香青兰总黄酮调控TMAO介导的JAK/STAT轴抗大鼠动脉粥样硬化及RAW264.7细胞炎症的研究

目的探讨香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum Moldavica L.,TFDM)抗大鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)及三甲胺氮氧化物(trimethylamine N-oxide,TMAO)加剧的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症的保护作用及其可能的作用机制。方法采用高脂饲料喂养联合腹腔注射维生素D3的方法建立SD大鼠AS模型,分为对照组、模型组、辛伐他汀组(15 mg·kg^(-1))、TFDM组(60、30、15 mg·kg^(-1)),建模同时进行给药处理,持续8周。生化检测方法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。HE染色检测主动脉组织病理变化,ELISA试剂盒检测血清中TMAO、IL-1β、IL-6及肝脏组织中TNF-α的表达,Western blot法检测主动脉中JAK、STAT、TNF-α蛋白的表达。此外,体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用LPS+TMAO建立巨噬细胞炎症模型,TFDM(100、50、25 mg·L^(-1))进行干预。CCK-8测定细胞活力及增殖,RT-qPCR法检测细胞中TNF-α、IL-6、JAK、STAT mRNA的表达。结果TFDM可明显下调大鼠血清TC、TG、LDL-C水平及血清TMAO、IL-1β、IL-6和肝脏TNF-α的水平,减少主动脉的斑块沉积,下调主动脉中TNF-α、JAK、STAT的蛋白表达。此外,TFDM干预可明显下调TNF-α、IL-6、JAK、STAT mRNA的表达及JAK、STAT蛋白的表达。结论TFDM可降低血清中TMAO的含量,从而抑制JAK/STAT炎症信号通路,减缓炎症的发生,发挥抗AS作用。

香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的抑制作用及其机制

目的观察香青兰总黄酮灌胃对博来霉素诱导大鼠肺纤维化(PF)的影响,并基于肠道菌群和血清代谢组学方法探讨其可能的机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、香青兰总黄酮高剂量组及香青兰总黄酮低剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用气管内滴入博来霉素的方法建立PF模型;香青兰总黄酮高、低剂量组建模后分别给予香青兰总黄酮400、100 mg/kg灌胃,对照组和模型组分别给予等体积生理盐水灌胃,1次/天,连续21 d。各组末次给药后处死,采用HE染色及Masson染色观察肺组织病理情况,实时荧光定量PCR法检测肺组织胶原蛋白Ⅲ(COLⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA相对表达量,16 S rRNA测序技术进行肠道菌群α、β多样性分析并检测其相对丰度,超高效液相色谱串联质谱分析并筛选血清关键差异代谢产物,并导入京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行代谢途径的富集分析。结果与对照组比较,模型组大鼠肺泡结构被破坏,肺泡间隔增宽,炎症细胞浸润明显,肺泡壁变厚,肺泡之间的距离增宽,可见蓝色条索状胶原纤维沉积;与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组大鼠上述病理改变减轻。与对照组比较,模型组大鼠肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高、低剂量组肺组织COLⅢ、α-SMA mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。α多样性分析结果显示,与对照组比较,模型组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群Chao1、Ace均升高(P均<0.05)。β多样性分析结果显示,对照组、香青兰总黄酮高剂量和香青兰总黄酮低剂量组大鼠肠道菌群组成接近,与模型组大鼠肠道菌群组成比较均差异明显。在门水平上,与对照组比较,模型组大鼠拟杆菌门相对丰度降低而厚壁菌门/拟杆菌门升高(P均<0.05);与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠拟杆菌门相对丰度升高而厚壁菌门/拟杆菌门降低(P均<0.05)。在属水平上,与对照组比较,其余三组大鼠嗜酸乳杆菌属相对丰度均降低(P均<0.05);与对照组、模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组和香青兰总黄酮低剂量组大鼠乳杆菌属相对丰度均升高(P均<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠关键差异菌群为大肠杆菌种;与模型组比较,香青兰总黄酮高剂量组大鼠关键差异菌群为假长双歧杆菌种、双歧杆菌属、瘤胃球菌属等;与模型组比较,香青兰总黄酮低剂量组大鼠关键差异菌群为约翰逊乳杆菌种、嗜黏蛋白阿克曼菌种。模型组和香青兰总黄酮高、低剂量组之间分别筛选出30、49个血清差异代谢产物,均主要富集在AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。结论香青兰总黄酮可减轻博来霉素诱导的大鼠PF,其作用机制可能与调控肠道菌群组成和AMPK相关代谢通路等有关。

香青兰总黄酮通过调控TGF-β/BMP信号通路对肺动脉高压大鼠的保护作用

目的 通过野百合碱诱导的肺动脉高压(PH)大鼠模型,探讨香青兰总黄酮(DMTF)对PH大鼠的保护作用及作用机制。方法 建立野百合碱诱导的PH大鼠模型,采用超声法检测大鼠心脏功能,观察肺的病理变化并评估PH的发展状态以及肺血管重构程度。使用ELISA法检测血清相关指标,评价DMTF抗炎、抗氧化应激能力;使用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。通过低氧诱导肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖模型,并用CCK-8法检测细胞增殖能力;使用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,并采用Western blot法检测BMPR2、TGF-β1、Smad1/5/8、p-Smad1/5/8、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达。结果 心脏超声和病理检查结果显示,PH大鼠平均肺动脉压力(mPAP)显著升高,血管壁增厚,α-SMA表达增加,血清中ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量升高,SOD、GSH-Px和NO含量降低(P <0.05)。DMTF药物干预后降低mPAP,并减轻或延缓肺动脉血管重构;升高血清SOD、GSH-Px和NO含量,降低ET-1、IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA含量;下调PH大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,并上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。CCK-8和流式细胞术结果显示DMTF抑制了低氧诱导的PASMCs过度增殖,并下调TGF-β1、p-Smad2/3蛋白的表达,上调BMPR2、p-Smad1/5/8蛋白的表达(P <0.05)。结论 DMTF可降低肺动脉压,改善肺血管重构,对PH大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应、减轻氧化应激反应和调节TGF-β/BMP信号通路有关。

蒙药香青兰总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带区血管内皮生长因子受体2表达的影响

目的:观察蒙药香青兰总黄酮(total flavones of dracocephalum moldavica,TFDM)对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区血管内皮生长因子2(vascular endothelial growth factor 2,VEGFR2)表达的影响,探讨其对血管生成的作用。方法:SD大鼠线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型,TFDM 50 mg/kg灌胃给药,在手术后第1、3、7、14天4个时相进行取材,免疫组织化学染色观测VEGFR2阳性标记的细胞及新生血管在缺血半暗带区的分布情况,Western blot检测缺血半暗带区VEGFR2的表达情况。结果:免疫组织化学染色结果显示,再灌注术后第3~14天时,TFDM给药组阳性细胞表达数量显著高于模型组(P<0.05),且在微血管、微动脉和微静脉附近表达增多;Western blot检测结果也显示,TFDM给药组VEGFR2表达上调。结论:TFDM可能通过上调VEGFR2蛋白的表达,促进脑缺血半暗带区微血管的生成,改善微循环功能。

环杷明与香青兰总黄酮联合用药对肺纤维化小鼠的影响

研究环杷明(Cyc)和香青兰总黄酮(TFDM)联合用药对肺纤维化(PF)小鼠的影响及作用机制。将C57BL/6小鼠随机分成5组,每组10只,即正常对照组、模型组、TFDM组(360 mg/kg)、Cyc组(5 mg/kg)和TFDM组(360 mg/kg)+Cyc组(5 mg/kg)。采用气管内滴注博来霉素(4 mg/kg)构建小鼠PF模型,正常对照组给予等量蒸馏水,建模第二天,给予相应药物干预,连续给药28 d。肺功能检测采用AniRes2005动物肺功能分析系统进行。肺组织进行冰冻切片的制作,使用HE染色和Masson染色观察肺组织病理情况;水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用Western blot检测各组小鼠1型胶原蛋白(Col-1)、纤维连接蛋白(FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、SHH、Ptch1、SMO、Gli1和SUFU蛋白表达。结果显示与正常对照组比较,HE染色中模型组肺组织结构异常,出现炎性细胞浸润;Masson染色中出现较多被染成蓝色的胶原纤维化组织,肺组织被严重损伤;HYP含量显著升高(P<0.01);肺功能检测显示吸气相气道阻力(RL)、呼气相气道阻力(RE)和FEV0.1/FVC显著升高,肺动态顺应性(Cdyn)、用力肺活量(FVC)和呼气峰流速(PEF)显著降低(P<0.01);Western blot的结果可得知模型组肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著升高,SUFU蛋白表达水平显著减低(P<0.01)。与模型组相比,Cyc组和TFDM组肺组织结构正常,几乎无炎性细胞浸润;Masson染色可以看出,蓝色纤维组织较少,肺组织纤维化程度得到缓解;HYP含量上调(P<0.01);肺功能检测显示RL、RE和FEV0.1/FVC显著下降,Cdyn和FVC和PEF显著升高(P<0.01);Western blot显示PF小鼠肺组织中Col-1、FN1、α-SMA、SHH、Ptch1、SMO和Gli1蛋白表达水平显著下调,SUFU蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。TFDM可以在一定程度上改善小鼠PF,进一步得出结论Cyc和TFDM联合用药能更好地发挥作用。

RP-HPLC法测定香青兰有效部位中7种成分的含量

目的:建立RP-HPLC法测定香青兰有效部位中田蓟苷、金合欢素、木犀草素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷等7种成分含量的方法。方法:Sunfire-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~5min,16%A;5~45min,16%→28%A;45~65min,28%→80%A);流速1.0m L·min^(-1);柱温35℃;检测波长330 nm。结果:木犀草素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、金合欢素-7-O-β-葡萄糖醛酸苷和金合欢素分离均良好,分别在1.20~60.00μg·m L^(-1)(r=0.9999)、0.48~24.00μg·m L^(-1)(r=0.9997)、0.88~44.00μg·m L^(-1)(r=0.9999)、0.88~44.00μg·m L^(-1)(r=0.9999)、3.84~192.00μg·m L^(-1)(r=0.9999)、0.72~36.00μg·m L^(-1)(r=0.9999)和0.72~36.00μg·m L^(-1)(r=0.9997)范围内呈良好线性关系;平均回收率分别为99.29%,97.04%,99.56%,98.29%,101.18%,99.34%和95.50%,RSD值分别为0.52%,1.13%,0.55%,0.42%,0.58%,0.97%和0.60%。结论:该色谱方法灵敏、稳定、简单、准确,可用于香青兰有效部位及制剂的质量控制。

基于MKL1/CAAP1通路探讨香青兰总黄酮对胃癌MGC-803细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨香青兰总黄酮对胃癌MGC-803细胞恶性生物学行为的影响及巨核细胞白血病因子(MKL)1/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3活性和凋亡抑制因子(CAAP)1通路的作用。方法体外培养胃癌MGC-803细胞,对照组不进行处理,香青兰总黄酮低剂量组、香青兰总黄酮中剂量组、香青兰总黄酮高剂量组分别给予浓度为25、50、100 mg/L的香青兰总黄酮,曲妥珠单抗组给予浓度为10 mg/L的曲妥珠单抗,继续培养24 h后检测细胞增殖率、细胞凋亡率、细胞侵袭和迁移能力,同时检测胃癌MGC-803细胞中MKL1、CAAP1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、Caspase-3 mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,各香青兰总黄酮剂量组细胞增殖率、细胞侵袭数、迁移距离、MKL1、CAAP1、MMP-2、Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性,但效果不如曲妥珠单抗组(P<0.05)。结论香青兰总黄酮可以降低胃癌MGC-803细胞增殖、抑制其侵袭和迁移、同时促进细胞凋亡,其机制可能与MKL1/CAAP1通路的抑制有关。

香青兰总黄酮通过调控lncRNA FOXD3-AS1对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨香青兰总黄酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及可能机制。方法不同浓度(25、50、100μg/mL)的香青兰总黄酮作用于ox-LDL诱导的HUVEC、ox-LDL诱导转染FOXD3-AS1小干扰RNA的HUVEC或香青兰总黄酮作用于ox-LDL诱导的转染FOXD3-AS1过表达载体的HUVEC后,检测细胞中MDA、SOD和GSH-Px水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平,RT-qPCR检测FOXD3-AS1表达水平。结果ox-LDL诱导HUVEC细胞后,细胞中MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白和FOXD3-AS1表达升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);而香青兰总黄酮干预后,ox-LDL诱导的HUVEC细胞中MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白和FOXD3-AS1表达降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。干扰FOXD3-AS1表达后,ox-LDL诱导的HUVEC细胞中MDA水平、细胞凋亡率和Bax蛋白表达降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。过表达FOXD3-AS1后,香青兰总黄酮处理的ox-LDL诱导的HUVEC细胞中MDA水平、细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论香青兰总黄酮可能通过下调FOXD3-AS1表达减轻ox-LDL诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,保护细胞免受ox-LDL损伤。

香青兰总黄酮对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及炎症反应的调控作用

目的研究香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)泡沫化及炎症的影响,进一步阐明TFDM抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用ox-LDL刺激诱导使其成为泡沫细胞,TFDM(25、50、100 mg·L^(-1))及辛伐他汀(10μmol·L^(-1))进行干预,油红O染色法观察胞内脂滴的聚集情况,CCK-8法检测细胞活力,活性氧试剂盒测定ROS的生成,实时荧光定量PCR测定细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测巨噬细胞中IκBα、NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β以及IL-18蛋白的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-10的表达。结果TFDM可以减少泡沫巨噬细胞的形成,降低炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,增加抑炎因子IL-10的表达;并且下调NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,上调IκBα的蛋白表达。结论TFDM能够减轻巨噬细胞的泡沫化,抑制炎症因子的表达,从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程。其作用机制可能是通过抑制NF-κB途径,减少ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症介质的产生。

香青兰总黄酮促进脑缺血再灌注大鼠室管膜下区巢蛋白表达

目的:观察香青兰总黄酮(TFDM)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤后室管膜下区(SVZ)巢蛋白(nestin)表达的影响,并研究其与Notch信号通路的相关性。方法:8周龄雄性SD大鼠随机分成为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)及I/R大鼠TFDM治疗组(I/R+TFDM)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备大鼠I/R模型,免疫组织化学法检测各组大鼠梗死侧SVZ部位巢蛋白(nestin)阳性标记的神经干细胞(NSGs)的分布,Western Blot检测各组大鼠梗死侧SVZ部位nestin和Notch信号通路的中间产物Notch1细胞内域(NICD)的表达。结果:再灌注后3 d和7 d时,I/R+TFDM组大鼠梗死侧SVZ部位nestin的表达较I/R组显著增加(P <0.05),NICD的产生亦较I/R组显著增加(P <0.05)。结论:TFDM可促进脑缺血再灌注大鼠SVZ部位nestin的表达,其机制可能是通过激活Notch信号通路实现的。

香青兰中总黄酮含量的测定

利用聚酰胺薄层及分光光度法对唇形科植物香青兰中黄酮类成份进行了定性定量的分析,经薄层实验得知含5种黄酮类成份,测得总黄酮类含量26.06mg/g(生药)回收率101.0％,RSD=4.42％

基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路研究香青兰总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制

目的:研究香青兰总黄酮(TFDM)对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)信号通路的影响,探究其保护大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法:将50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TFDM组[60 mg/(kg·d),以提取物计]、Compound C+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前15 min尾静脉注射250μg/kg Compound C(AMPK抑制剂)]、EX-527+TFDM组[灌胃60 mg/(kg·d)TFDM+再灌注前20 min腹腔注射5 mg/kg EX-527(SIRT1抑制剂)],每组10只。每天灌胃给药1次,连续7 d。末次灌胃给药后,假手术组大鼠行假手术,其余4组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支缺血30 min、再灌注2 h构建MIRI模型。再灌注结束后,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠心肌组织病理学变化;采用反相高效液相色谱法测定其心肌组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^+)的含量;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测大鼠心肌组织中AMPK、SIRT1和PGC-1αmRNA表达水平;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、横向条纹消失,细胞肿胀破裂、坏死,细胞核变形移位;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量及AMPK蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,TFDM组大鼠心肌病理学形态明显改善;心肌组织中ATP、NAD^+含量和AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平以及AMPK蛋白的磷酸化水平和SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),ADP、AMP含量均显著降低(P<0.01)。与TFDM组比较,Compound C+TFDM组和EX-527+TFDM组大鼠上述指标的改善作用均被逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:TFDM可能是通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,调节能量代谢,从而发挥其对心肌的保护作用。

益心巴迪然吉布亚(香青兰)颗粒中总黄酮含量测定

目的:建立维吾尔制剂巴迪然吉布亚(香青兰)颗粒中总黄酮的含量测定方法。方法:用60%乙醇水浴回流提取2h,以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法在波长500nm处测定总黄酮含量。结果:本法在60min内吸收稳定,平均回收率为99.93%,线性范围为2～23μg/ml(r=0.9996),含量为15.92mg/g。结论:该方法简便、准确、稳定性好、灵敏度高,可作为巴迪然吉布亚颗粒中总黄酮含量测定的质量控制方法之一。

香青兰总黄酮对H_2O_2诱导的U87细胞损伤的保护机制研究

目的探讨香青兰总黄酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导的U87细胞损伤的保护作用,以及ERK/MAPK信号通路在该过程中的作用机制。方法以正常培养的U87细胞为正常对照组,U87细胞加入0.31 mmol/L的H_2O_2损伤20min为模型组,采用不同浓度香青兰总黄酮(200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56μg/mL)预给药U87细胞2h,分别加入0.31mmol/L的H_2O_2刺激U87细胞20min作为实验组,采用CCK-8法检测U87的增殖活力,用ROS检测试剂盒法对活性氧(ROS)含量进行测定,Western blot法检测P-ERK1/2、ERK1/2蛋白的表达水平。结果与模型组比较,实验组细胞增殖活力提高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组相比,实验组细胞ROS含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot实验表明,与模型组比较,香青兰总黄酮不同浓度(100、50、25、5μg/mL)实验组P-ERK1/2蛋白含量均高于模型组,且呈现剂量依赖,差异有统计学意义(P<0.05)。结论香青兰总黄酮通过激活P-ERK1/2通路,抑制ROS过量产生,起到拮抗H_2O_2对U87细胞增殖的抑制作用。

蒙药香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠的神经保护作用

目的探讨蒙药香青兰总黄酮化合物(total flavones of Dracocephalummoldavica L.,TFDM)对MPTP诱导帕金森(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠的神经保护作用。方法建立MPTP诱导帕金森病模型,通过转棒实验、爬杆实验评价TFDM对PD小鼠运动功能的影响;通过ELISA检测TFDM对氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达的情况;通过免疫组织化学和Western blot检测TFDM对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。结果行为学评价结果显示,TFDM治疗显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0.05),明显降低小鼠的爬杆时间(P<0.05);ELISA结果显示,TFDM治疗显著降低MDA的含量(P<0.01),同时SOD和GSH-Px的表达明显升高(P<0.05);免疫组织化学和Western bolt结果均显示,TFDM治疗组的TH、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达水平明显上调(P<0.05),同时Caspase-3、Bax表达水平明显下降(P<0.05)。结论TFDM对PD模型小鼠具有改善运动功能障碍、减轻氧化应激损伤和减少多巴胺能神经元丢失的作用,并可能通过抑制Caspase-3蛋白活性、上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达发挥神经保护作用。

香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠黑质DAT和VMAT2蛋白表达的影响

目的:探讨香青兰总黄酮(total flavones of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠中脑黑质内多巴胺转运蛋白表达的效果。方法:C517BL/6J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备PD动物模型,多种行为学实验方法评价动物运动功能;尼氏染色观测黑质区多巴胺能神经元的数量;RT-PCR和Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、囊泡单胺转运蛋白2(Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)和多巴胺转运蛋白(Dopamine transporter,DAT)的表达情况。结果:行为学检测表明,TFDM组显著增加小鼠的运动距离(P<0.05),显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0.05),明显减少小鼠的爬杆时间(P<0.05);MPTP腹腔注射明显减少了黑质内多巴胺能神经元的数量,TFDM显著的提高了PD模型小鼠黑质内多巴胺能神经元数量;RT-PCR结果显示,TFDM组的TH、VMAT2和DAT的mRNA表达均显著增高(P<0.05);TFDM组TH、VMAT2和DAT蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论:TFDM可能通过上调VMAT2和DAT蛋白的表达,减少DA能神经元丢失,进而改善PD模型小鼠运动功能障碍。

基于VEGF-B/AMPKα通路研究香青兰总黄酮对阿霉素诱导内皮细胞损伤的保护作用

目的探究香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对阿霉素诱导的内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法CCK-8法检测细胞活力;显微镜法观察细胞形态;试剂盒法检测LDH、SOD和线粒体膜电位变化;Transwell法检测细胞迁移情况;Western blot法检测内皮功能障碍和VEGF-B/AMPKα通路相关蛋白表达情况。结果与模型组相比,TFDM可明显提高细胞活力,改善阿霉素诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞形态学变化,降低LDH漏出量,升高SOD活力,升高线粒体膜电位,促进内皮细胞迁移,抑制内皮细胞损伤。Western blot结果显示,与模型组比较,TFDM升高非受体酪氨酸激酶(Src)和黏着斑激酶(FAK)表达水平,升高舒血管因子eNOS磷酸化水平,降低内皮素-1(ET-1)蛋白表达水平,从而抑制内皮功能障碍。TFDM明显上调VEGF-B、NRP1、VEGFR1蛋白表达水平明显升高、明显升高p-AMPKα/AMPKα比例。结论TFDM抑制阿霉素诱导的内皮细胞损伤的机制可能与激活VEGF-B/AMPKα通路有关。

HPLC法测定不同采收期香青兰中黄酮和酚酸类的含量

目的:测定不同时期采收的香青兰药材中黄酮类成分(木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷)和酚酸类成分(迷迭香酸)的含量,确定最佳采收期。方法:采用PurospherSTAR LP RP-18 endcapped(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~30 min,17% A;30~60 min,17% A→28% A;60~75 min,28% A),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长330 nm,柱温35℃。结果:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷5种化学成分的分离效果良好,质量浓度在相应的范围内与峰面积有良好的线性关系,相关系数均大于0.999 5;平均加样回收率(n=6)为98.4%~99.5%(RSD<1.9%,n=6)。该方法应用于研究新疆吉木萨尔县产区不同采收期对香青兰药材中5种化学成分含量的影响,本试验在6月13日(种植后213 d)至8月6日(种植后270 d)内设置了8个采收期,发现木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等上述5种化学成分的含量与采收期(种植后天数)均呈二次或三次函数关系,随着采收期的推迟,含量先增后减。结论:该含量测定方法操作简单,重复性好,为确定香青兰药材适宜采收期提供依据。香青兰药材中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等5种化学成分含量随采收期不同而异,其总量最大值出现在7月中上旬。

内蒙古香青兰总黄酮提取工艺优化及其抗氧化活性成分分析

目的 优化内蒙古香青兰总黄酮提取工艺,并对抗氧化活性成分进行分析。方法 采用单因素试验法结合响应面法优化提取工艺,并通过清除DPPH自由基试验、ABTS自由基清除试验、抑制羟基自由基试验和抑制超氧阴离子自由基试验筛选提取物的抗氧化活性成分,用高效液相色谱-电喷雾离子源-离子阱-飞行时间质谱联用技术(LC-MS-IT-TOF)对抗氧化活性成分进行分析。结果 内蒙古香青兰总黄酮最佳制备条件为提取温度67℃、乙醇体积百分数63%、料液比1∶58,提取物中总黄酮含量4.77%。香青兰总黄酮抗氧化活性成分为乙酸乙酯活性成分,主要包含迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、木犀草素、芹菜素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷等化学成分。结论 首次建立内蒙古香青兰总黄酮制备方法,该方法简单易操作,提取物总黄酮含量丰富,乙酸乙酯活性成分是香青兰总黄酮抗氧化活性成分,含有多种黄酮类化合物。

香青兰总黄酮通过VEGF-B/AMPK通路缓解氧化应激抗H9c2细胞缺血再灌注损伤

香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)是从维吾尔医药传统药材香青兰中提取分离出来的有效部位,香青兰具有补益心脑、活血化瘀等功效,长期广泛用于治疗心脑血管疾病。本研究旨在确定香青兰总黄酮对H9c2(大鼠心肌细胞)细胞缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)损伤的影响及其作用机制。采用缺氧缺糖9 h合并复氧复糖2 h建立H9c2细胞缺氧/复氧损伤模型,模拟心肌缺血再灌注心肌损伤,考察香青兰总黄酮对细胞活力、心肌细胞损伤标志物、氧化应激水平、活性氧自由基(reactive oxygen radical,ROS)含量的影响,并应用Western blot法检测血管内皮生长因子B(vascular endothelial growth factor B,VEGF-B)和磷酸腺苷激活蛋白激酶[adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]通路相关蛋白表达。结果显示,香青兰总黄酮显著提高H/R损伤后心肌细胞活力,减少细胞上清中乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶含量。显著降低丙二醛,增高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、降低细胞内ROS和一氧化氮含量。Western blot分析显示,香青兰总黄酮降低H/R损伤H9c2细胞的BCL-2关联X蛋白水平,上调B淋巴细胞瘤-2基因表达。香青兰总黄酮上调VEGF-B/AMPK通路相关蛋白VEGF-B、血管内皮生长因子受体1、神经纤毛蛋白1、过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α、磷酸化AMPK、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白水平。上述研究结果表明,香青兰总黄酮能够明显减轻心肌细胞H/R损伤,其机制可能与上调VEGF-B/AMPK通路抑制氧化应激反应有关。