大孔树脂分离纯化蜘蛛香总酚酸及其生物活性研究

优化AB-8大孔树脂富集纯化蜘蛛香中总酚酸的工艺条件,并测定其抗氧化、抗乙酰胆碱酯酶的生物活性。以吸附率、解析率、总酚酸含量为评价指标,优化AB-8大孔树脂对蜘蛛香总酚酸的纯化工艺条件,并集成溶剂萃取法制备质量分数≥50%蜘蛛香总酚酸,采用清除DPPH·和PTIO·的方法评价蜘蛛香总酚酸的抗氧化活性,采用改良版的Ellman比色法测定蜘蛛香总酚酸抗乙酰胆碱酯酶活性。结果表明,最佳工艺条件为:上样质量浓度为2.66 mg·L^(-1)、上样液p H=4.6、上样流速1 BV·h^(-1)、上样体积2 BV、水洗用量5 BV、除杂剂20%乙醇4 BV、洗脱剂50%乙醇4 BV;粗提液先用有机溶剂萃取再经大孔树脂分离纯化得57.77%蜘蛛香总酚酸;纯化后样品对DPPH·、PTIO·有较好的清除能力和有较好的抗乙酰胆碱酯酶活性,IC50值分别为0.04 mg·m L^(-1)、2.00 mg·m L^(-1)、5.40 mg·m L^(-1)。优化所得工艺稳定可行,纯化的蜘蛛香总酚酸具有较好的抗氧化和抗乙酰胆碱酯酶活性,为其研究开发提供一定的参考依据。

蜘蛛香总黄酮调控miR-4429影响胃癌AGS细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨蜘蛛香总黄酮(total flavonoids from Valeriana jatamansi Jones,TFV)对胃癌AGS细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞AGS,随机分为Con组、TFVL组、TFV-M组、TFV-H组、miR-NC组、miR-4429组、TFV+anti-miR-NC组、TFV+anti-miR-4429组。qRT-PCR,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测miR-4429表达,细胞增殖、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭情况;Western免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果与Con组比较,TFV-L组、TFV-M组、TFV-H组细胞E-cadherin蛋白水平、增殖抑制率和miR-4429的表达量升高(P<0.05),N-cadherin蛋白水平和划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05),且呈剂量依赖性;与miR-NC组比较,miR-4429组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低(P<0.05);与TFV+anti-miR-NC组比较,TFV+anti-miR-4429组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多(P<0.05),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平升高(P<0.05)。结论蜘蛛香总黄酮可抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移及侵袭,其抗肿瘤机制与上调miR-4429表达有关。

蜘蛛香总黄酮对肝癌H_(22)小鼠抗肿瘤作用及对pathways in cancer的影响

目的:探讨蜘蛛香总黄酮对肝癌H22小鼠抗肿瘤作用及对pathways in cancer的影响。方法:建立H22肝癌皮下荷瘤模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、蜘蛛香总黄酮高、低剂量组。给药10 d后,解剖称取瘤重,计算抑瘤率,并应用小鼠全基因组基因芯片考察蜘蛛香总黄酮对瘤组织pathways in cancer的影响。结果:与模型对照组相比,阳性对照组、蜘蛛香总黄酮高、低剂量组的平均瘤重明显下降(P<0.01,P<0.05,P<0.05),各组抑瘤率分别为45.32%、30.06%、25.97%。给药组pathways in cancer中有17个基因表达同时发生了显著性变化,其中Ccne2、Cdkn2b、Ctbp2、Mmp1a、Myc和Vegfa的表达发生了上调,而Vegfc、Csf1r、Epas1、Figf、Fzd9、Igf1、Pdgfra、Pik3r1、Prkcb、Tcf7l1和Tcf7l2的表达发生了下调,主要从细胞周期调控、PI3K-AKT途径、Wnt途径抑制肿瘤增殖、迁移,促进其凋亡。结论:蜘蛛香总黄酮具有一定的抗肝癌活性,作用机理可能与调节pathways in cancer的信号转导相关。

蜘蛛香总环烯醚萜类成分纯化工艺优选

目的:优选大孔树脂分离纯化蜘蛛香总环烯醚萜类成分的工艺方法。方法:以Chlorovaltrate为对照品,采用紫外分光光度法测定蜘蛛香总环烯醚萜类成分的含量,动态吸附-解吸法筛选大孔树脂型号,并优选其纯化工艺条件。结果:D-101大孔树脂最适合蜘蛛香总环烯醚萜成分的分离纯化,最佳工艺为:上样液浓度为20g·L-1,用6 BV(Bed Volume)的水和4 BV的60%乙醇洗脱除杂,4 BV的95%乙醇洗脱,洗脱流速2 BV·h-1,收集95%乙醇洗脱液。洗脱液减压回收至干,在此工艺下所提取的蜘蛛香环烯醚萜类成分的纯度达66.3%。结论:D-101大孔树脂能有效提高蜘蛛香中总环烯醚萜类成分的纯度,工艺简单可行,较适宜应用于大生产。

蜘蛛香中绿原酸及总酚酸的含量测定

试验建立了蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)中绿原酸和总酚酸的含量测定方法。利用高效液相色谱法(HPLC)测定蜘蛛香中绿原酸的含量,色谱柱为Dikma C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(12∶88),流速1.0 mL/min,检测波长327 nm,柱温30℃;以绿原酸为对照品,采用紫外-可见分光光度法(UV)在327 nm波长处测定蜘蛛香中总酚酸的含量。结果表明,绿原酸在2~20μg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好,r=0.999 6,加样回收率为97.95%,RSD为1.37%;总酚酸在5~20μg/mL范围内浓度与吸光度线性关系良好,r=0.999 8,加样回收率为100.31%,RSD为1.34%。该方法简便、快速、准确、重复性好,可用于蜘蛛香中绿原酸和总酚酸的含量测定。

蜘蛛香总缬草三酯固体自微乳的制备及体外评价

目的:制备蜘蛛香总缬草三酯固体自微乳,并对其进行体外评价。方法:测定不同吸附材料的吸附量、释放度、休止角、流出速度、豪斯纳比、颗粒间孔隙率、卡尔指数,运用主成分分析法筛选蜘蛛香总缬草三酯固体自微乳的最佳处方,并考察其理化性质。结果:蜘蛛香总缬草三酯固体自微乳最佳处方为:蜘蛛香总缬草三酯自微乳-β-环糊精(1∶5.714,g/g),载药量21.722±0.237 mg/g,分散后乳剂粒径46.2±0.75 nm、Zeta电位-6.17±0.15 mV,15 min累积溶出度93.900%,光照会影响该制剂的稳定性,应避光保存。结论:蜘蛛香总缬草三酯固体自微乳粉体学性质较好,制备工艺简单易行,具有良好的应用前景。

蜘蛛香总缬草三酯的平衡溶解度、表观油水分配系数和稳定性测定

目的:测定蜘蛛香总缬草三酯的平衡溶解度及表观油水分配系数,考察其在水及酸、碱缓冲液中的稳定性。方法:采用紫外分光光度法测定蜘蛛香总缬草三酯在10种有机溶剂(甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、正辛醇、二氯甲烷、石油醚及正己烷)的平衡溶解度,应用摇瓶法测定蜘蛛香总缬草三酯在正辛醇饱和的水及缓冲溶液中的表观油水分配系数,利用紫外分光光度法考察蜘蛛香总缬草三酯在水及酸碱缓冲液中的稳定性。结果:蜘蛛香总缬草三酯在异丙醇、丙酮、乙醇等有机溶剂中溶解度大,在正辛醇饱和的水中的表观油水分配系数为494.667(lg P=2.694),在水及酸、碱缓冲液中均不稳定。结论:蜘蛛香总缬草三酯水溶性及稳定性差,脂溶性好。

蜘蛛香总黄酮对乳腺癌细胞侵袭转移抑制作用的实验研究

目的:探究蜘蛛香总黄酮(TFV)对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和转移的影响及其相关调控机制。方法:不同浓度的TFV(0、10、20、30、40、50、60 mg/L)干预MDA-MB-231细胞后,采用MTT法检测TFV对MDA-MB-231细胞增殖的影响;不同浓度的TFV(0、20、40 mg/L)干预MDA-MB-231细胞后,分别用细胞划痕实验和Transwell小室法检测TFV对MDA-MB-231细胞迁移能力和侵袭能力的影响;采用qRT-PCR法和Western blot法检测TFV对MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量的影响;Western blot法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果:当TFV浓度达到50 mg/L时,MDA-MB-231细胞增殖能力显著降低;MDA-MB-231细胞的侵袭转移能力被显著抑制,并且MDA-MB-231细胞中MMP-2和MMP-9的转录水平以及蛋白表达水平明显降低;另外TFV还能够显著抑制N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量,增强E-cadherin的蛋白表达量。结论:TFV通过抑制上皮间质转化,从而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭和转移。

云南野生马蹄香总黄酮含量的分析

试验采用石油醚脱脂后,用紫外分光光度法对马蹄香中的总黄铜含量进行分析。结果表明:采用提取时间12h,提取剂乙醇浓度为50%和60%时,总黄铜的提取效果较好,平均回收率为102.1%,回收率好。

蜘蛛香总黄酮大孔树脂纯化工艺

目的:研究蜘蛛香总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件。方法:采用静态吸附-解吸方法,以吸附量和解吸率为指标,筛选最佳树脂;以总黄酮收率为指标,考察最佳树脂纯化蜘蛛香总黄酮的工艺参数。结果:5种树脂中,HPD600大孔树脂对蜘蛛香总黄酮纯化效果较好,其总黄酮的静态饱和吸附容量为131.11 mg.g-1干树脂,解吸率为91.69%;最佳动态吸附、洗脱条件为蜘蛛香总黄酮提取液质量浓度3.42 g.L-1,吸附流速2.4 BV.h-1,上样量25.64 mg.g-1干树脂;吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱,再用4 BV 80%乙醇以2.4 BV.h-1流速洗脱,总黄酮质量分数为41.20%,收率为80.36%。结论:HPD600大孔树脂在所确定的工艺条件下,可较好的分离纯化蜘蛛香总黄酮。

蜘蛛香提取物的药理学研究

目的评价蜘蛛香的黄酮类提取物和缬草三酯提取物的药效。方法采用热板法、醋酸扭体法研究提取物的镇痛作用;炭末法、家兔离体肠肌研究提取物对胃肠运动的影响;高架十字迷宫和明暗箱用于研究提取物抗焦虑实验。结果在给药60、120 min时黄酮低剂量对提高小鼠痛阈值具有一定作用(P<0.05),总黄酮中、高剂量均能显著提高小鼠痛阈值(P<0.01),缬草三酯各给药组对小鼠热刺激致痛的抑制作用不显著,总黄酮提取物高剂量能显著延长扭体反应的潜伏期和减少醋酸所致的小鼠扭体次数(P<0.01),缬草三酯提取物各剂量的作用不显著(P>0.05);黄酮提取物中、高剂量和缬草三酯提取物高剂量都能显著增加小肠炭末的推进率(P<0.01),黄酮提取物高剂量对家兔离体肠肌均有显著的舒张作用(P<0.01),缬草三酯高剂量对离体肠肌具有一定的舒张作用(P<0.05);蜘蛛香总缬草三酯提取物高剂量能显著增加小鼠进入开臂次数与进入各臂总次数的百分比(OE)、在开臂内的活动时间与进入各臂的总活动时间的百分比(OT)值(P<0.01),中、高剂量可明显增加小鼠穿箱次数和明箱活动时间(P<0.01),而总黄酮提取物各剂量对增加小鼠穿箱次数和明箱活动时间作用不显著。结论蜘蛛香的总黄酮类成分是镇痛、改善胃肠运动的主要成分,缬草三酯类成分是抗焦虑药效的主要成分。

大孔吸附树脂纯化蜘蛛香总黄酮的工艺研究

目的建立大孔树脂富集纯化蜘蛛香总黄酮工艺方法。方法对D-101、AB-8、HPD-600、D-301 4种不同极性大孔树脂进行吸附率和解吸率筛选,确定选择HPD-600树脂。考察了HPD-600树脂上样量、pH值、上样体积流量、上样液浓度、洗脱液配比、酸液浓度、乙醇体积分数、洗脱剂用量对蜘蛛香总黄酮的影响,优化大孔树脂纯化工艺参数。结果 HPD-600树脂装柱,上样浓度为3.03 mg/mL,上样容量为24.24 mg/g,先0.1 mol/L HCl的10%乙醇溶液洗脱除杂,直至洗液颜色不再变浅、固形物含量不再增加,后用0.1 mol/L HCl的80%乙醇溶液,洗脱体积流量1 mL/min,洗脱5倍柱体积,收集洗脱液减压浓缩至干得提取物。结论 HPD-600树脂适用于蜘蛛香中总黄酮的纯化,可使蜘蛛香总黄酮质量分数达55.25%,收率可达39.01%。