沙苑子总黄酮对内质网应激诱导的细胞凋亡在百草枯致大鼠肺损伤中的保护作用

目的肺组织是百草枯中毒后主要损伤的靶器官,但其具体机制目前尚未完全清楚。内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与中毒相关性疾病密切相关,但其与百草枯中毒后肺损伤的关系鲜见报道。文中探讨ERS诱导的细胞凋亡在大鼠百草枯中毒后急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中的作用及观察中药沙苑子黄酮(total flavonoids from astragalus complanatus,FAC)对其影响。方法 30只Spragne-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为对照组、肺损伤模型组(ALI组)和沙苑子黄酮处理组(ALI+FAC组)。采用生物化学法检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量;采用原位末端标记(TUNEL)法观察肺组织凋亡情况;采用Western blot及RT-PCR检测ALI后CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、活化的转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)和X-盒结合蛋白-1(X-box binding protein 1,XBP1)基因表达的改变;HE染色观察肺组织病理变化。结果与对照组相比,ALI组的肺组织中MDA水平明显升高[(3.26±0.24)vs(5.04±0.36),P<0.01],SOD和CAT活性明显降低,分别为[(300.26±35.69)vs(187.21±25.66)]、[(5.78±1.28)vs(2.15±1.12),P<0.01],细胞凋亡数增多,CHOP蛋白表达上调[(0.74±0.20)vs(0.23±0.07),P<0.01],XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达水平明显上调。而沙苑子黄酮作用后,肺组织MDA含量减少[(5.04±0.36)vs(3.99±0.27),P<0.01],SOD和CAT活性增加,细胞凋亡明显减少,CHOP蛋白表达下调[(0.74±0.20)vs(0.42±0.11),P<0.01],ATF4、XBP1和CHOP基因表达下调。结论内质网应激诱导的细胞凋亡参与百草枯中毒后肺损伤过程,沙苑子黄酮对百草枯中毒后肺组织保护作用与其减轻ERS诱导的细胞凋亡有关。

正交试验法优选沙苑子炮制工艺

目的:优选沙苑子的最佳炮制工艺。方法:以UV法测定沙苑子中总黄酮含量为指标,采用L9(34)正交试验设计法对沙苑子的炮制工艺进行优选。结果:优选出最佳炮制工艺为:盐浓度4%,烘制温度140℃,烘制时间4h。结论:该炮制工艺合理、简单、可行、效率高,可为大规模生产提供参考依据。

沙苑子总黄酮的超声波提取工艺

采用正交试验法,以总黄酮含量为考察指标,对影响沙苑子总黄酮超声波提取的因素进行了研究。结果表明,沙苑子总黄酮的最佳提取工艺为40%乙醇,30倍量,50℃下提取30 min,其中乙醇浓度对结果影响显著。该工艺设计合理,操作简单易行。

沙苑子总黄酮对雄性生殖功能障碍模型大鼠的改善作用及机制研究

目的:研究沙苑子总黄酮(TFA)对腺嘌呤诱导的雄性生殖功能障碍模型大鼠的改善作用及机制。方法:将雄性SD大鼠分为空白组、模型组、阳性组(五子衍宗丸,2 g/kg)和TFA低、中、高剂量组(0.05、0.1、0.2 g/kg),每组12只。各组雄性大鼠每日早上9:00灌胃相应药物,并于同日下午3:00灌胃腺嘌呤混悬液以复制生殖功能障碍模型(空白组除外),连续给药35 d。给药结束后,将各组雄性大鼠与雌性大鼠按1∶1合笼交配7 d后取出,检测致雌鼠受孕率;采用酶联免疫吸附法检测雄性大鼠血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;摘取雄性大鼠睾丸、附睾、精囊腺、胸腺、肾,并计算其脏器指数;采用苏木精-伊红(HE)染色法观察雄性大鼠睾丸、附睾及肾组织的病理学变化;采用免疫组织化学染色检测雄性大鼠肾组织中B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组雄性大鼠致雌鼠受孕率,睾丸、附睾、精囊腺、胸腺指数,血清中T、E2、SOD、GSH-Px水平,肾组织中Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);肾指数和血清中FSH、LH、MDA、Scr、BUN水平,肾组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);睾丸组织中生精小管直径变细、间距较宽,生精细胞排列紊乱;附睾管管壁增厚、排列疏松、间质增大,管腔增生萎缩、腔内精子聚集成团;肾组织中肾间质纤维增生,肾小管内可见大量黄色结晶。与模型组比较,阳性组和TFA中、高剂量组雄性大鼠致雌鼠受孕率,睾丸、附睾、精囊腺、胸腺指数,血清中T、E2、SOD、GSH-Px水平,肾组织中Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),肾指数和血清中FSH、LH、MDA、Scr、BUN水平,肾组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);TFA低剂量组上述指标变化趋势相同,且大部分有显著性差异(P<0.05或P<0.01);各给药组雄性大鼠睾丸、附睾、肾组织病理学变化均明显减轻。结论:TFA对腺嘌呤诱导的雄性大鼠的生殖障碍具有显著改善作用,其机制可能与降低性激素FSH、LH水平和下调肾组织中凋亡相关蛋白表达,升高性激素T、E2水平和改善机体氧化应激水平有关。

以沙苑子苷为对照品测定沙苑子总黄酮含量

目的 :以沙苑子苷为对照品测定沙苑子总黄酮含量。方法 :80 %乙醇提取液 ,2 6 6nm测定紫外吸收度。结果 :总黄酮含量为 2 1.5mg/g ,RSD =1.0 0 % ;回收率 95 .4 % ,RSD =2 .2 7% ,线性范围 4～ 2 4ug/ml。结论 :本法测定沙苑子总黄酮含量 ,操作简便 ,稳定性好 ,可用于沙苑子的质量控制。

大孔树脂提取沙苑子总黄酮工艺研究

目的从AB-8、HPD-100、D101、X-5、NKA-9、LSA-20、LSA-30、D201、SP70、ZTC-1十种大孔树脂中筛选提取中药沙苑子总黄酮的最佳树脂并优化其提取工艺条件。方法利用静态吸附法确定最佳吸附树脂,利用动态吸附法优化其工艺条件。结果 X-5树脂对沙苑子总黄酮有较好的吸附和解吸附性能,其优化工艺条件为:0.2g生药/mL水溶液上20cm×1.6cm层析柱,吸附速率为1.0mL.min-1,用6BV水洗脱杂质,6BV 70%乙醇洗脱得总黄酮。结论本提取工艺所得总黄酮纯度高,可为大规模提取提供重要参考。

华黄芪与扁茎黄芪中总黄酮含量的测定

测定了华黄芪及扁茎黄芪种子中总黄酮的含量。结果：扁茎黄芪的含量高于华黄芪的含量。

沙苑子总黄酮对糖尿病大鼠降脂及肾保护作用的实验研究

目的:探讨沙苑子总黄酮对糖尿病大鼠降脂及肾脏保护作用。方法:采用尾静脉注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ)并给予高脂饲料诱导建立糖尿病模型;实验分为正常组,模型组和沙苑子总黄酮低(40mg/kg)、中(80 mg/kg)、高剂量组(120 mg/kg),阳性对照组(辛伐他汀,15 mg/kg);给药6周后测定各组大鼠体质量、肾脏指数;检测血清TG、TC、SCr、BUN浓度;检测肾脏SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量;测定血清和肾脏TNF-α、IL-6表达的变化;进行肾脏病理学观察。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清TG、TC、SCr、BUN、肾脏MDA水平显著上升(P <0. 01或P <0. 05),血清HDL-C和肾脏SOD水平显著下降(P <0. 01或P <0. 05),血清及肾脏TNF-α、IL-6水平显著上升(P <0. 01或P <0. 05);与模型组相比,各剂量组给药后血清TG、TC、SCr、BUN、肾脏MDA水平逐渐下降,高剂量组差异具统计学意义(P <0. 01或P <0. 05),肾脏SOD水平显著上调(P <0. 01),高剂量组血清及肾脏TNF-α、IL-6水平显著下降(P <0. 01或P <0. 05);各给药组肾组织病理学变化均有改善。结论:沙苑子总黄酮具降血脂作用,并能改善糖尿病引起的肾脏损伤,其机制可能与减轻氧化应激损伤及对炎性细胞因子的调控相关。

沙苑子总黄酮显色条件及提取工艺优选研究

目的优选沙苑子总黄酮显色及提取工艺。方法以沙苑子饮片为原料,通过单因素结合正交试验法,研究沙苑子总黄酮的显色方法及最佳显色条件、提取方法及最佳提取工艺。结果以AlCl_(3)法为宜;最佳显色条件为0.8 ml提取液加入1.2 ml 60%乙醇,2%AlCl_(3)0.6 ml、pH 4.5的醋酸-醋酸钠缓冲液2.0 ml,60%乙醇定容,室温静置20 min,于420 nm处测定吸光度;最佳提取工艺为70%乙醇,85℃加热回流提取2 h,料液比1∶25(g/ml),提取2次,得总黄酮的含量为24.5 mg/g。结论该显色和提取方法可行性高,重复性较好,本研究为沙苑子的进一步开发利用提供了实验依据。

沙苑子总黄酮对百草枯致大鼠肺纤维化的干预及机制

目的 观察沙苑子总黄酮（total flavonoids from astragalus complanatus,FAC）对百草枯（paraquat,PQ）所致大鼠肺纤维化的干预作用并探讨其机制.方法 SD大鼠随机分为正常对照组、PQ染毒组、阳性对照泼尼松组和FAC 40、80、160 mg/kg剂量组.大鼠胃注PQ制备肺纤维化模型后,第2天给予相应药物,每天1次.连续给药28 d后称大鼠体重,处死大鼠检测血清中羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）、血清总抗氧化能力（total antioxidative capacity,T-AOC）;取固定部位肺组织切片行HE染色进行病理学观察;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中仅-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β（TGF-β）、Smad2蛋白的表达.结果 沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织Smad2蛋白表达分别为0.31±0.11,0.45±0.12,0.30±0.05,均低于PQ染毒组（0.85±0.34）,差异有统计学意义（P＜0.05）;沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织α-SMA蛋白表达分别为0.31±0.11、0.35±0.07、0.32±0.10,均低于PQ染毒组（0.45±0.08）,差异有统计学意义（P＜0.05）;沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织TGF-β蛋白表达分别为0.35±0.04、0.27±0.05、0.18±0.04,均低于PQ染毒组（0.63±0.11）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 FAC可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路来减轻百草枯致大鼠肺纤维化。

沙苑子总黄酮通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻百草枯中毒大鼠肺损伤

目的 探讨沙苑子总黄酮（FAC）是否可通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路过度活化来减轻大鼠百草枯诱导的肺损伤.方法 48只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、二甲基亚砜（DMSO）对照组和FAC低、中、高剂量组6组,每组8只.模型组采用PQ 80 mg/kg灌胃诱导肺损伤;对照组则给予等量生理盐水灌胃;DMSO组于PQ灌胃前2h腹腔注射10％ DMSO 20 mL/kg;FAC低、中、高剂量组于PQ灌胃后腹腔注射40、80、160 mg· kg-1· d-1的FAC溶液.制模后72 h处死大鼠取肺,检测肺湿/干质量（W/D）比值、总肺水含量（TLW）;光镜下观察肺组织病理学改变,并进行肺组织损伤评估;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织JNK和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测肺组织JNK、磷酸化JNK（p-JNK）和GRP78的蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组和DMSO组肺W/D比值、TLW、肺泡损伤定量评估指数（IQA）均明显升高,JNK、GRP78的mRNA表达和JNK、p-JNK、GRP78的蛋白表达均明显升高.与模型组比较,FAC各剂量组肺W/D比值、TLW、IQA以及JNK mRNA表达和p-JNK蛋白表达均明显下降,其中以FAC高剂量组降低最为显著[肺W/D比值：3.0±0.3比5.5±0.5,TLW：2.2±0.3比4.7±0.4,IQA：（15.4±3.0）％比（40.0±5.7）％,JNK mRNA：0.21 ±0.08比0.82±0.27,p-JNK蛋白：0.31±0.09比0.78±0.25,均P＜0.01];FAC低、中、高剂量组GRP78 mRNA和JNK、GRP78蛋白均为高表达,与模型组比较差异均无统计学意义（GRP78 mRNA：0.54±0.18比0.74±0.20,JNK蛋白：0.76±0.27比0.80±0.28,GRP78蛋白：0.51 ±0.18比0.69±0.21,均P＞0.05）.结论 百草枯中毒后肺组织发生了过度的内质网应激损伤;FAC可能通过抑制内质网应激及JNK信号通路过度活化起到保护肺组织的作用.

沙苑子总黄酮对去势大鼠骨质疏松模型血清钙、血清磷、骨代谢及生物力学特征的影响

目的:观察沙苑子总黄酮对去势大鼠骨质疏松模型血清钙(Ca)、血清磷(P)、骨代谢及生物力学的影响。方法:60只雄性大鼠随机平均分为空白组、模型组、仙灵骨葆组(500 mg·kg^-1)、沙苑子总黄酮高剂量组(200 mg·kg^-1)、沙苑子总黄酮中剂量组(100 mg·kg^-1)、沙苑子总黄酮低剂量组(50 mg·kg^-1)。动物双侧卵巢切除术建立骨质疏松模型,3 d后给药,连续给药90 d。末次给药2 h后动物腹主动脉取血,检测血清中骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ca、P、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨特异性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TPACP5b)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(N-telopeptide of typeⅠcollage,NTX)、Ⅰ型前胶原羧基末端肽(carboxy-terminal telopeptide of typeⅠ,CTX-Ⅰ)水平。取动物右侧大腿股骨,双能X射线检测股骨段骨密度值,取左侧大腿股骨,生物力学检测仪检测骨力学强度。结果:与模型组比较,沙苑子总黄酮可降低模型动物血清中OCN、P、BALP、TPACP5b、NTX、CTX-I水平,升高血清Ca、OPG水平,增加模型大鼠股骨中骨密度及骨力学强度,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:沙苑子总黄酮可有效调节去势大鼠骨质疏松模型血清钙、磷水平、骨代谢及生物力学,改善骨质疏松病情。