正交试验法优化泡核桃青皮总黄酮的提取工艺

为了优化泡核桃青皮总黄酮的提取工艺,本实验采用回流提取法提取泡核桃青皮中的总黄酮,以总黄酮提取率为考察指标,考察提取溶剂、料液比、提取时间和提取温度对总黄酮提取率的影响,在单因素实验的基础上,通过正交试验法优化总黄酮的提取工艺。结果最佳提取工艺为:以50%乙醇溶液为提取溶剂、料液比为1∶40、沸水浴回流提取60 min,泡核桃青皮中总黄酮质量分数为9.81%。泡核桃青皮中总黄酮含量较高,优化得到的提取工艺稳定,提取率高。

基于酶抑制实验与网络药理学探讨核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的作用机制

目的:通过酶抑制实验考察核桃楸皮总黄酮的降糖作用,并利用网络药理学与分子对接的方法研究核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的潜在作用机制。方法:提取纯化核桃楸皮总黄酮部位后采用DNS法测定核桃楸皮总黄酮对α-淀粉酶的抑制作用。将文献报道的核桃楸皮的27种黄酮类成分输入中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)进行筛选。将筛选后的活性成分导入Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测。将核桃楸皮黄酮类活性成分与相关靶点导入Cytoscape 3.9.1软件构建“化合物-靶点”网络,并筛选主要活性成分。在Genecards、TTD、DisGeNET数据库中搜集2型糖尿病相关的靶点,利用在线工具Venny 2.1得到活性成分靶点和疾病靶点的交集靶点,并绘制Venn图。在STRING数据库中输入交集靶点得到网络关系,利用Cytoscape 3.9.1软件构建PPI网络并进行拓扑分析。通过Metascape分析平台对交集靶点进行基因本体(gene ontology, GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)信号通路富集分析。利用AutoDock Vina 1.2.0对关键成分和核心靶点进行分子对接。结果:核桃楸皮总黄酮粉末纯度为93.85%,核桃楸皮总黄酮对α-淀粉酶具有明显的抑制作用(P<0.05),IC_(50)值为0.776 g·L^(-1)。从TCMSP数据库筛选得到9种活性成分,获得223个活性成分相关靶点。“化合物-靶点”网络分析得到山柰酚、木犀草素、杨梅素、柚皮素、槲皮素可能是发挥作用的主要活性成分。在Genecards、TTD、DisGeNET数据库获得疾病靶点1 360个。利用在线工具Venny 2.1进行取交集处理,得到交集靶点99个。PPI网络分析得到蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)等为核心靶点。GO富集得到5 706个条目。KEGG分析可知磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases, PI3K)-AKT信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路等可能是核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的主要通路。核桃楸皮总黄酮活性成分与核心靶点均具有一定的相互作用。结论:核桃楸皮总黄酮可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗2型糖尿病的作用,为核桃楸皮总黄酮治疗2型糖尿病的深入研究提供了理论依据。