Optimization of the extraction process of total flavonoids from Trichosanthis Fructus by Box-Behnken response surface method combined with differential spectrophotometry

Objective:To optimize the extraction process of total flavones in Trichosanthis Fructus(composed of Trichosanthis pericarpium and Trichosanthis semen in certain proportion).Methods:The effects of the mixture ratio of Trichosanthis pericarpium and Trichosanthis semen,ethanol concentration,ultrasonic extraction time and extraction temperature on the extraction rate of total flavonoids in Trichosanthis Fructus were investigated.The extraction process of total flavonoids in Trichosanthis Fructus was optimized by Box-Behnken response surface method combined with differential spectrophotometry.Results:The optimum extraction conditions of total flavonoids in Trichosanthis Fructus were as follows:The mixture ratio of Trichosanthis pericarpium and Trichosanthis semen was 4:6,the ethanol concentration was 70%,the ultrasonic extraction time was 60min and the extraction temperature was 40℃.Conclusion:Box-Behnken response surface method combined with differential spectrophotometry can optimize the extraction process of total flavonoids from Trichosanthis Fructus,which can provide reference for the extraction and application of total flavonoids in Trichosanthis Fructus.

大孔树脂吸附法纯化酸枣仁总黄酮的工艺研究

利用7种大孔树脂对酸枣仁的总黄酮进行纯化,依据其吸附能力及解吸能力,选出最佳的大孔树脂型号,研究了上样液浓度、上样速度、上样液体积对大孔树脂吸附率的影响以及洗脱剂类型、洗脱剂浓度、洗脱速度、洗脱剂体积对大孔树脂解吸率的影响,采用正交试验对酸枣仁总黄酮的纯化工艺进行了优化。试验结果表明,DM301大孔树脂纯化酸枣仁总黄酮效果最佳,在上样液浓度为0.1 mg/mL、上样速度为1 BV/h、上样液体积为30 mL、洗脱剂为丙酮、洗脱剂浓度为100%、洗脱速度为2 BV/h、洗脱剂体积为55 mL的条件下,获得的酸枣仁总黄酮纯度最高,相较于纯化前提高了约1.1倍。

菟丝子总黄酮对PCOS大鼠内分泌代谢的影响及机制

目的 探讨菟丝子总黄酮(total flavonoids from semen cuscutae,TFSC)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠内分泌的影响及可能的机制。方法 取80只大鼠,64只采用来曲唑溶液灌胃构建PCOS大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、TFSC低剂量组、TFSC中剂量组和TFSC高剂量组,每组16只,其余16只为正常组。建模成功后TFSC低剂量组、TFSC中剂量组和TFSC高剂量组按照5 mL·kg^(-1)体质量分别用35、70和140 mg·kg^(-1)的TFSC灌胃,正常组和模型组大鼠用等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续14 d。比较各组大鼠体质量、卵巢指数、子宫指数、性激素和甲状腺激素水平,卵巢组织形态学差异、血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平以及卵巢组织中Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)和磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB P65,p-NF-κB P65)蛋白表达水平的差异。结果 与模型组相比,TFSC各剂量组大鼠体质量、卵巢指数、睾酮激素(testosterone, T)、促黄体生成激素(luteinizing hormone, LH)、抗谬勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)水平,TNF-α、IL-6水平以及TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);子宫指数、雌二醇(estradiol, E2)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(free triiothyrogenine, FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine, FT4)、三碘甲腺原氨酸(triiodotyronine, T3)、甲状腺激素(thyroxine, T4)水平和黄体、成熟卵泡数均显著增加(P<0.05);大鼠体质量、卵巢指数,T、LH、AMH和TSH水平,TNF-α、IL-6水平,TLR4和p-NF-κB P65蛋白的表达水平与TFSC呈剂量依赖性降低,子宫指数、E2、FSH、FT3、FT4、T3、T4、黄体和成熟卵泡数与TFSC呈剂量依赖性增加(P<0.05)。结论 TFSC可有效改善PCOS大鼠内分泌代谢,改善排卵功能障碍,进而恢复卵巢形态和功能,可能与调控TLR4/NF-κB P65信号通路、降低炎症反应有关。

菟丝子总黄酮中拟雌激素作用的活性成分筛选

目的筛选菟丝子总黄酮中拟雌激素作用的活性成分。方法以小鼠子宫系数和子宫内膜厚度为评价指标,评估10批菟丝子总黄酮的拟雌激素作用,并建立其指纹图谱,标定共有峰;采用双变量相关性分析和灰色关联度分析对共有峰和上述两种指标的谱效关系进行分析,筛选拟雌激素作用的活性成分,并采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对活性成分进行表征。结果10批菟丝子总黄酮的拟雌激素作用均较好。菟丝子总黄酮正、负离子模式下分别得到28、33个共有峰,其中正离子模式下的7、10、12~16、26号峰及负离子模式下2、5、8、9、12、16、19、22~26号峰所代表的成分与菟丝子总黄酮拟雌激素作用高度相关。进一步鉴定发现,菟丝子总黄酮拟雌激素作用的活性成分分别为5,7,3′,4′-四甲氧基黄酮、6-O-(反式)对香豆酰基-呋喃果糖-(2→1)-吡喃葡萄糖苷、芦丁、山柰酚-3,7-双葡萄糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、金丝桃苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素、芹菜素、山柰酚、异鼠李素、杜鹃黄素、异槲皮苷、山柰酚-3-呋喃阿拉伯糖苷、2,6-十八碳二炔酸。结论本研究从菟丝子总黄酮中筛选出16种拟雌激素作用的化学成分,可为植物雌激素类药物的开发提供参考。

基于代谢组学木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤作用机制研究

目的初步阐释木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤的作用机制,为木蝴蝶总黄酮作为抗肝癌药物的开发和临床应用提供实验依据。方法采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型,随机分为空白组,模型组,阳性对照组,木蝴蝶总黄酮高、中、低剂量组,从造模第6周开始给药,每日1次,连续10周。第17周眼球取血,分离各组血浆。采用HPLC-QTOF-MS联用技术分析木蝴蝶总黄酮干预后各组大鼠血浆中代谢物的变化,利用Agilent Mass Profiler Professional 12.6软件结合相关数据库进行主成分分析(PCA)、差异代谢物分析及代谢通路分析。结果与模型组比较,木蝴蝶总黄酮干预后共有285种代谢物发生变化,其中上调的有41种,下调的有244种。主要与色氨酸代谢、丝氨酸代谢、胆汁酸合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢等途径有关。结论木蝴蝶总黄酮发挥抗肝肿瘤作用可能与调节氨基酸代谢、脂肪酸代谢、胆汁酸合成等代谢途径有关。

酸枣仁总黄酮抗抑郁作用的实验研究

[目的]研究酸枣仁总黄酮对行为绝望小鼠抑郁模型的影响[。方法]采用小鼠强迫游泳实验和悬尾实验等抑郁模型,小鼠行为绝望的不动时间作为指标,考察酸枣仁总黄酮抗抑郁活性。[结果]酸枣仁总黄酮低、中、高剂量组均能减少小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);与阳性药组比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]酸枣仁总黄酮具有显著的抗小鼠实验性抑郁作用。

响应面分析法优化荔枝核总黄酮提取工艺的研究

利用响应面分析法优化荔枝核总黄酮提取工艺。以提取时间,提取温度及乙醇浓度为响应因子,总黄酮提取得率为响应值,做三因素三水平响应面分析,经方差分析响应面模型与验证模型二者差异不显著。

黄芪总黄酮抗突变作用实验研究

目的 :探讨黄芪总黄酮 (TFA)是否具有抗突变作用。方法 :设 3个浓度的药物组和突变物对照组 ,采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验、小鼠睾丸精子畸变实验和体外哺乳类动物细胞V79/HGPRT基因突变试验。结果 :与突变物对照组比较 ,TFA不影响小鼠体重增长 ;高剂量组的TFA可明显抑制环磷酰胺诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生和体外培养的哺乳类动物细胞V79/HGPRT基因突变 ,但对丝裂酶素C诱发的小鼠睾丸染色体畸变无统计学抑制作用。结论 :TFA具有一定的抗突变作用。

菟丝子总黄酮提取工艺的研究

优选水浴振荡提取方法,以菟丝子总黄酮质量分数为考察指标,研究提取溶剂浓度、提取温度、固液比、提取时间、提取次数等因素对总黄酮质量分数的影响.通过正交试验,确定菟丝子总黄酮提取的最佳工艺条件为:提取温度60℃,固液比1∶14,乙醇体积分数55%,提取时间2h,提取次数2次.

基于全时段多波长融合指纹图谱的中药木蝴蝶中总黄酮类成分研究

目的利用自主研发的全时段多波长融合软件,建立中药木蝴蝶有效组分的指纹图谱。方法采用高效液相色谱法,Eclipse Plus C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),0.1%甲酸水溶液(A),流动相为乙腈(B),进行梯度洗脱(0~10 min,15%~57%B;10~15 min,57%~65%B),柱温:30℃,检测波长:256、280、300、320 nm,流速为0.4 m L·min^(-1)。结果不同产地的中药木蝴蝶指纹图谱与参照图谱相比相似度均>0.9,但是各产地有一定的差异性,根据聚类分析大体可分为3类,其中大理、广西、亳州、四川为一类,昆明、贵州为一类,丽江、湖南为一类。结论建立了中药木蝴蝶有效组分全时段多波长融合指纹图谱,经方法学考察,该方法简便、准确、重复性好,可以为中药木蝴蝶的质量控制提供依据。

酸枣仁不同炮制品及炒酸枣仁中总黄酮与总皂苷的镇静催眠作用比较

目的:研究比较酸枣仁生品和炒品及总黄酮和总皂苷的镇静催眠作用。方法:采用小鼠活动记数法和协同阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠法。结果:酸枣仁生品以20g/kg剂量及酸枣仁炒品以10g/kg剂量灌胃给药,可显著减少小鼠自发活动次数;酸枣仁生品和炒品以10g/kg和20g/kg剂量灌胃给药均可协同阈下剂量戊巴比妥钠使入睡小鼠数目显著增多。总皂苷以240mg/kg和480mg/kg剂量给药可显著减少小鼠自发活动次数,以480mg/kg剂量给药可显著增加阈下剂量戊巴比妥钠所致翻正反射消失小鼠数;总黄酮以300mg/kg剂量给药可显著减少小鼠自发活动次数、增加阈下剂量戊巴比妥钠所致翻正反射消失小鼠数。结论:酸枣仁生品和炒品均有抑制小鼠自发活动及协同戊巴比妥钠镇静催眠作用,且炒酸枣仁中总黄酮和总皂苷均有抑制小鼠自发活动和协同戊巴比妥钠镇静催眠作用。

菟丝子提取物含药血清对人早孕滋养层细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨菟丝子提取物的含药血清对正常人早孕细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB)增殖及凋亡的调节作用。方法雌性SD大鼠随机分为8组,每组5只,包括空白血清对照组,减味寿胎丸组,菟丝子总提物高、低剂量组,菟丝子总黄酮高、低剂量组,菟丝子总多糖高、低剂量组,各组灌胃予对应药物,2次/天,连续3 d后腹主动脉采血分离血清。上述空白血清或各提取物血清以不同体积(5%、10%、20%)分别培养CTB细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期。结果 MTT结果显示,各提取物高、低浓度含药血清培养细胞48 h后,吸光度值均一定程度增加,除5%菟丝子总提物高剂量组及5%菟丝子总多糖低剂量组外,余各组5%、10%、20%含药血清与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。细胞增殖活性随含药血清浓度升高而增加,呈明显剂量依赖性。流式细胞仪分析结果显示,与空白血清组比较,各组S期细胞百分比均显著增加(P<0.05,P<0.01);而G2/M期细胞百分比显著减少(P<0.05,P<0.01)。干预48 h后,细胞周期分布变化趋势与24 h一致,而且变化更明显。结论菟丝子各提取物高、低剂量含药血清均可增加CTB细胞的增殖活性,降低细胞凋亡的发生。药效最佳剂量分别为:菟丝子总提物低剂量、总黄酮高剂量及总多糖高剂量。

优化枳椇子的提取工艺

目的 确定枳椇子干浸膏的最佳提取工艺?椒ā∫愿山嗟寐屎透山嘀凶芑仆课副?,对索式提取器提取的方法、渗滤法和浸渍法进行筛选。结果 渗滤法出膏率和干浸膏中黄酮含量最高,索式提取次之,浸渍法出膏率和干浸膏中黄酮含量最低。结论 渗滤法提取干浸膏简单易行,成本低廉,适合批量生产。

紫外分光光度法测定酸枣仁中总黄酮的含量

AIM: To determine the total flavonoids in \%Semen Ziziphi Spinosae.\% METHOD: Using detection wavelength at 335 nm and spinosin as standard, a simple and reproducible UV spectrophotometry was developed to determine total flavonoids in \%Semen Ziziphi Spinosae\% from different sources. CONCLUSION: This method proved to be feasible for evaluating the quality of \%Semen Ziziphi Spinosae\%.

响应面法优化野生酸枣仁中总黄酮的提取工艺

本试验采用响应面法优化超声波辅助提取野生酸枣仁中总黄酮的提取工艺。通过单因素试验考察了乙醇浓度、浸泡时间、超声温度和超声时间对酸枣仁总黄酮提取率的影响,并在此基础上通过响应面法获得野生酸枣仁总黄酮的最佳提取工艺。结果表明,野生酸枣仁总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度64.46%、浸泡时间12 h、超声时间44.02 min、超声温度62.86℃,在此工艺条件下酸枣仁总黄酮理论提取率为1.00984%,实际总黄酮提取率为0.9269%。

不同提取方法对菟丝子总黄酮和金属元素锌的含量比较研究

分别采用常规回流提取法、石油醚脱脂-索氏提取法和微波辅助萃取法对中药菟丝子进行提取;以芦丁为对照品,紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含量;原子吸收光谱法测定提取液中金属元素锌的含量,以总黄酮的含量和金属元素锌的含量为考察指标,明确金属元素锌的提取与黄酮类总含量之间的关系。结果表明,3种提取方法中,微波辅助萃取法具有高效、省时等优点,提取效果最好,锌元素的含量与总黄酮的含量成正比。

枳椇子中总黄酮的含量测定

目的：测定江西枳椇子中总黄酮的含量。方法：以槲皮素为对照品，用紫外分光光度法于256nm处测定江西枳椇子中总黄酮的含量。结果：江西枳椇子中总黄酮的质量分数为1．96％，RSD=0．85％（n=5）；回归方程y=75．3x-0．021，2-10μg·mL^-1（r=0．9998）范围内线性关系良好，平均回收率为100．6％。结论：方法简便易行，准确可靠，可作为枳椇子总黄酮质量控制的方法，为开发利用枳椇子提供了科学依据。

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化血小板衍生生长因子、肿瘤坏死因子的影响

【目的】探讨荔枝核总黄酮(Semen Litchi total flavonoids,SLTF)对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)及肿瘤坏死因子(TNF)的影响及其作用机制。【方法】选用SD雄性大鼠60只,随机分为空白组、模型组、水飞蓟宾(SIL)组(50 mg·kg-1·d-1)、SLTF高剂量组(400 mg·kg-1·d-1)、SLTF中剂量组(200mg·kg-1·d-1)、SLTF低剂量组(100 mg·kg-1·d-1)6组。采用DMN腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,造模4周,造模同时给药干预,6周后处死大鼠,观察大鼠肝纤维化水平和肝功能指标,采用放射免疫法测定各组大鼠血清中层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平,采用苏木精—伊红(HE)染色法和Masson染色观察大鼠肝组织镜下病理变化及纤维化水平,采用PCR法检测各组大鼠肝组织血小板衍生生长因子(PDGF)及肿瘤坏死因子(TNF)mRNA表达水平变化。【结果】HE和Masson染色显示SIL组和SLTF高、中剂量组镜下肝组织纤维化程度较模型组明显降低,肝小叶结构趋于正常;肝功能指标和肝纤3项LN、HA、PCⅢ检测结果显示SIL组和SLTF高、中剂量组肝损伤和肝纤维化程度较模型组和SLTF低剂量组显著减轻;PCR法检测结果显示:SIL组和SLTF高、中剂量组PDGF、TNF-α mRNA表达较模型组显著降低。提示SIL组和SLTF高、中剂量组均有明显的抗大鼠肝纤维化的作用,SLTF高剂量组疗效优于SIL组,差异具有统计学意义(P<0.05);SLTF中剂量组和SIL组疗效相当,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】SLTF可以下调肝纤维化大鼠的PDGF、TNF-α mRNA表达水平,具有一定的抗大鼠肝纤维化作用。

基于迁移芯片木蝴蝶总黄酮类对肝癌细胞迁移的影响研究

目的研究木蝴蝶总黄酮体外抑制肝肿瘤细胞迁移作用及其可能的作用机制。方法应用微流控芯片技术开展木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞迁移的影响研究,采用RT-PCR、Western blot法检测木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞相关基因和蛋白质表达的影响。结果微流控芯片结果显示,木蝴蝶总黄酮对肝癌细胞24 h相对迁移率为16.59%,48 h相对迁移率为8.06%;RT-PCR和Western blot结果表明,木蝴蝶总黄酮能降低p38 mRNA和蛋白质的表达(P<0.05),能降低p-p38蛋白质的表达(P<0.01)。结论木蝴蝶总黄酮在体外具有显著抑制肿瘤细胞迁移的作用,其作用机制可能与减少p-p38蛋白质的表达,即减少p38蛋白的活化有关。

酸枣仁药材总黄酮提取工艺研究

目的:优化酸枣仁总黄酮醇提取工艺。方法:以浸膏收率和总黄酮含量为指标,采用正交实验设计,考察乙醇用量、乙醇浓度、提取时间和提取次数,优化酸枣仁中总黄酮的醇提取工艺条件。结果:优化的醇提取条件为加乙醇量与酸枣仁量之比为9∶1,乙醇浓度为60%,提取时间1 h,提取2次。结论:该提取工艺合理,方法简便,可作为酸枣仁总黄酮醇提取生产工艺的参考。