n=6)以芦丁计为98.34%,RSD为3.4%。结论:此方法操作简单,精密度、稳定性和重复性良好,可用于土茯苓总黄酮含量测定。

Box-Behnken效应面法优化复方土茯苓颗粒提取工艺

目的:优选复方土茯苓颗粒的提取工艺条件。方法:以落新妇苷、总黄酮提取量和出膏率的总评"归一值"(OD)为因变量,通过对提取次数、提取时间、溶媒比各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用Box-Behnken效应面法优选提取工艺。采用HPLC测定落新妇苷含量,流动相乙腈-0.1%磷酸水(20∶80),检测波长290 nm。结果:最佳提取工艺为加9.8倍量水提取3次,每次1.4 h;落新妇苷提取量1.991 mg·g-1,总黄酮提取量54.436 mg·g-1,干膏得率8.558%,OD实测值与预测值相对偏差1.54%。结论:Box-Behnken效应面法用于复方土茯苓颗粒提取工艺的优选是可行的。

土茯苓解重金属铅毒性物质基础的初步研究

目的探究土茯苓解重金属铅毒性的活性物质。方法以"总提取物-有效萃取部位-有效部位及有效成分"顺序逐一追踪解毒活性成分的研究思路,以急/慢性铅致小鼠毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,确认土茯苓解铅毒的活性部位。依据文献及前期化学研究基础,采用高效液相色谱(HPLC)法对活性部位进行主要成分分析。结果急性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总提物组和醋酸乙酯组小鼠血液、肝和肾脏中铅含量显著降低(P<0.05);血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量有所降低(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性有不同程度提高(P<0.05);小鼠肝和肾损伤程度均有改善。慢性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组小鼠血液、肝和肾脏铅含量均有下降(P<0.05),且呈剂量相关性;小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性和肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平均有不同程度地降低(P<0.05),并以土茯苓总黄酮高剂量组最为显著;小鼠肝和肾损伤程度均有所改善,且土茯苓总黄酮高剂量组组织结构趋近正常。新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物为总黄酮部位的主要成分,占总黄酮的58.89%。结论土茯苓醋酸乙酯部位对铅致小鼠急性毒性有显著解毒作用,且醋酸乙酯部位优于总提物,提示醋酸乙酯部位为土茯苓解铅毒的有效萃取部位;土茯苓总黄酮具有较好的排铅作用,对铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用,且呈剂量相关性,提示总黄酮为土茯苓解重金属铅毒的活性部位。土茯苓总黄酮主要由新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物组成,提示上述化合物可能为土茯苓解铅毒的活性成分。