野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

目的研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理。方法SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片。结果MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体。结论TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用。

野菊花总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用

目的观察野菊花总黄酮(TFC)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及部分机制。方法用TFC(125、250、500 mg/kg)连续给小鼠灌胃4后,腹腔注射0.1%CCl4(10ml/kg)致小鼠急性肝损伤模型,测定不同剂量的TFC对肝损伤血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性、肝匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;并通过放射免疫分析法测定肝匀浆中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNFα-)的表达量;同时对肝组织进行病理学检查。结果TFC能降低CCl4致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST值的升高,降低肝匀浆中MDA含量,增强SOD的活性,TNFα-表达降低,减轻CCl4对肝组织的病理损伤。结论TFC对CCl4致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能主要与清除自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制TNFα-表达有关。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用

目的:研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用,探讨TFC治疗AA的可能机制。方法:SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC高、中、低剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;原位末端标记检测(TUNEL)法观察滑膜组织中滑膜细胞的凋亡改变;流式细胞仪检测体外培养滑膜细胞的凋亡变化。结果:AA大鼠滑膜细胞出现凋亡抑制,增殖过度的类瘤样细胞特征,TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TFC(168,336 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜细胞的凋亡率较模型组显著升高。结论:TFC可抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的机制之一。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响

目的研究野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能以及滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC大、中、小剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)对照组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;运用免疫荧光法检测各组滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白的表达。结果TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TRAIL在模型组大鼠滑膜组织中的表达明显低于正常组;TFC各剂量组可上调TRAIL的过低表达,而TNF-α的检测结果与之相反。结论以TNF-α为参照,TRAIL参与AA大鼠的发病过程,TFC可上调TRAIL蛋白的过低表达,这可能是其治疗AA的机制之一。

大孔树脂纯化野菊花总黄酮的工艺研究

目的研究大孔树脂吸附法纯化野菊花总黄酮的工艺条件。方法用树脂静态、动态吸附解吸实验法,以总黄酮吸附率、解吸率等为考察指标。结果用LX-60树脂纯化野菊花总黄酮的最佳工艺为上样质量浓度1.6 mg/mL,上样体积流量2 BV/h,最大上样量48 mg/g干树脂,洗脱溶剂为90%乙醇,洗脱体积流量2 BV/h,洗脱溶剂用量为4 BV。结论该方法对野菊花总黄酮具有良好的富集作用。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响

目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制。方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多苷片100mg/kg。组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达。结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达。结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一。

中药野菊花的药理作用研究进展

野菊花是常用的中草药，具有清热解毒、疏风平肝等功效。现代药理学研究表明其具有抗微生物、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、保肝、神经保护、保护心血管、抗血小板聚集等多种作用，且具有高效、低毒的特点，有较好的临床应用价值和研发潜力。本文综述了野菊花的化学成分，国内外对野菊花提取物、主要化学成分总黄酮和挥发油的药理作用，野菊花毒理等方面的进展情况，为野菊花的开发提供理论依据。

DM130型大孔树脂分离纯化野菊花总黄酮的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂从野菊花提取液中分离纯化总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮回收率为指标,采用静态和动态试验考察大孔吸附树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果 DM130型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮的最佳纯化工艺条件为:上柱样品溶液总黄酮质量浓度为2.78mg/mL,pH 3～4,以80%(体积分数)乙醇洗脱,洗脱流速为2 mL/min,洗脱剂用量为5倍柱体积。总黄酮的回收率为79.19%,纯度为37.31%。结论经过优化的工艺稳定可行,DM130型大孔吸附树脂能较好地分离纯化野菊花总黄酮。

野菊花总黄酮体外对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的探讨野菊花总黄酮(TFC)体外对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响。方法采用AA大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外给药培养,并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果TFC能提高AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2水平,对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1水平具有抑制作用。结论TFC对AA大鼠免疫功能具有明显的调节作用。

野菊花总黄酮对乳腺癌细胞增殖、凋亡、转移、侵袭及细胞周期的影响

目的:探讨野菊花总黄酮对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、转移、侵袭、细胞周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养MCF-7和MDA-MB-231细胞,分为对照组和不同浓度野菊花总黄酮组。显微镜观察细胞形态;CCK-8法评价细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭能力;AnnexinV-FITC/PI双染法及Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Bax、P53 mRNA表达;Western Blot法检测β-catenin、E-cadherin蛋白表达。结果:野菊花总黄酮处理MCF-7、MDA-MB-231细胞后,细胞发生缩小、变形、解体;CCK-8结果显示,野菊花总黄酮对MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用呈一定的浓度和时间依赖性,24 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(42.17±0.59)、(35.01±0.83)μg/mL;划痕实验显示,野菊花总黄酮可显著降低MCF-7、MDA-MB-231细胞的迁移率(P<0.01);Transwell实验显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞侵袭率显著降低(P<0.01);AnnexinV/PI双染结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞的早期凋亡率升高,且Hoechst染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核裂解;流式结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞阻滞在S期和G_(2)期;Real-time PCR结果显示,经野菊花总黄酮处理后的MCF-7和MDA-MB-231细胞的Bax、P53 mRNA表达显著升高(P<0.01);Western Blot实验显示,野菊花总黄酮可下调MCF-7、MDA-MB-231细胞β-catenin蛋白表达(P<0.01),而对E-cadherin蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:野菊花总黄酮在体外能抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及促进凋亡相关基因Bax、P53的表达有关,与EMT进程无明显关系。

基于NLRP3-IL-1β-NF-κB信号轴研究野菊花总黄酮对脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响

目的探究野菊花总黄酮(TFC)对脂多糖(LPS)诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为阴性对照(Control)组、LPS处理(LPS)组、TFC预处理(TFC)组、NLRP3激活预处理(4-MET)组、TFC联合4-MET预处理(TFC+4-MET)组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Hoechst 33342染色观察各组细胞形态变化;免疫印迹法检测各组细胞核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(Asc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、p-IκB、IκB、自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、蛋白表达情况;ELISA法检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;透射电镜观察细胞自噬情况。结果与Control组相比,LPS组细胞增殖率降低,细胞核破碎情况加重,细胞凋亡率升高,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,TFC组细胞增殖率升高,细胞核破碎减轻,细胞凋亡率降低,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达降低、IκB蛋白磷酸化水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,细胞自噬程度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达升高;4-MET组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,细胞核破碎情况加重,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,细胞自噬程度降低,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。TFC+4-MET组细胞增殖率、细胞自噬程度、LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达高于4-MET组,细胞核破碎情况减轻,细胞凋亡率、NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达、IκB蛋白磷酸化、IL-1β、IL-18水平低于4-MET组(P<0.05)。结论野菊花总黄酮可能通过抑制NLRP3-IL-1β-NF-κB信号通路活化,进而抑制脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应,诱导细胞自噬。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法20只SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,电镜观察细胞形态改变,Western blotting分析大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白的表达变化,annexin V荧光染色检测caspase-3特异性阻断剂对大鼠滑膜细胞凋亡的抑制作用。结果TFC能诱导大鼠滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核。大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白表达随TFC浓度增加而明显升高,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻AA大鼠滑膜细胞凋亡。结论TFC可促进大鼠滑膜细胞凋亡而达到治疗AA作用,其机制与TFC诱导滑膜细胞凋亡及提高caspase-3的活化有关。

超声提取野菊花总黄酮及其抑菌活性的研究

以野菊花中总黄酮含量作为考察指标,用正交实验法优化野菊花总黄酮超声提取工艺,并考察超声波法对总黄酮抑菌活性的影响。结果表明,野菊花总黄酮的最佳提取工艺为:在超声功率200 W条件下,用12倍量45%的乙醇提取15 min。此时野菊花总黄酮的得率达到2.86%。该工艺简单可行、重现性好,且超声波对总黄酮抑菌活性没有影响,适用于工业化生产。

菊米总黄酮的超声波提取及其体外抑菌试验

以总黄酮为指标,以水为溶剂采用超声波提取技术,通过单因素试验和正交试验确定菊米的最佳提取方法。同时,采用滤纸片扩散法测定其对7种常见污染菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:超声波提取菊米总黄酮的最佳工艺条件为:温度70℃,料液比1:120,时间40 min。总黄酮得率可达16.96%;提取物对供试菌中的大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、黄曲霉、青霉具有抑菌作用;对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母具有杀菌作用。总体而言对细菌具有较好的抑菌杀菌作用。

野菊花总黄酮对大鼠肺纤维化的干预作用

目的研究野菊花总黄酮(TFC)对大鼠肺纤维化(PF)的预防作用。方法 30只Wistar大鼠,随机均分为假手术对照组、模型组、TFC(168、336 mg/kg)组、强的松组。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸平阳霉素诱导PF模型。次日TFC两组和强的松组分别给予TFC 168、336 mg/kg及强的松3.22 mg/kg,假手术对照组、模型组用生理盐水代替。给药后第28天处死全部大鼠。观察各组肺间质纤维化形成的病理变化;检测大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法观察各组大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达。结果与模型组比较,TFC组病理变化减轻,TFC能显著降低大鼠肺组织HYP以及血清中SOD、MDA的含量并能下调大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达。结论 TFC可以改善盐酸平阳霉素诱导的PF大鼠一般情况,并通过抑制大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达,以达到抗纤维化的作用。

野菊花总黄酮的含量测定

对不同产地、不同加工方法的野菊花中总黄酮进行了含量测定和筛选研究 ,结果首选了湖北省麻城市采摘、烘干法加工的野菊花。并检测了其六批野菊花浸膏的总黄酮含量 ,结果均达 11%以上 ,符合质量要求。

超声波辅助提取菊花总黄酮的工艺研究

用超声波提取技术提取菊花中黄酮,在单因素提取基础上,采取正交优化试验,探讨乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间对菊花总黄酮提取工艺的影响,结果表明,影响菊花黄酮超声提取的主要因素为乙醇浓度,其次为提取时间、提取温度和料液比。最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%,料液比1:40,提取温度40℃,提取时间50min,测得菊花总黄酮为3.97%。

野菊花膏粉质量标准研究

目的建立野菊花膏粉的质量标准。方法采用薄层色谱法定性鉴别,分光光度法测定总黄酮含量。结果在薄层色谱法中检出野菊花,芦丁在8～48 mg.L-1范围内呈良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为98.6%,RSD=1.1%。结论该方法结果准确、重现性好,可用于该制剂的质量控制。

正交设计优化野菊花总黄酮的超声提取工艺

优化超声提取野菊花总黄酮的最佳工艺条件。采用正交设计试验,以野菊花总黄酮得率为指标,对乙醇浓度、超声温度、超声时间、料液比等因素进行优化。结果表明,各因素对总黄酮提取率的影响大小依次为:超声时间>超声温度>乙醇浓度>料液比。最佳工艺条件为:采用质量分数60%乙醇,料液比1∶30(g/mL),在60℃下,超声提取40min,在此最佳条件下,总黄酮得率为4.60%。

野菊花中总黄酮提取工艺及响应曲面优化研究

以野菊花中总黄酮为研究对象,以总黄酮提取率为评价指标,通过操作简单回流工艺提取总黄酮并对工艺条件优化。结果为在料液比120 g·mL^(-1)、乙醇浓度70%、温度60℃、提取1.5 h,提取率为2.77%。