基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P<0.01),细胞数量减少、间隙增大,凋亡小体增多,凋亡率升高(P<0.01),Bax/Bcl-2(P<0.01)、cleaved caspase-3(P<0.01)、Cyt-c(P<0.05)、FADD、cleaved caspase-12的表达量均升高,核内凋亡蛋白Cyt-c表达增加;TFE+RA组荧光减弱,逆转了TFE诱导的线粒体途径凋亡。结论TFE能明显抑制人乳腺癌细胞的增殖,抑制自噬时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

藤茶总黄酮提取工艺及纯化研究进展

藤茶具有重要的药用价值,尤其是藤茶总黄酮具有调节人体免疫功能、降血压、降血脂等作用,其中黄酮类化合物的提取方法已成为研究热点。本文综述了近年来藤茶总黄酮提取技术和分离纯化的研究进展,为更好地开发利用藤茶总黄酮的药用价值提供依据。

响应面法优化藤茶总黄酮的提取工艺

目的优化超声波辅助乙醇提取藤茶总黄酮的工艺条件,提高藤茶总黄酮的提取效率。方法在单因素的基础上,应用Box-Behnken中心组合法进行4因素3水平的试验设计,研究乙醇浓度、超声波处理温度、超声波处理时间、液料比对总黄酮得率的影响。结果藤茶总黄酮的最优超声波辅助乙醇提取条件为:乙醇浓度67%(V:V),超声波处理温度58℃,超声波处理时间28 min,液料比22.5:1(V:m)。模型预测结果显示藤茶总黄酮得率最大为38.45%,经过验证,实际得率为38.74%,接近预测值,说明预测值和真实值之间有很好的拟合性,用响应面优化法得到的结果科学有效,有较高的参考价值。结论采用超声波辅助提取法,总黄酮得率高,用时少,具有很好的应用前景。

大叶蛇葡萄不同提取物总黄酮含量测定

目的比较不同提取方法所得大叶蛇葡萄提取物的总黄酮含量。方法分别用乙醇加热回流法和渗漉法提取大叶蛇葡萄总黄酮,以蛇葡萄素为对照品,采用紫外分光光度法,在311 nm波长处测定。结果平均加样回收率为99.36%,RSD为1.59%,回流法所得提取物总黄酮的含量为640.74 mg.g-1;渗漉法所得提取物总黄酮含量为672.38mg.g-1。结论该测定方法操作简单,准确可靠,可作为大叶蛇葡萄提取物总黄酮的含量测定方法。渗漉法所得提取物中总黄酮含量略高于回流法。

霉茶总黄酮对自发性高血压大鼠心脏的保护作用及机制研究

目的:观察霉茶总黄酮对自发性高血压大鼠(SHR)心脏的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将50只SHR按体质量随机分为模型组、复方罗布麻片组(阳性药物,50 mg/kg)和霉茶总黄酮低、中、高剂量组(90、180、360 mg/kg),每组10只。各给药组大鼠ig相应药物,模型组大鼠ig等体积蒸馏水,每天2次,连续7周。测定大鼠血压并计算大鼠心脏指数;采用苏木精-伊红染色法观察心脏组织形态结构变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测心脏组织中血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮合成酶(CYP11B2)m RNA的表达。结果:霉茶总黄酮可明显降低SHR血压(P<0.01),改善SHR心脏组织细胞形态不规则、固缩和组织纤维增生等炎性病变,降低SHR心脏组织中ACE、AngⅡ、CYP11B2 m RNA的表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:霉茶总黄酮对SHR心脏有一定的保护作用,其机制可能与下调心脏组织中ACE、AngⅡ和CYP11B2 m RNA表达有关。

微波辅助法提取藤茶黄酮工艺优化

[目的]提高藤茶中总黄酮提取率。[方法]以藤茶为原料,以水为溶剂,采用微波辅助提取的方式,研究了浸提温度、浸提时间、微波辅助加热时间、微波加热功率4个单因素对藤茶总黄酮提取率的影响,并在单因素的基础上进行正交试验得到藤茶总黄酮提取的最佳工艺条件。[结果]在100℃的温度下浸提时间60 min,中高档微波加热120 s的条件下,藤茶总黄酮的得率最高。[结论]优化微波辅助法工艺能提高藤茶黄酮提取率。

霉茶总黄酮提取物对自发性高血压大鼠胸主动脉重构的影响

目的研究霉茶总黄酮提取物对自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉重构的影响及其机制。方法将SHR随机分为模型组,总黄酮提取物低剂量组(90 mg·kg-1)、中剂量组(180 mg·kg-1)、高剂量组(360 mg·kg-1)和复方罗布麻片组(50 mg·kg-1)。每日给药2次,连续7周,末次给药前禁食12h,末次给药后1 h,处死大鼠,取胸主动脉。部分胸主动脉做病理组织学检查,部分胸主动脉测定其组织ACE、AngⅡ、C-myc、Bcl-2、P27KIP1基因的表达。结果霉茶总黄酮提取物中、高剂量能明显降低血管中膜厚度与管腔内径比值,霉茶总黄酮提取物能下调血管组织中ACE、AngⅡ、C-myc、Bcl-2m RNA表达,同时上调P27KIP1基因表达。结论霉茶总黄酮提取物能抑制SHR的血管重构,其机制与调节RAS系统相关基因及VSMCs增殖相关基因有关。

大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量测定的研究

目的建立大叶蛇葡萄胶囊中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法进行测定,样品与AlCl3反应,形成络合物,测定波长310 nm。结果以蛇葡萄素为对照,建立的含量测定方法在0.004～0.012 mg.ml-1范围内,溶液吸收度值和蛇葡萄素浓度呈良好线性关系(r=0.999 6),平均加样回收率为98.05%,RSD为1.84%。结论该方法准确、可靠,可用于大叶蛇葡萄胶囊的质量控制。

藤茶总黄酮提取工艺优化与抗氧化活性物质基础研究

本文建立测定藤茶中总黄酮含量的紫外分光光度法,并对藤茶的水提工艺进行优化,在此基础上,研究藤茶的抗氧化活性物质基础。结果表明,直接测定法操作简便、快速、结果准确,可适用于藤茶总黄酮含量测定。采用传统浸提法,得到藤茶水提最佳工艺条件为料液比1∶40,提取2.0 h,提取2次。通过DPPH法对不同提取物自由基清除能力进行研究,发现藤茶水提物对DPPH自由基清除能力的强弱与黄酮含量呈正相关性。藤茶中主要的4种黄酮类单体化合物均有较强的清除作用,对DPPH自由基清除能力随着浓度的增加而增强,对DPPH自由基清除能力强弱为杨梅素>槲皮素>二氢杨梅素>维生素C>橙皮素。

大叶蛇葡萄总黄酮提取物的HPLC指纹图谱研究

目的建立大叶蛇葡萄总黄酮提取物的HPLC指纹图谱。方法用70%乙醇回流提取制备大叶蛇葡萄总黄酮提取物,采用RP-HPLC分析。色谱柱为Angilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长265 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。结果测定了11批大叶蛇葡萄总黄酮提取物的指纹图谱,标定了10个共有指纹峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。结论建立的大叶蛇葡萄总黄酮提取物的HPLC指纹图谱,为大叶蛇葡萄总黄酮提取物的质量控制提供了依据。